一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法及检测试剂盒。方法包括如下步骤：将水产品样品经过预处理得到乙腈提取液，在乙腈提取液中加入盐酸溶液、氯化钠、以及壬酸钠提取剂，实现样品中的敌敌畏实现高效萃取，冰浴固化有机相，弃去下层水相，向留下的上层提取液中加入氨水溶液，再加入间苯二酚溶液进行反应后，检测荧光值；同时准备配制不同浓度敌敌畏标准溶液进行上述检测，测得荧光值后，绘制标准曲线，根据标准曲线即可获得样品中敌敌畏含量。本发明专利技术建立的方法具有绿色环保、高效、提取效果好、提取效率快等优点，使用的检测仪器操作简单，实验结果准确可靠，灵敏度高，且重现性好，可以实现现场快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法及检测试剂盒
本专利技术涉及一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法及检测试剂盒，属于食品检测

技术介绍
敌敌畏(DDVP)，学名O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯，是一种高效的有机磷杀虫剂，广泛应用于农业生产中。然而由于不合理的使用以及滥用，在降雨等作用的影响下导致水体中敌敌畏的残留量增加，并在水生生物体内不断富集，对水环境以及水生生物造成严重的影响。人们食用含有敌敌畏的水产品后，敌敌畏会在体内不断蓄积，从而对人体产生毒害作用。敌敌畏与人体内的胆碱酯酶结合，使胆碱酯酶丧失了水解乙酰胆碱的功能，导致胆碱能神经递质大量积聚，造成严重的神经功能紊乱，特别是呼吸功能障碍，从而影响生命活动，严重时可因肺水肿、脑水肿、呼吸麻痹而死亡。重度中毒者还会发生迟发性猝死。因此，需要建立敌敌畏的快速便捷检测方法来监测水产品中的残留量。国内外检测敌敌畏残留量的方法有很多，如气相色谱法、薄层色谱扫描法、气相色谱-质谱联用分析法、免疫传感器法等。虽然上述方法检测效率高、选择性好、应用范围广，但需要昂贵的仪器、专业的操作人员、复杂的程序、繁琐的样品处理过程，以及合成的材料不稳定等缺点，极大地限制了其在现场检验中的应用。因此，需要建立一种检测结果准确、仪器操作简单、高效环保的提取检测方法，普通实验室就可达到检测条件的仪器来测定水产品中敌敌畏的残留量。
技术实现思路
(一)要解决的技术问题为了解决现有技术的上述问题，本专利技术提供一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法及检测试剂盒，具体是涉及水产品中敌敌畏残留的快速准确便捷的荧光分析检测方法。(二)技术方案为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法，其包括如下步骤：S1、样品预处理：将水产品样品粉碎，准确称取粉碎后样品于离心管中，加入乙腈溶液，涡旋后静置，上清液过滤膜后置于的离心管中；S2、样品提取：取上述滤液于新的离心管中，加盐酸溶液、氯化钠和壬酸钠，待样品溶液分层后离心，冰浴固化，倒掉下层溶液，留取固相的上层提取液；S3、样品检测：取融化后的上层提取液，加入氨水和间苯二酚溶液在水浴中进行反应，待颜色稳定后，用多功能酶标仪进行荧光检测；S4、标曲制作：配置不同浓度的敌敌畏标准品，向离心管直接添加不同浓度的敌敌畏标准溶液，静置后有机溶剂挥发完全；加入乙腈，按步骤S1、S2和S3进行提取和荧光检测；以敌敌畏浓度为横坐标，荧光值为纵坐标绘制标准曲线；S5、检测结果：将S3中所测样品的荧光值代入标准曲线中即可获得样品中敌敌畏的残留量。如上所述的方法，优选地，在步骤S1中，所述粉碎样品质量为1g，所述乙腈的体积为1mL；所述涡旋转速为2500r/min，涡旋时间为2～5min，所述静置时间为3～5min；所述滤膜为0.22μm的有机滤膜。如上所述的方法，优选地，在步骤S2中，所述滤液体积为0.5～0.9mL，所述盐酸溶液的浓度为0.1～0.7mol/L，体积为4.5mL；所述氯化钠用量为75～225mg；壬酸钠用量为100～200mg；所述离心条件为3000～8000r/min，离心时间为3～10min。如上所述的方法，优选地，所述滤液体积为0.5mL，所述盐酸溶液的浓度为0.5mol/L；所述氯化钠用量为150mg；壬酸钠用量为150mg；所述离心条件为5000r/min，离心时间为5min。如上所述的方法，优选地，在步骤S3中，所述上层提取液的体积为50μL；所述氨水的质量分数为15～25％，氨水体积为100μL；所述间苯二酚溶液的浓度为45～225mmol/L，用无水乙醇进行配置，间苯二酚溶液的体积为200μL。如上所述的方法，优选地，在步骤S3中，所述水浴的温度为25～35℃，水浴时间为5～15min。如上所述的方法，优选地，在步骤S3中，所述氨水的质量分数为25％，所述间苯二酚溶液的浓度为90mmol/L，用无水乙醇进行配置，水浴温度为25℃，水浴时间为10min。如上所述的方法，优选地，在步骤S3中，用多功能酶标仪测定荧光强度时，所用的激发波长为275nm，发射波长为315nm。一种用于荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的试剂盒，其包括乙腈溶液、氯化钠、盐酸溶液、氨水和间苯二酚溶液。进一步，优选地，盐酸溶液的浓度为0.1～0.7mol/L，氨水的质量分数为15～25％，间苯二酚溶液的浓度为45～225mmol/L。本专利技术在研究中发现采用壬酸钠加入酸性的样品溶液中原位生成壬酸提取剂，与水相充分接触的过程中，以及盐析作用的辅助下完成敌敌畏的高效萃取，也就是说壬酸钠在酸性条件下转化为壬酸，壬酸萃取敌敌畏，壬酸与水溶液分层，有机相即含有敌敌畏地萃取剂位于上层，之后冰浴固化有机相，弃去下层水相；融化后的萃取剂加入碱性的氨水溶液后，壬酸转化成壬酸盐的形式与水相混溶成为均一地一相，便于后续的检测。而且，敌敌畏在碱性条件下水解成二氯乙醛，与后续加入的间苯二酚发生缩合反应产生具有荧光性的物质，实现敌敌畏的荧光定量检测。本专利技术中首次采用冰浴固化，因多次实验研究发现采用的提取剂的凝固点比样品溶液的凝固点要高，固化能收集到更多的提取剂，而且便于和样品溶液分离。(三)有益效果本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的新的方法及检测试剂盒，使用可转换亲水性溶剂壬酸钠作为萃取剂提取目标分析物。壬酸钠具有绿色、无毒、对环境影响小的优点，符合绿色化学实验的要求；而且壬酸钠具有低密度、低熔点的性质，离心后冰浴时在离心管上端固化，降低收集难度，提高萃取效率，除此之外，本专利技术的方法中壬酸钠的使用量较少，就可实现高效提取。本专利技术提供的荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法，其检测过程具有绿色环保、高效、提取效果好、提取效率快的优点，使用仪器操作简单，不需搭建复杂装置，而且检测过程中不需要合成任何物质，限制作用少，反应条件温和、操作简单快捷，灵敏度高，实验结果准确可靠，且重现性好，可以实现现场快速检测。本专利技术提供的用于荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的检测试剂盒，试剂来源容易得到，没有毒性，绿色环保。本专利技术基于可切换的中链脂肪酸，将高效绿色的微萃取前处理技术，与便捷的高通量荧光分析技术相结合，解决了有机提取剂与水相检测体系不相溶的难题，建立了一种高效提取和检测水产品中敌敌畏残留量的方法。附图说明图1为不同反应体系在紫外灯下的图片；图2为不同反应体系的荧光光谱图；图3为最终产物最佳激发波长(Ex)和发射波长(Em)下的荧光光谱图；图4为提取剂种类对荧光强度的影响；图5为提取剂用量对荧光强度的影响；图6为HCl浓度对荧光强度的影响；图7为NaCl用量对荧光强度的影响；图8为NH3·H2O浓度对荧光强度的影响；...

