具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条及包含其的妊娠诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及具有多个检查线的妊娠诊断用色谱条、具有上述色谱条的妊娠诊断试剂盒以及使用其来诊断是否妊娠的方法。本发明专利技术克服了人绒毛膜促性腺激素(hCG)变异体引起的假阴性的问题，由此，可通过肉眼更加准确且便利地诊断是否妊娠。进而，利用由多个检查线和对照线构成的妊娠诊断用色谱条，具有人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度测定范围得到改善的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有多个检查线的妊娠诊断用免疫色谱条及包含其的妊娠诊断试剂盒
本专利技术涉及如下的妊娠诊断试剂盒：在诊断妊娠的过程中，同时测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)及其变异体，由此，可更准确地诊断妊娠。
技术介绍
免疫色谱分析法为利用抗原-抗体反应，在短时间内定性及定量分析微量的靶向物质(analyte)的方法。在家庭及医院等广泛使用的妊娠诊断试剂盒使用上述免疫色谱分析法。在普通妊娠诊断试剂盒中所使用的免疫色谱条的情况下，当妊娠时，将在尿液及血清中的含量增加的人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)用作所要检测的靶向物质。将与人绒毛膜促性腺激素结合的抗体以线形固定在膜垫(检查线)，并且，将一个抗体与如金粒子等的标记物质结合并固定在接合物垫，之后，展开检测体。所展开的检测体经过接合物垫并形成检测体中的人绒毛膜促性腺激素-抗人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子的复合物来展开，上述复合物被固定在检查线的抗-人绒毛膜促性腺激素抗体捕获来形成“检查线固定的抗体-抗人绒毛膜促性腺激素抗体-金粒子”的结合物。将其称为“三明治(sandwich)反应”。在检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度可确定为妊娠的情况下，上述检查线被金粒子显示为红色并确定为妊娠。并且，与检测体中的人绒毛膜促性腺激素的浓度无关地，对照线一直捕获金粒子抗体并被金粒子显示为红色，因此，可确认检查正常终止。可通过肉眼或利用传感器检测示出结果的分析条。人绒毛膜促性腺激素是一种36.5kD的糖蛋白，由α和β两个亚基组成，具有卵巢的黄体形成、诱发排卵、睾丸的间质细胞中的促进雄激素分泌等与促黄体激素(luteinizinghormone，LH)类似的作用。在女性妊娠后，从胎盘的滋养层细胞生成、分泌人绒毛膜促性腺激素，并存在于母体的血液和尿液以及羊水中。除此之外，如所周知，人绒毛膜促性腺激素还在如水泡状胎块或绒毛膜癌的滋养细胞病以及各种胚芽细胞肿瘤患者中增加，正常男性和未妊娠的女性的血液和尿液中也存在非常少量的人绒毛膜促性腺激素。人绒毛膜促性腺激素从胎盘生成经由血液通过尿液排出，在经过这种阶段的过程中，生成各种分解产物和变异体，在胎盘和血液以及尿液中示出的人绒毛膜促性腺激素形态具有差异。α亚基具有两个N-切口寡糖侧链(N-nickedoligosaccharaidesidechain)，β亚基为在6个分支中具有145个氨基酸连接的独特的形态，用于区别人绒毛膜促性腺激素和其他乙二醇蛋白质。随着该氨基链的变化，在胎盘中示出大的游离α(largefreeα)、没有切口的游离β(non-nickedfreeβ)的形态，在血液中还具有规则的游离α(regularfreeα)、有切口的游离β(nickedfreeβ)的形态，尤其，尿液中还存在人绒毛膜促性腺激素β-核心片段(hCGβcorefragment，hCGβcf)的形态(韩国急诊医学学会杂志：2011年，第22卷，第5号503-507)。在妊娠5周前的尿液中，存在相对少量的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段，在妊娠6周后的尿液中，存在多于正常人绒毛膜促性腺激素(intacthCG，I-hCG)的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段，尤其，在妊娠8周后，比正常人绒毛膜促性腺激素高3倍以上。这种高浓度的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段妨碍正常人绒毛膜促性腺激素的测定，在诊断妊娠的过程中，可诱发假阴性的错误(J.EmergencyMedicine2013,44:155)。因此，本专利技术人持续研究不受以高浓度存在于尿液中的人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的影响且准确地判断是否妊娠的妊娠诊断试剂盒的制造方法且不懈努力的结果确认了，若使用本专利技术的具有多个检查线的妊娠诊断用色谱条，则在人绒毛膜促性腺激素变异体以高浓度存在的情况下，也可准确地判断是否妊娠，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
技术问题因此，本专利技术的目的在于，提供通过排除以高浓度存在于尿液中的人绒毛膜促性腺激素变异体的干扰而具有高准确性的妊娠诊断用色谱条。本专利技术的再一目的在于，提供包括上述色谱条的妊娠诊断试剂盒。本专利技术的另一目的在于，提供通过使用上述色谱条或妊娠诊断试剂盒来诊断是否妊娠的方法。技术方案作为用于实现上述目的的一实施方式，本专利技术提供具有接合物垫及检测垫的妊娠诊断用色谱条。在本专利技术的妊娠诊断用色谱条中，上述接合物垫包含第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体及信号检测标记物质，上述检测垫具有隔开的第一检查线及第二检查线，上述第一检查线包含第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，上述第二检查线包含人绒毛膜促性腺激素。