SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用，通过抑制患者肺黏液腺癌细胞中SPDEF基因的表达量，可以增强患者对顺铂治疗的敏感性。本发明专利技术同时发现了一种联合抗肺黏液腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括：SPDEF基因抑制剂和顺铂，相比于单一使用顺铂作为抗癌药物，SPDEF基因抑制剂和顺铂联用能够进一步促进肺黏液腺癌细胞的凋亡。

【技术实现步骤摘要】
SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用。
技术介绍
肺癌是当今发生率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。在肺癌的发病类型中，非小细胞肺癌(NSCLC，包括肺腺癌、肺鳞癌和大细胞癌)为最常见的肺癌病理类型，占肺癌总数的70％以上，其中肺腺癌的比例又呈上升趋势。肺黏液腺癌是一种独特的肺腺癌亚型，约占所有肺腺癌的5％。与其他肺腺癌不同，肺黏液腺癌的治疗选择有限，大多数肺黏液腺癌患者具有“KRAS”突变和较差的疗效，患者的生活质量及生存预后很差。因此，开发新的治疗靶点和药物仍然是改善肺黏液腺癌患者预后的重要途径。含SAM尖端结构域的E26转化特异性因子(SAMpointeddomaincintainingEtstranscriptionfactor,SPDEF)是Ets转录因子家族的成员之一。SPDEF在肺癌中过表达并已被鉴定为肺黏液腺癌的标志性基因。现有研究报告称，在转基因小鼠模型中，SPDEF与“KRASG12D”共同诱导了恶性肺黏液腺癌的形成，SPDEF基因ID：25803。过表达SPDEF与促进杯状细胞分化，介导了肺肿瘤的侵袭、转移和增殖，表明SPDEF在肺黏液腺癌的发生发展中发挥了重要作用。因此，抑制SPDEF表达可能是治疗肺黏液腺癌的一种有效方法。白藜芦醇(trans-3,5,4'-trihydroxystilbene,Resveratrol)是一种多酚，多存在于多种植物中，如虎杖和葡萄。目前尚未见白藜芦醇在肺黏液腺癌中的应用的报道，因此我们对白藜芦醇是否可以作为治疗肺黏液腺癌的潜在药物进行了进一步的研究，以期为肺黏液腺癌的治疗提供新的治疗方案。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的用途，针对于肺黏液腺癌顺铂不敏感患者，通过降低肺黏液腺癌细胞中SPDEF基因的表达量，可以增强患者对顺铂治疗的敏感性。为了达到上述目的，本专利技术提供了SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用。可选的，所述抑制剂包括：白藜芦醇。可选的，所述抑制剂包括：靶向SPDEF基因启动子的抑制剂、靶向SPDEF基因转录产物的抑制剂、靶向SPDEF基因翻译产物的抑制剂中的至少一种。可选的，所述靶向SPDEF基因转录产物的抑制剂包括：shRNA、siRNA、dsRNA、cDNA、miRNA中的至少一种。可选的，所述siRNA序列选自：5'-UCAAGGAGUUGCUACUCAATT-3'。本专利技术还提供了一种联合抗肺黏液腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括：SPDEF基因抑制剂和顺铂。可选的，所述SPDEF基因抑制剂包括：白藜芦醇。可选的，所述SPDEF基因抑制剂包括：靶向SPDEF基因转录产物的siRNA。本专利技术还提供了检测SPDEF基因表达的引物在鉴定肺黏液腺癌细胞对顺铂敏感性中的应用。可选的，所述引物序列如下：正向引物为：5'-CCTCAAGGAGTTGCTACTCAAG-3'；反向引物为：5'-CTGGGAGATGTCTGGCTTCC-3'。相比于现有技术，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术提供了SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用，通过降低患者肺黏液腺癌细胞中SPDEF基因的表达量，可以增强患者对顺铂治疗的敏感性。(2)本专利技术提供了能够抑制SPDEF基因表达的药物——白藜芦醇，白藜芦醇能够通过抑制SPDEF基因的启动子活性，抑制SPDEF基因的表达，增强肺黏液腺癌患者对顺铂的敏感性。(3)本专利技术提供了一种联合抗肺黏液腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括：SPDEF基因抑制剂和顺铂，相比于单一使用顺铂作为抗癌药物，SPDEF基因抑制剂和顺铂联用能够进一步促进肺黏液腺癌细胞的凋亡。附图说明图1为TCGA数据库中，肺粘液腺癌细胞和肺腺癌细胞SPDEF基因mRNA相对表达量的对比图。图2为慢病毒处理后，A549和H292细胞株SPDEFmRNA表达增加图。图3为顺铂处理后，A549SPDEFover细胞株和A549NCover细胞株活细胞量的比较图。图4为流式细胞仪检测顺铂处理后A549SPDEFover细胞和A549NCover细胞死亡率的比较图。图5为顺铂处理后，A549SPDEFover细胞和A549NCover细胞死亡率的比较图。图6为A549siSPDEF细胞和A549siNC细胞SPDEF基因mRNA相对表达量的对比图。图7为顺铂处理后，A549siSPDEF细胞株和A549siNC细胞株活细胞量的比较图。图8为顺铂处理后，H292SPDEFover细胞株和H292NCover细胞株活细胞量的比较图。图9为25μM和50μM白藜芦醇处理后，A549细胞SPDEF基因mRNA相对表达量的对比图。图10为25μM和50μM白藜芦醇处理后，使用Westernblot检测A549细胞SPDEF蛋白表达量的对比图。图11为25μM和50μM白藜芦醇处理后，A549细胞SPDEF蛋白表达量的对比图。图12为白藜芦醇处理pGL3-SPDEF启动子载体转染后的A549细胞荧光素酶活性的对比图。图13为流式细胞仪检测DMSO、白藜芦醇50μM、顺铂20μM、以及白藜芦醇50μM和顺铂20μM联用作用后，A549细胞凋亡率的对比图。图14为DMSO、白藜芦醇50μM、顺铂20μM、以及白藜芦醇50μM和顺铂20μM联用作用后，A549细胞凋亡率的对比图。图15为DMSO、白藜芦醇50μM、顺铂20μM、以及白藜芦醇50μM和顺铂20μM联用作用后，A549细胞活细胞量的对比图。图16为DMSO、白藜芦醇50μM、顺铂20μM、以及白藜芦醇50μM和顺铂20μM联用作用后，A549SPDEFover细胞和A549NCover细胞活细胞量的对比图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本专利技术的技术方案做进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实验材料：人肺腺癌细胞A549和H292细胞系购自上海中国科学院生命研究中心，过表达SPDEF慢病毒购自中国吉凯公司，AntiSPDEF(#11467-1-AP)购自中国Proteintech公司，顺铂购自美国Sigma公司，CCK-8试剂盒和AnnexinV-633试剂盒购自日本DOjindo公司，Trizol购自中国TaK本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.SPDEF基因抑制剂在制备用于增强肺黏液腺癌细胞对顺铂的敏感性的药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SPDEF基因抑制剂包括：白藜芦醇。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SPDEF基因抑制剂包括：靶向SPDEF基因启动子的抑制剂、靶向SPDEF基因转录产物的抑制剂、靶向SPDEF基因翻译产物的抑制剂中的至少一种。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述靶向SPDEF基因转录产物的抑制剂包括：shRNA、siRNA、dsRNA、cDNA、miRNA中的至少一种。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述siRNA序列选自：
5'-UCAAGGAGUUGCUACUCAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪振华，王雄彪，林玉华，
申请(专利权)人：上海市普陀区中心医院，
类型：发明
国别省市：上海;31