一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂及制备方法和应用，所述制备方法包括如下步骤：(1)分离并培养血管内皮祖细胞；(2)将脐带间充质干细胞和血管内皮祖细胞进行非接触性共培养，在共培养中，所述脐带间充质干细胞分泌细胞因子以促进血管内皮祖细胞分化成血管内皮细胞；(3)收集步骤(2)培养后的细胞，制成所述细胞制剂。本发明专利技术的细胞制剂对肾纤维化有抑制作用，能够增强抗肾纤维化活性，为开发新型抗肾纤维化药物提供了理论基础与实验依据。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂及制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂及制备方法和应用。
技术介绍
肾脏间质纤维化(Tubularinterstitialfibrosis,TIF)是慢性肾脏病(Chronickidneydisease,CKD)发展到终末期肾脏病的共同通路和共同病理改变，在CKD的致死原因中，肾脏纤维化疾病占总死因的45％。TIF主要表现为肾单位正常结构被破坏，肾固有细胞丢失及细胞外基质(ECM)沉积。损伤肾小管上皮细胞诱导大量成纤维细胞及肌成纤维细胞增生，胶原纤维、纤粘连蛋白(FN)等基质通过上皮间质转化(EMT)增生和堆积，最终导致肾脏间质纤维化和CKD的发生。因此，EMT是肾脏损伤和肾间质纤维化的重要标志和作用机制，抑制EMT过程在纤维化的治疗中具有重要作用。目前，唯一用于临床治疗CKD的药物为肾素-血管紧张素系统(RAS)阻断剂类，如血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)，然而该类药物都不是直接作用于肾脏纤维化的有效治疗手段。在体外实验和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)分离并培养血管内皮祖细胞；/n(2)将脐带间充质干细胞和血管内皮祖细胞进行非接触性共培养，在共培养中，所述脐带间充质干细胞分泌细胞因子以促进血管内皮祖细胞分化成血管内皮细胞；/n(3)收集所述步骤(2)培养后的细胞，制成所述细胞制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗肾纤维化的细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)分离并培养血管内皮祖细胞；
(2)将脐带间充质干细胞和血管内皮祖细胞进行非接触性共培养，在共培养中，所述脐带间充质干细胞分泌细胞因子以促进血管内皮祖细胞分化成血管内皮细胞；
(3)收集所述步骤(2)培养后的细胞，制成所述细胞制剂。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中所用的EPCs专用培养基由如下步骤制得：在100ml不含血清不含任何生长因子的EGM-2培养基中，分别加入1/5体积EGM-2培养基套装中的hEGF、Hydrocortisone、R3-IGF-1、GA-1000、Heparin、hFGF-B、VEGF，再加入1ml青链霉素混合液，摇匀。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)分离并培养血管内皮祖细胞，包括如下步骤：利用所述EPCs专用培养基重悬细胞，之后均匀接种于预先包被有人纤维连接蛋白的60mm无菌细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养48h后换液，PBS反复浸洗2遍后加入所述EPCs专用培养基，之后隔天换液，待细胞生长至80％-90％融合度时，弃去废培养基并加入1ml含0.25％EDTA的胰蛋白酶消化1min，至显微镜下观察，待细胞回缩变圆，细胞间隙出现时用含血清的培养基EGM-2快速终止消化，之后在超净台中用1ml移液枪轻轻吹打，至培养皿上大部分细胞脱落...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳，
申请(专利权)人：深圳市中佳生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44