一种单加氧酶及其在制备光学纯亚砜中的应用制造技术

提供了一种单加氧酶，其氨基酸序列是由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列通过突变获得，所述单加氧酶可制备手性亚砜类药物，用于胃溃疡治疗药质子泵抑制剂的生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种单加氧酶及其在制备光学纯亚砜中的应用
本专利技术涉及一种非天然硫醚单加氧酶以及酶法催化硫醚类化合物不对称氧化制备亚砜化合物的应用。技术背景艾司奥美拉唑，又称(S)-奥美拉唑，化学名为5-甲氧基-2-((S)-((4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基)亚硫酰基)-1H-苯并咪唑，化学结构如式I所示。艾司奥美拉唑是首个应用于临床的质子泵抑制剂奥美拉唑的(S)-单一构型异构体。该药主要用于治疗十二指肠溃荡、胃溃荡、胃炎以及消化道食管炎。临床上已经证明该药比外消旋体和(R)-奥美拉唑的毒副作用低，且疗效要更好。化学法利用金属催化剂不对称氧化硫醚合成艾司奥美拉唑，但这类方法存在光学纯度受限、过度氧化、副产物多、分离提纯工艺复杂等缺点。使用酶法来对硫醚化合物进行不对称氧化，得到单一对映体的手性亚砜，这种方法环境污染小，副产物少，原子经济性好，而且产物光学纯度高，因此利用酶法不对称氧化合成手性亚砜受到了越来越多的关注。专利技术人也曾筛选获得一株红球菌(CGMCC2547)可催化一系列潜手性苯烷基硫醚及其衍生物的不对称氧化，获得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单加氧酶，其特征在于，所述单加氧酶包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的突变体，所述突变体的突变方式包括指定位置的氨基酸残基替换，所述指定位置选自如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的Xaa21，Xaa40，Xaa55，Xaa70，Xaa143，Xaa145，Xaa156，Xaa185，Xaa220，Xaa244，Xaa246，Xaa248，Xaa249，Xaa277，Xaa281，Xaa326，Xaa386，Xaa388，Xaa390，Xaa405，Xaa426，Xaa430，Xaa432，Xaa433，Xaa435，Xaa438，Xaa465，Xaa468，Xaa488，Xa...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181126 CN 2018114203211一种单加氧酶，其特征在于，所述单加氧酶包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的突变体，所述突变体的突变方式包括指定位置的氨基酸残基替换，所述指定位置选自如SEQIDNO:2所示氨基酸序列的Xaa21，Xaa40，Xaa55，Xaa70，Xaa143，Xaa145，Xaa156，Xaa185，Xaa220，Xaa244，Xaa246，Xaa248，Xaa249，Xaa277，Xaa281，Xaa326，Xaa386，Xaa388，Xaa390，Xaa405，Xaa426，Xaa430，Xaa432，Xaa433，Xaa435，Xaa438，Xaa465，Xaa468，Xaa488，Xaa489，Xaa490，Xaa497，Xaa501以及Xaa505。


根据权利要求1所述的单加氧酶，其特征在于，所述指定位置的氨基酸残基替换包括至少2处指定位置的氨基酸残基替换。


根据权利要求1所述的单加氧酶，其特征在于，所述单加氧酶还包括以下任意一种或多种突变方式，所述突变方式包括：
(a)指定位置以外的氨基酸残基替换任意1处或2处或3处或4处或5处；
(b)指定位置以外的氨基酸残基缺失任意1处或2处或3处或4处或5处；
(c)指定位置以外的氨基酸残基插入任意1处或2处或3处或4处或5处。


根据权利要求1至3任意一项所述的单加氧酶，其特征在于，所述指定位置的氨基酸残基替换包括以下任意一种或几种替换方式：
Xaa21由S替换为G；
Xaa40由T替换为A；
Xaa55由L替换为Y、W、F或N；
Xaa70由E替换为G；
Xaa143由L替换为P、或A；
Xaa145由A替换为S；
Xaa156由E替换为G；
Xaa185由G替换为A或S；
Xaa220由M替换为R；
Xaa244由L替换为V、或I；
Xaa246由F替换为Y；
Xaa248由L替换为E、N、A、或W；
Xaa249由N替换为S；
Xaa277由F替换为L、V、Y、I、或D；
Xaa281由F替换为V、或A；
Xaa326由K替换为C、或F；
Xaa386由N替换为S；
Xaa388由I替换为F、C、K、G；
Xaa390由M替换为S、V、I；
Xaa405由K替换为M；
Xaa426由L替换为F、或P；
Xaa430由G替换为T、或S；
Xaa432由F替换为L、或I；
Xaa433由T替换为C、或A；
Xaa435由L替换为S；
Xaa438由S替换为I；
Xaa465由K替换为R；
Xaa468由V替换为A；
Xaa488由E替换为K；
Xaa489由S替换为C；
Xaa490由W替换为R；
Xaa497由P替换为S；
Xaa501由N替换为Y；
Xaa505由F替换为L。


根据权利要求4所述的单加氧酶，其特征在于，所述指定位置的氨基酸残基替换包括以下任意一种替换方式：
(1)替换2处，Xaa326由K替换为C，Xaa432由F替换为L；
(2)替换2处，Xaa326由K替换为F，Xaa432由F替换为L；
(3)替换2处，Xaa326由K替换为C，Xaa432由F替换为I；
(4)替换4处，Xaa326由K替换为C，Xaa432由F替换为L，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(5)替换4处，Xaa326由K替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(6)替换5处，Xaa326由K替换为C，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为C，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(7)替换5处，Xaa326由K替换为C，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(8)替换6处，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(9)替换6处，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为P，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I；
(10)替换7处，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(11)替换8处，Xaa143由L替换为P，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(12)替换8处，Xaa143由L替换为A，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(13)替换8处，Xaa244由L替换为V，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(14)替换8处，Xaa244由L替换为I，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(15)替换9处，Xaa143由L替换为P，Xaa248由L替换为E，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(16)替换8处，Xaa248由L替换为N，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(17)替换8处，Xaa248由L替换为A，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(18)替换8处，Xaa248由L替换为W，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(19)替换9处，Xaa143由L替换为P，Xaa277由F替换为L，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(20)替换9处，Xaa143由L替换为P，Xaa277由F替换为V，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(21)替换9处，Xaa143由L替换为P，Xaa277由F替换为Y，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(22)替换8处，Xaa277由F替换为I，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(23)替换8处，Xaa277由F替换为D，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(24)替换8处，Xaa281由F替换为V，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(25)替换8处，Xaa281由F替换为A，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(26)替换10处，Xaa143由L替换为P，Xaa277由F替换为L，Xaa281由F替换为V，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(27)替换10处，Xaa143由L替换为P，Xaa277由F替换为V，Xaa281由F替换为A，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；
(28)替换11处，Xaa143由L替换为P，Xaa200由M替换为R，Xaa277由F替换为L，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa465由K替换为R，Xaa505由F替换为L；
(29)替换10处，Xaa143由L替换为P，Xaa185由G替换为A，Xaa277由F替换为L，Xaa326由K替换为C，Xaa426由L替换为F，Xaa432由F替换为L，Xaa433由T替换为A，Xaa435由L替换为S，Xaa438由S替换为I，Xaa505由F替换为L；

【专利技术属性】
技术研发人员：张䶮，郁惠蕾，任世淼，赵芃，许建和，吴殷琦，赵骞，
申请(专利权)人：华东理工大学，江苏奥赛康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31