【技术保护点】
1.一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法，其特征在于，其包括如下步骤：/nS1、样品预处理：将水产品样品粉碎，准确称取粉碎后样品于离心管中，加入乙腈溶液，涡旋后静置，上清液过滤膜后置于的离心管中；/nS2、样品提取：取上述滤液于新的离心管中，加盐酸溶液、氯化钠和壬酸钠，待样品溶液分层后离心，冰浴固化，倒掉下层溶液，留取上层提取液；/nS3、样品检测：取融化后的上层提取液，加入氨水和间苯二酚溶液在水浴中进行反应，待颜色稳定后，用多功能酶标仪进行荧光检测；/nS4、标曲制作：配置不同浓度的敌敌畏标准品，向离心管直接添加不同浓度的敌敌畏标准溶液，静置后有机溶剂挥发完全；加入乙腈，按步骤S1、S2和S3进行提取和荧光检测；以敌敌畏浓度为横坐标，荧光值为纵坐标绘制标准曲线；/nS5、检测结果：将步骤S3中所测样品的荧光值代入标准曲线中即可获得样品中敌敌畏的残留量。/n

【技术特征摘要】
1.一种荧光分析法检测水产品中敌敌畏残留量的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
S1、样品预处理：将水产品样品粉碎，准确称取粉碎后样品于离心管中，加入乙腈溶液，涡旋后静置，上清液过滤膜后置于的离心管中；
S2、样品提取：取上述滤液于新的离心管中，加盐酸溶液、氯化钠和壬酸钠，待样品溶液分层后离心，冰浴固化，倒掉下层溶液，留取上层提取液；
S3、样品检测：取融化后的上层提取液，加入氨水和间苯二酚溶液在水浴中进行反应，待颜色稳定后，用多功能酶标仪进行荧光检测；
S4、标曲制作：配置不同浓度的敌敌畏标准品，向离心管直接添加不同浓度的敌敌畏标准溶液，静置后有机溶剂挥发完全；加入乙腈，按步骤S1、S2和S3进行提取和荧光检测；以敌敌畏浓度为横坐标，荧光值为纵坐标绘制标准曲线；
S5、检测结果：将步骤S3中所测样品的荧光值代入标准曲线中即可获得样品中敌敌畏的残留量。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述粉碎样品质量为1g，所述乙腈的体积为1mL；所述涡旋转速为2500r/min，涡旋时间为2～5min，所述静置时间为3～5min；所述滤膜为0.22μm的有机滤膜。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述滤液体积为0.5～0.9mL，所述盐酸溶液的浓度为0.1～0.7mol/L，体积为4.5mL；所述氯化钠用量为75～225mg；壬酸钠用量为100～200mg；所述离心条件为3000～8000r/mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓闻，王慧慧，李琳慧，王愈，武蓓琪，齐艳丽，荆旭，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西;14