上述“第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体”可与“第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体”混用，是指可识别人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段部位的抗体。因此，本专利技术的第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体不仅可与正常人绒毛膜促性腺激素特异性结合，还可与包含人绒毛膜促性腺激素β-核心片段的人绒毛膜促性腺激素变异体特异性结合。上述“第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体”可与“第二抗-人绒毛膜促性腺激素抗体”混用，是指识别不是人绒毛膜促性腺激素β-核心片段部位的人绒毛膜促性腺激素的其他部位来特异性结合的抗体。因此，本专利技术的第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体仅可与正常人绒毛膜促性腺激素特异性结合，无法与人绒毛膜促性腺激素β-核心片段结合。在本专利技术的优选一实施例中，上述人绒毛膜促性腺激素的其他部位可以为正常人绒毛膜促性腺激素β亚基(subunit)中的一部分部位。在本专利技术的妊娠诊断用免疫色谱条中，在展开检测体前或当展开检测体时，上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体与信号检测标记物质相连接来形成第一接合物，在检测体中存在人绒毛膜促性腺激素或其变异体的情况下，形成第一接合物与人绒毛膜促性腺激素或其变异体结合的复合物，随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度增加，所形成的上述复合物的数量增加，相反，未与检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合的裸(bare)接合物的数量减少。上述第一接合物与正常人绒毛膜促性腺激素结合的复合物被第一检查线捕获而显示信号，第一接合物与变异体结合的复合物不被第一检查线捕获，未与上述检测体中的人绒毛膜促性腺激素或其变异体结合的裸接合物与以规定量固定在第二检查线的人绒毛膜促性腺激素进行反应，由此，可被第二检查线捕获并生成信号。本专利技术的术语“接合物(conjugate)”是指上述标记物质与上述配体相连接而形成的结合物，上述接合物包含用于信号检测的标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体相连接的第一接合物。上述标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体可以物理连接或化学连接。即，可使标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体通过被动吸附(passiveadsorption)连接，对标记物质进行改性以具有反应性组，由此，可通过共价键与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体连接，但并不局限于此，可利用普通技术人员公知的方法执行上述标记物质与第一抗-人绒毛膜促性腺激素抗体的连接。但本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种妊娠诊断用色谱条，具有接合物垫及检测垫，其特征在于，/n上述接合物垫包含第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体及信号检测标记物质，/n上述检测垫具有隔开的第一检查线及第二检查线，上述第一检查线包含第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，上述第二检查线包含人绒毛膜促性腺激素。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181228 KR 10-2018-01725761.一种妊娠诊断用色谱条，具有接合物垫及检测垫，其特征在于，
上述接合物垫包含第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体及信号检测标记物质，
上述检测垫具有隔开的第一检查线及第二检查线，上述第一检查线包含第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体，上述第二检查线包含人绒毛膜促性腺激素。


2.根据权利要求1所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，
上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体识别人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段部位，
上述第二抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体识别并不是人绒毛膜促性腺激素的β-核心片段部位的人绒毛膜促性腺激素的其他部位。


3.根据权利要求1所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，
在展开检测体前或当展开检测体时，上述第一抗-人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体与信号检测标记物质相连来形成第一接合物，
在检测体中存在人绒毛膜促性腺激素或其变异体的情况下，形成第一接合物与人绒毛膜促性腺激素或其变异体结合的复合物，
随着检测体中的人绒毛膜促性腺激素或其变异体的浓度增加，所形成的上述复合物的数量增加，相反，未与检测体中的人绒毛膜促性腺激素结合的裸接合物的数量减少。


4.根据权利要求3所述的妊娠诊断用色谱条，其特征在于，
上述第一接合物与正常人绒毛膜促性腺激素结合的复合物被第一检查线捕获而显示信号，第一接合物与变异体结合的复合物不被第一检查线捕获，
未与上述检测体中...

【专利技术属性】
技术研发人员：林国镇，金泰亨，朴东奭，崔东燮，金美晶，朴永祐，
申请(专利权)人：普默特株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR