【技术实现步骤摘要】
一种靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体及其制备方法与应用，属于超声分子影像学与基因递送
技术介绍
基于siRNA的基因治疗具有设计简单、可针对各种致病靶点等优势，有望成为难治性疾病尤其是恶性肿瘤的有效治疗策略。未经修饰的裸siRNA在体内容易被降解，半衰期短，无法维持有效药物浓度，为此需要借助递送载体，常用的载体主要包括病毒载体和脂质体载体，尽管这些载体广泛用于基础研究，但它们却不太适合直接用于临床。基因递送载体应用有着安全性和有效性的双重标准，病毒载体会带来安全性上的不确定性，脂质体载体则面临效率上的挑战。因此，限制siRNA临床应用的主要因素是缺乏一种安全、高效的递送系统。O-CMC是壳聚糖的一种衍生物，集聚合物与多糖材料的优点与一身，具有优良的生物兼容性质、生物活性、抗肿瘤性、稳定性和水溶性质，而且活性官能团羧基(-COOH)为后续修饰提供了可能性，在生物
应用比较广泛。中国专利文献C...
【技术保护点】
1.一种靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体，其特征在于，所述基因颗粒携载有治疗模块、靶向模块和锚定模块；所述超声造影剂是以O-CMC联合脂质为壳膜材料，液态氟碳为内核的纳米级超声造影剂；所述基因颗粒/超声造影剂纳米复合体的粒径为160～220nm，分散系数为0.25～0.35。/n
【技术特征摘要】
1.一种靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体，其特征在于，所述基因颗粒携载有治疗模块、靶向模块和锚定模块；所述超声造影剂是以O-CMC联合脂质为壳膜材料，液态氟碳为内核的纳米级超声造影剂；所述基因颗粒/超声造影剂纳米复合体的粒径为160～220nm，分散系数为0.25～0.35。
2.如权利要求1所述的靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体，其特征在于，所述治疗模块为siCAT-1序列，siCAT-1的核酸序列为：GAcAuAuucGcAGuGAucAuAuu；所述靶向模块为RNA适体A10-3.2，A10-3.2的核酸序列为：GGGAGGAcGAuGcGGAucAGccAuGuuuAcGucAcuccu；所述锚定模块为胆固醇修饰的aWJ侧链(aWJ-Chol)。
3.权利要求1所述的靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体的制备方法，其特征在于，所述靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体是通过锚定作用将基因颗粒固定于超声造影剂表面，形成整体基因颗粒/超声造影剂纳米复合体结构。
4.如权利要求1所述的靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体，其特征在于，所述基因颗粒的制备方法，包括步骤如下：
(1)根据3WJ-pRNA的核心序列分别设计合成4条RNA单链(strand1～4)，分别为胆固醇修饰的aWJ侧链(aWJ-Chol，strand1，锚定模块)、A10-3.2修饰的bWJ侧链(bWJ-A10-3.2，strand2，靶向模块)、siCAT-1修饰的cWJ侧链(CWJ-siCAT-1，strand3，治疗模块)、治疗模块的反义链(siCAT-1antisense，strand4)；
(2)将步骤(1)所述4条RNA单链分别溶解于DEPC水中后，混合均匀，分别得到RNA单链浓度为50～100μmol的DEPC水溶液；
(3)将步骤(2)所述4条RNA单链DEPC水溶液混合于退火缓冲液中，混匀后进行程序性降温，得到基因颗粒。
5.如权利要求4所述的靶向递送siRNA的基因颗粒/超声造影剂纳米复合体，其特征在于，满足下列条件一项或多项：
i.步骤(1)中所述aWJ侧链的核酸序列为：uuGccAuGuGuAuGuGGG；所述bWJ侧链的核酸序列为：cccAcAuAcuuuGuuGAucc；所述cWJ侧链的核酸序列为：GGAucAAucAuGGcAAuu；
ii.步骤(3)中所述含有4条RNA单链的退火缓冲液中RNA单链的摩尔比为1:1:1:1；所述程序性降温的程序为：95℃，5min→每个循...
【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，郭鲁，时丹丹，商蒙蒙，孙霄，孟冬，刘欣欣，周晓莹，赵雅丁，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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