一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法技术

本发明专利技术公开一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法，所述快速生物制品核酸释放试剂盒，包括：Buffer A、Buffer B；所述Buffer A为含有氢氧化钾、氯化钾、壬基酚聚氧乙烯醚、硫酸铵的水溶液；所述Buffer B为含有牛血清白蛋白、二甲基亚砜、甘油、RNA酶抑制剂、杀菌防腐剂、酚红指示剂的Tris‑HCl缓冲液。本发明专利技术中加入的杀菌防腐剂可以有效抑制微生物生长从而使得能够长期保存；待处理的生物制品保存液或预处理液样本无需进行繁琐的分离纯化，本发明专利技术的快速生物制品核酸释放试剂盒中的试剂直接与样本混合即可完成核酸裂解释放，极大缩短了时间。

【技术实现步骤摘要】
一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法。
技术介绍
由于具有的高灵敏度、高通量和较为经济的成本，分子生物学检测普遍地被应用在各种食源性致病菌，基因检测以及疾控防疫病原体的诊断中。核酸扩增策略是分子生物学领域常用的信号放大技术，从最初的PCR技术，截止到目前已经发展出qPCR以及等温扩增技术(RCA，SDA，LAMP，RPA)等成功商用化的技术方案。而以上核酸检测的关键一步就是核酸的获得，一方面，常用的核酸提取方法包括酚仿抽提，离心柱法，磁珠法等，酚仿抽提核酸样品质量高，但效率低且使用有毒刺激性试剂，不环保；固相载体离心柱法目前主要用于科研实验室中，磁珠法易于实现自动化，正在进一步取代离心柱法，但全自动核酸提取设备非常昂贵，且目前商业化试剂盒质量参差不齐，任重而道远。而另一方面，现行传统的生物制品样本预处理液主要有：基于Hank's基质，胍盐，强碱，PBS，生理盐水，培养液等预处理液。受其他因素的影响，以上处理液保存病毒有效期只有数个小时，之后微生物及病毒就无法再维持完整的结构形态从而损失拷贝数和滴度，进而降低微生物及病毒的核酸检测效率，同时，现有的大多数处理液没有抗菌功能，时间长了，容易滋生细菌或真菌造成试剂变质，加速核酸降解，所以很难用于生物制品样本的长期保存与核酸检测。因此，本领域需求一种能够高效释放处理生物制品样本，同时与下游核酸检测方案兼容性好且广谱抑菌的样本预处理液。因此，现有技术存在缺陷，需要改进。r>
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：提供一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法，能够高效释放生物样本的核酸，兼容下游核酸检测方案。本专利技术的技术方案如下：提供一种快速生物制品核酸释放试剂盒，包括：BufferA、BufferB；所述BufferA为含有氢氧化钾、氯化钾、壬基酚聚氧乙烯醚、硫酸铵的水溶液，其中，氢氧化钾浓度为0.1～0.4mol/L，氯化钾浓度为0.05～0.30mol/L，壬基酚聚氧乙烯醚浓度为0.5～2.0g/L，硫酸铵浓度为0.05～0.1mol/L；所述BufferA的PH为12-14；所述BufferB为含有牛血清白蛋白、二甲基亚砜、甘油、RNA酶抑制剂、杀菌防腐剂、酚红指示剂的Tris-HCl缓冲液，其中，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.5～1.0mol/L，牛血清白蛋白的浓度250～500μg/mL，二甲基亚砜的含量为5～10％v/v，甘油的含量为1～5％w/v，RNA酶抑制剂的浓度为1～2U/mL，杀菌防腐剂的浓度为0.01～0.025(v/v)，酚红指示剂浓度为50～200μmol/L；所述BufferB的pH为8.0-9.6。所述RNA酶抑制剂为Rnasin蛋白；所述杀菌防腐剂2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或者5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。所述BufferA分装25或50μL于0.1mL或0.2mL的Nucleicreleaser管，冻干机过夜处理，之后盖上管盖真空封装到袋子里，-20℃保存备用。本专利技术还提供一种核酸释放方法，基于前述的快速生物制品核酸释放试剂盒，所述方法包括以下步骤。S1：需要进行核酸提取的生物样本的保存液或预处理液：BufferA按照1:1-10的体积比在容器中混合，-10℃-100℃的条件下放置1-10分钟，获得混合样品。S2：将混合样品2000～5000转/分钟下短暂离心1-6秒，然后加入BufferB并混匀，其中，BufferB的体积为混合样品体积的1-10倍，然后2000～5000转/分钟下短暂离心1-6秒，即获得可用于后续检测的检测样品。所述容器为Nucleicreleaser管。所述检测样品在后续检测用量不超过反体系的总体积的10％。采用上述方案，本专利技术提供一种快速生物制品核酸释放试剂盒及核酸释放方法，加入的杀菌防腐剂可以有效抑制微生物生长从而使得能够长期保存；待处理的生物制品保存液或预处理液样本无需进行繁琐的分离纯化，本专利技术的快速生物制品核酸释放试剂盒中的试剂直接与样本混合即可完成核酸裂解释放，极大缩短了时间。此外，BufferB试剂的加入极大地改善了Nucleicreleaser管中核酸扩增抑制成分残留的负面影响，而且能够兼容市面上大部分的检测试剂盒，无需定制适配，获得的核酸样品可直接用于核酸扩增检测，方便应用。