基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法技术

本发明专利技术公开了基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，通过家蚕实用品种雌与丝素重链基因突变品种雄杂交获得F

【技术实现步骤摘要】
基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法
本专利技术属于家蚕品种选育
，具体涉及一种基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法。
技术介绍
蚕丝蛋白是由家蚕分泌的一种天然高分子材料，主要由丝素蛋白和丝胶蛋白组成。家蚕吐丝时，一根蚕丝包含着两根并列的丝素纤维，外部包裹着起固定和粘附作用的丝胶蛋白。丝胶属于层状胶体蛋白，可以将丝素纤维粘合在一起形成牢固的茧壳结构，起到保护和胶着的作用，有利于蚕蛹的生长发育。因家蚕品种不同，丝胶蛋白与丝素蛋白所占比例略有不同。商业常用的家蚕品种中，丝胶通常约占蚕丝总重量的25％-30％，丝素纤维约占70％-75％，还有一些碳水化合物、蜡质、色素等杂质约占5％。传统丝绸工业主要利用的是丝素纤维，蚕丝经脱胶处理后，丝制品的手感和光泽会得到明显的改善，但丝胶蛋白常随着缫丝废水排放造成严重的环境污染和生物资源浪费。丝胶蛋白与丝素蛋白具有不同的氨基酸组成，在形态结构、力学性质和生物学性能等方面存在一定差异。丝素蛋白主要由非极性氨基酸组成，而丝胶蛋白主要由极性氨基酸组成，因此丝胶蛋白具有较好的溶解性。随着生物医学的迅速发展，丝胶蛋白因其具有良好的吸湿保湿、抗氧化、抑菌、抑制酪氨酸酶、促细胞黏附增殖、低免疫原性、降血糖等性能己成为新型天然生物医用材料的研究热点。在丝胶蛋白得到人们关注后，现己开发出一些丝胶含量占40％以上的特种家蚕品种。日本学者曾通过基因敲除技术培育出桑香新品种“Sericin-hopeSilkworm”，此品种属于丝素缺陷型桑蚕，丝胶含量达90％以上。中国农业科学院蚕业研究所保存的丝素重链基因自然突变型桑蚕Ser，所产的丝胶茧中丝胶含量达90％以上。基因敲除和自然突变形成的丝胶茧，与实用品种相比产量较低，需通过选育实用丝胶茧品种的方法提高丝胶产量，但不管是基因敲除还是自然突变，相较于正常丝素重链基因均表现为隐性，在实用丝胶茧近等基因系的选育过程中无法区分显性纯合和杂合型个体，使得实用丝胶茧近等基因系的选育进展缓慢。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，解决了家蚕实用丝胶茧品系选育过程中无法通过表现型确定基因型导致实用丝胶茧品系选育进展缓慢的问题。本专利技术所采用的技术方案是，基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，具体按照以下步骤实施：步骤1，用家蚕实用品种Fib-H+/Fib-H+雌与丝素重链基因突变品种Fib-H-/Fib-H-雄杂交，得到F1代Fib-H+/Fib-H-；步骤2，用F1代的雌Fib-H+/Fib-H-回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC1；BC1代存在两种基因型，分别为Fib-H+/Fib-H-和Fib-H+/Fib-H+；步骤3，用BC1代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC2，重复回交3代，最终得到BC5；步骤4，用25号染色体上的多态性SSR分子标记淘汰BC5代中基因型为Fib-H+/Fib-H+的个体，保留基因型为Fib-H+/Fib-H-的个体；用其余27条染色体上的SSR分子标记鉴定27条染色体均来源于家蚕实用品种的基因型为Fib-H+/Fib-H-的个体，淘汰其他任何形式的所有个体；步骤5，用步骤4中选出的雌、雄Fib-H+/Fib-H-个体自交，选育出的实用丝胶茧品系。本专利技术的特点还在于，步骤3中，具体为：用丝素重链基因所在的25号染色体上的多态性SSR分子标记确定BC1个体的基因型，保留基因型为Fib-H+/Fib-H-的个体，淘汰基因型为Fib-H+/Fib-H+的个体；用BC1代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC2，用BC2代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC3；用BC3代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC4；用BC4代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC5。步骤5中，用步骤4中的雌、雄Fib-H+/Fib-H-个体自交，自交后代存在3种基因型，分别为Fib-H+/Fib-H+、Fib-H+/Fib-H-和Fib-H-/Fib-H-，其中基因型为Fib-H-/Fib-H-的个体表现丝胶茧特性，即为选育出的实用丝胶茧品系。本专利技术的有益效果是：(1)可准确确定回交后代各条染色体的来源：本专利技术充分利用家蚕雌性染色体不发生交换的特性，在BC1至BC5的回交过程中，分别选择上一代的杂合型雌回交实用品种的雄，从而有效避免了在用SSR分子标记确定染色体来源时因染色体发生交换导致对染色体来源发生误判的情况发生。(2)性状保存度好：本专利技术选用的家蚕实用品种和丝素重链基因突变品种都是经过多代自交的高度纯合品种，每个品种的SSR分子标记序列都很稳定，有效避免了在确定回交后代各染色体来源时因SSR分子标记不稳定导致误判的情况发生，从而保证除丝素重链基因所在染色体(25号染色体)来源于丝素重链基因突变品种外，其余27对染色体均来源于实用品种，选育出来的丝胶茧实用品系保存了实用品种96％以上的遗传成分，其优良性状能较完整地保留下来，选育的丝胶茧品种既具有实用品种的优良特性，又可产丝胶茧，提高了丝胶茧的产量和质量。(3)可实现快速精准选育：传统的家蚕近等基因系选育方法多通过表型观测确定回交后代的基因型，而在丝胶茧实用品种的选育过程中，每次回交后代中均存在Fib-H+/Fib-H-和Fib-H+/Fib-H+两种基因型的个体，而这两种基因型都能够结正常茧，无法从表型上加以区分。本专利技术通过多态性SSR分子标记不仅可准确区分每个个体的基因型，同时可以准确确定25号染色体外的其余27对染色体的来源，大大缩短选育周期。(4)实用性强：本专利技术采用传统家蚕近等基因系的选育方法与SSR分子标记相结合的方法，不仅可用于实用丝胶茧品系的选育，同时可应用于其他无法从表型上区分基因型的家蚕近等基因系的选育，具有较强的可操作性和实用性。附图说明图1为本专利技术基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法的流程图；图2为多态性SSR的琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式下面结合具体实施方式和附图对本专利技术进行详细说明。本专利技术基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，如图1所示，具体按照以下步骤实施：步骤1，用家蚕实用品种(Fib-H+/Fib-H+)雌与丝素重链基因突变品种(Fib-H-/Fib-H-)雄杂交，得到F1代(Fib-H+/Fib-H-)；步骤2，用F1代的雌(Fib-H+/Fib-H-)回交家蚕实用品种的雄(Fib-H+/Fib-H+)，得到BC1；BC1代存在两种基因型，分别为Fib-H+/Fib-H-和Fib-H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：/n步骤1，用家蚕实用品种Fib-H

