一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法。一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法，包括如下步骤:取待提取衣藻细胞消化细胞壁，得到悬浮液1；将悬浮液1中原生质体富集；将原生质体破碎后分离叶绿体。步骤(1)中的消化细胞壁的方法为：将待提取衣藻细胞悬浮于细胞壁酶解缓冲液中，消化的条件为：23‑25℃下，避光10min以上；可选的，还包括终止消化细胞壁的步骤。实验证明，本发明专利技术方法操作简单，叶绿体RNA中胞质RNA污染少，纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法。
技术介绍
叶绿体作为独特的半自主性细胞器，拥有一套独立的基因组，在其基质中进行DNA复制、转录、蛋白翻译等一系列有限的遗传活动。但是该遗传系统的自主程度有限，与核遗传系统存在着密切的生物学调控机制。因此，提取分离获得高纯度的叶绿体RNA，能为细胞器的RNA研究提供有效的实验材料，对于分析叶绿体内各项生理活动及了解相关分子调控机制具有十分重要的意义。由于叶绿体在莱茵衣藻细胞中体积占比较大，尤其靠近细胞膜。在破碎细胞进行细胞结构分离过程中极有可能会使细胞内的叶绿体造成严重的损害。同时叶绿体对温度、酸碱度、渗透压等外界环境极其敏感，在提取过程保持低温、pH偏高、等渗透压的稳定外环境无疑增加了提取分离的难度。因此相比其他细胞结构，提取分离到完整且具有生物活性的叶绿体十分困难。目前发表的关于莱茵衣藻叶绿体的分离方法大多直接选用莱茵衣藻的细胞壁缺失型突变体例如CC-400和CC-4326等作为实验藻株。而细胞壁完整的莱茵衣藻需进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法，其特征在于，包括如下步骤:/n(1)取待提取衣藻细胞消化细胞壁，得到悬浮液1；/n(2)将悬浮液1中原生质体富集；/n(3)将原生质体破碎后分离叶绿体。/n

【技术特征摘要】
20210426 CN 20211045600401.一种衣藻叶绿体以及叶绿体RNA提取的方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)取待提取衣藻细胞消化细胞壁，得到悬浮液1；
(2)将悬浮液1中原生质体富集；
(3)将原生质体破碎后分离叶绿体。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的消化细胞壁的方法为：将待提取衣藻细胞悬浮于细胞壁酶解缓冲液中，消化的条件为：23-25℃下，避光10min以上；可选的，还包括终止消化细胞壁的步骤。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中终止消化细胞壁的方法为在悬浮液1中加入酶解终止缓冲液。


4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)还包括将所得原生质体用原生质体等渗缓冲液重悬浮，得悬浮液2。


5.根据权利要求4任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)中将原生质体破碎的方法为：
S1:将悬浮液2离心，收集细胞沉淀；
S2：将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李辉，尹涛，杨雪珊，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44