附图说明图1为deltaRnvscycle图；图2为deltaRnvstemperature图。具体实施方式以下结合附图和具体实施例，对本专利技术进行详细说明。本实施例提供一种快速生物制品核酸释放试剂盒，包括：BufferA、BufferB；所述BufferA为含有氢氧化钾、氯化钾、壬基酚聚氧乙烯醚、硫酸铵的水溶液，其中，氢氧化钾浓度为0.1～0.4mol/L，氯化钾浓度为0.05～0.30mol/L，壬基酚聚氧乙烯醚浓度为0.5～2.0g/L，硫酸铵浓度为0.05～0.1mol/L；所述BufferA的pH为12-14；所述BufferB为含有牛血清白蛋白、二甲基亚砜、甘油、RNA酶抑制剂、杀菌防腐剂、酚红指示剂的Tris-HCl缓冲液，其中，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.5～1.0mol/L，牛血清白蛋白的浓度250～500μg/mL，二甲基亚砜的含量为5～10％v/v，甘油的含量为1～5％w/v，RNA酶抑制剂的浓度为1～2U/mL，杀菌防腐剂的浓度为0.01～0.025(v/v)，酚红指示剂浓度为50～200μmol/L；所述BufferB的pH为8.0-9.6。所述RNA酶抑制剂为Rnasin蛋白；所述杀菌防腐剂2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或者5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。所述BufferA分装25或50μL于0.1mL或0.2mL的Nucleicreleaser管，冻干机过夜处理，之后盖上管盖真空封装到袋子里，-20℃保存备用。本专利技术还提供一种核酸释放方法，基于前述的快速生物制品核酸释放试剂盒，所述方法包括以下步骤。S1：需要进行核酸提取的生物样本的保存液或预处理液：BufferA按照1:1-10的体积比在容器中混合，-10℃-100℃的条件下放置1-10分钟，获得混合样品。S2：将混合样品在2000～5000转/分钟转速下短暂离心1-6秒，然后加入BufferB并混匀，其中，BufferB的体积为混合样品体积的1-10倍，然后在2000～5000转/分钟转速下短暂离心1-6秒，即获得可用于后续检测的检测样品。所述容器为Nucleicreleaser管。所述检测样品在后续检测用量不超过反体系的总体积的10％。在本实施例中，需要进行核酸提取的生物样本为牛全血样本。取检测样品5.0μL加入至45μL预混液qPCR反应体系，按照表1程序进行检测，qPCR反应体系如表2。表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速生物制品核酸释放试剂盒，其特征在于，包括：Buffer A、Buffer B；/n所述Buffer A为含有氢氧化钾、氯化钾、壬基酚聚氧乙烯醚、硫酸铵的水溶液，其中，氢氧化钾浓度为0.1～0.4mol/L，氯化钾浓度为0.05～0.30mol/L，壬基酚聚氧乙烯醚浓度为0.5～2.0g/L，硫酸铵浓度为0.05～0.1mol/L；所述Buffer A的PH为12-14；/n所述Buffer B为含有牛血清白蛋白、二甲基亚砜、甘油、RNA酶抑制剂、杀菌防腐剂、酚红指示剂的Tris-HCl缓冲液，其中，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.5～1.0mol/L，牛血清白蛋白的浓度250～500μg/mL，二甲基亚砜的含量为5～10％v/v，甘油的含量为1～5％w/v，RNA酶抑制剂的浓度为1～2U/mL，杀菌防腐剂的浓度为0.01～0.025(v/v)，酚红指示剂浓度为50～200μmol/L；所述Buffer B的pH为8.0-9.6。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速生物制品核酸释放试剂盒，其特征在于，包括：BufferA、BufferB；
所述BufferA为含有氢氧化钾、氯化钾、壬基酚聚氧乙烯醚、硫酸铵的水溶液，其中，氢氧化钾浓度为0.1～0.4mol/L，氯化钾浓度为0.05～0.30mol/L，壬基酚聚氧乙烯醚浓度为0.5～2.0g/L，硫酸铵浓度为0.05～0.1mol/L；所述BufferA的PH为12-14；
所述BufferB为含有牛血清白蛋白、二甲基亚砜、甘油、RNA酶抑制剂、杀菌防腐剂、酚红指示剂的Tris-HCl缓冲液，其中，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.5～1.0mol/L，牛血清白蛋白的浓度250～500μg/mL，二甲基亚砜的含量为5～10％v/v，甘油的含量为1～5％w/v，RNA酶抑制剂的浓度为1～2U/mL，杀菌防腐剂的浓度为0.01～0.025(v/v)，酚红指示剂浓度为50～200μmol/L；所述BufferB的pH为8.0-9.6。


2.根据权利要求1所述的一种快速生物制品核酸释放试剂盒，其特征在于，所述RNA酶抑制剂为Rnasin蛋白；所述杀菌防腐剂2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或者5-氯-2-甲基-4-异噻唑...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐勇军，刘小龙，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44