【技术特征摘要】
1.基于SSR分子标记的家蚕实用丝胶茧品系的转育方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1，用家蚕实用品种Fib-H+/Fib-H+雌与丝素重链基因突变品种Fib-H-/Fib-H-雄杂交，得到F1代Fib-H+/Fib-H-；
步骤2，用F1代的雌Fib-H+/Fib-H-回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC1；BC1代存在两种基因型，分别为Fib-H+/Fib-H-和Fib-H+/Fib-H+；
步骤3，用BC1代基因型为Fib-H+/Fib-H-的雌回交家蚕实用品种的雄Fib-H+/Fib-H+，得到BC2，重复回交3代，最终得到BC5；
步骤4，用25号染色体上的多态性SSR分子标记淘汰BC5代中基因型为Fib-H+/Fib-H+的个体，保留基因型为Fib-H+/Fib-H-的个体；用其余27条染色体上的SSR分子标记鉴定27条染色体均来源于家蚕实用品种的基因型为Fib-H+/Fib-H-的个体，淘汰其他任何形式的所有个体；
步骤5，用步骤4中选出的雌、雄Fib-H+/Fib-H-个体自交，选育出实用丝胶茧品系。


2.根据权利要求1所述的基于S...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈安利，吴凡，彭云武，孟刚，凌君，
申请(专利权)人：安康学院，湖北省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：陕西;61