本发明专利技术属于医药领域，公开了组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。本发明专利技术首次公开了组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用，与现有的圆形精子注射技术相比，本发明专利技术在不引入转基因风险下，通过组蛋白甲基转移酶抑制剂可以显著提高动物圆形精子注射胚胎的囊胚发育率、着床率以及活产率；并且组蛋白甲基转移酶抑制剂处理后的圆形精子注射活产F0代可正常繁育后代，建立了良好的圆形精子注射胚胎体外培养体系，提高圆形精子注射技术的可行性。
【技术实现步骤摘要】
组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。
技术介绍
严重无精症患者的睾丸和附睾内没有成熟精子或长形精子细胞，因此无法通过卵胞浆内单精子显微注射技术(Intracytoplasmicsperminjection，ICSI)得到遗传学后代。而圆形精子注射(Roundspermatidinjection，ROSI)技术是将圆形精子注射进卵母细胞，通过辅助激活使卵母细胞受精，从而帮助这部分无精症患者获得遗传学后代。尽管ROSI技术在包括小鼠、兔、猴和人类在内的多种动物中均已应用，但仍存在诸如着床率低、流产率高、活产率低等问题。因此，改善ROSI胚胎的发育潜能能够有力地推动这项技术在辅助生殖领域的临床应用。
技术实现思路
本专利技术第一方面的目的，在于提供组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。本专利技术第二方面的目的，在于提供组蛋白甲基转移酶抑制剂在制备提高动物圆形精子注射胚胎发育效率的产品中的应用。本专利技术第三方面的目的，在于提供一种激活液。本专利技术第四方面的目的，在于提供一种培养液。本专利技术第五方面的目的，在于提供一种提高动物圆形精子注射胚胎发育效率的方法。为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。优选地，所述胚胎发育效率为囊胚发育率、着床率和活产率中的至少一种。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂。优选地，所述组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂为组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂。优选地，所述组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂为A366、BIX-01294和BRD4770中的至少一种；进一步为A366和BRD4770中的至少一种；更进一步为A366。所述A366的分子式为C19H27N3O2，CAS号为1527503-11-2，化学结构式如式(I)所示。所述BIX-01294的分子式为C28H38N6O2，CAS号为935693-62-2，化学结构式如式(II)所示。所述BRD4770的化学式为C25H23N3O3，CAS号为1374601-40-7，化学结构式如式(III)所示。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的终浓度为100～2500nM；进一步为150～1250nM；更进一步为150～300nM。优选地，所述动物为哺乳动物。本专利技术的第二个方面，提供组蛋白甲基转移酶抑制剂在制备提高动物圆形精子注射胚胎发育效率的产品中的应用。优选地，所述胚胎发育效率为囊胚发育率、着床率和活产率中的至少一种。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂。优选地，所述组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂为组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂。优选地，所述组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂为A366、BIX-01294和BRD4770中的至少一种；进一步为A366和BRD4770中的至少一种；更进一步为A366。所述A366的分子式为C19H27N3O2，CAS号为1527503-11-2，化学结构式如式(I)所示。所述BIX-01294的分子式为C28H38N6O2，CAS号为935693-62-2，化学结构式如式(II)所示。所述BRD4770的化学式为C25H23N3O3，CAS号为1374601-40-7，化学结构式如式(III)所示。优选地，所述产品包括激活液和培养液。优选地，所述动物为哺乳动物。本专利技术的第三个方面，提供一种激活液，包含组蛋白甲基转移酶抑制剂和卵母细胞激活液。优选地，所述卵母细胞激活液包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化锶、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、丙酮酸钠、谷氨酰胺、青霉素-链霉素、乳酸钠。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂。优选地，所述组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂为组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂。优选地，所述组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂为A366、BIX-01294和BRD4770中的至少一种；进一步为A366和BRD4770中的至少一种；更进一步为A366。所述A366的分子式为C19H27N3O2，CAS号为1527503-11-2，化学结构式如式(I)所示。所述BIX-01294的分子式为C28H38N6O2，CAS号为935693-62-2，化学结构式如式(II)所示。所述BRD4770的化学式为C25H23N3O3，CAS号为1374601-40-7，化学结构式如式(III)所示。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的终浓度为100～2500nM；进一步为150～1250nM；更进一步为150～300nM。本专利技术的第四个方面，提供一种培养液，包含组蛋白甲基转移酶抑制剂和胚胎培养液。优选地，所述胚胎培养液为卵裂胚培养液。优选地，所述卵裂胚培养液为KSOM培养液、M16培养液、CZB培养液、G-1TMPLUS(vitrolife，10128)、SydneyIVFCleavageMedium(Cook，K-SICM)和Quinn’sCleavageMedium(SAGE，ART-1026)中的至少一种。优选地，所述KSOM培养液包含氨基酸添加剂。优选地，所述氨基酸添加剂为GlutaMAXTM添加剂和BME氨基酸溶液中的至少一种。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂。优选地，所述组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂为组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂。优选地，所述组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂为A366、BIX-01294和BRD4770中的至少一种；进一步为A366和BRD4770中的至少一种；更进一步为A366。所述A366的分子式为C19H27N3O2，CAS号为1527503-11-2，化学结构式如式(I)所示。所述BIX-01294的分子式为C28H38N6O2，CAS号为935693-62-2，化学结构式如式(II)所示。所述BRD4770的化学式为C25H23N3O3，CAS号为1374601-40-7，化学结构式如式(III)所示。优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂的终浓度为100～2500nM；进一步为150～1250nM；更进一步为150～300nM。本专利技术的第五个方面，提供一种提高动物圆形精子注射胚胎发育效率的方法，包括如下步骤：(1)将卵母细胞置于本专利技术第三方面的激活液中预激活，然后置于缓冲液中处理；(2)将圆形精子细胞置于缓冲液中处理；(3)将步骤(2)中的圆形精子细本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.组蛋白甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂；
优选地，所述组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂为组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂；
优选地，所述组蛋白甲基转移酶G9A抑制剂为A366、BIX-01294和BRD4770中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述胚胎发育效率为囊胚发育率、着床率和活产率中的至少一种。
4.组蛋白甲基转移酶抑制剂在制备提高动物圆形精子注射胚胎发育效率的产品中的应用。
5.一种激活液，包含组蛋白甲基转移酶抑制剂和卵母细胞激活液。
6.根据权利要求5所述的激活液，其特征在于：
所述卵母细胞激活液包括氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化锶、牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠、丙酮酸钠、谷氨酰胺、青霉素-链霉素、乳酸钠。
7.根据权利要求5或6所述的激活液，其特征在于：
所述组蛋白甲基转移酶抑制剂为组蛋白H3K9甲基转移酶抑制剂；
【专利技术属性】
技术研发人员：赵小阳，王京，任少芳，周偲，马琳子，李朝晖，罗芳，常港，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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