一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法及其检测试剂盒和应用技术

本发明专利技术涉及分析检测技术领域，具体涉及一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法及其检测试剂盒和应用。本发明专利技术的总钴胺素和氰钴胺的检测方法包括总钴胺素的检测和氰钴胺的检测，所述总钴胺素的检测包括：将待测样品进行衍生处理，再采用液相色谱串联质谱法进行检测，所述衍生处理采用的衍生剂包括第一衍生剂和第二衍生剂，所述第一衍生剂为含有1‑5g/L氰化钠或氰化钾以及10‑100g/L氢氧化钠的水溶液；所述第二衍生剂为1‑10g/L的二硫代苏糖醇水溶液，pH为2‑9。该方法用样量少，检测速度快，且具有较高的准确度和精密度，可显著提高总钴胺素和氰钴胺检测的准确性和有效性，为各种钴胺素的含量测定提供了有效的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法及其检测试剂盒和应用
本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法及其检测试剂盒和应用。
技术介绍
维生素B12(vitaminB12)又称钴胺素(cobalamin)、氰钴胺素，其分子结构(图1)是以钴离子为中心的咕啉环和5,6-二甲基苯并咪唑为碱基组成的多环化合物。因中央钴分子上结合的基团(图1中的“R”：5-脱氧腺苷、甲基、羟基、氰根离子)不同，维生素B12有多种活性形式，包括腺苷钴胺、甲钴胺、羟钴胺、氰钴胺。在人体内，腺苷钴胺和甲钴胺可作为人体中酶的辅因子，腺苷钴胺是甲基丙二酰辅酶A的辅酶，参与甲基丙二酸辅酶A向琥珀酰辅酶A的转化。甲钴胺是甲硫氨酸合成酶的辅酶，参与甲硫氨酸与同型半胱氨酸的代谢。在体外血中腺苷钴胺和甲钴胺含量很低，主要存在于细胞内，羟钴胺和氰钴胺则可存在于离心后血清或血浆中。目前已有的检测样品中维生素B12的方法大部分基于免疫学方法(同位素放射免疫法，电化学发光免疫法，化学发光免疫法，荧光免疫分析法等)等。在临床最为常用的方法是采用化学发光原理的免疫学方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，包括总钴胺素的检测和氰钴胺的检测，所述总钴胺素的检测包括：将待测样品进行衍生处理，再采用液相色谱串联质谱法进行检测，/n所述衍生处理采用的衍生剂包括第一衍生剂和第二衍生剂，/n所述第一衍生剂为含有1-5g/L氰化钠或氰化钾以及10-100g/L氢氧化钠的水溶液；所述第二衍生剂为1-10g/L的二硫代苏糖醇水溶液，pH为2-9。/n

【技术特征摘要】
1.一种总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，包括总钴胺素的检测和氰钴胺的检测，所述总钴胺素的检测包括：将待测样品进行衍生处理，再采用液相色谱串联质谱法进行检测，
所述衍生处理采用的衍生剂包括第一衍生剂和第二衍生剂，
所述第一衍生剂为含有1-5g/L氰化钠或氰化钾以及10-100g/L氢氧化钠的水溶液；所述第二衍生剂为1-10g/L的二硫代苏糖醇水溶液，pH为2-9。


2.根据权利要求1所述的总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，所述衍生剂还包括第三衍生剂，所述第三衍生剂为含有0.1％-10％甲酸的水溶液。


3.根据权利要求1或2所述的总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，所述衍生处理包括：将所述待处理样品与样品制备液混合后分离上清液，将所述上清液干燥后，与所述第一衍生剂和所述第二衍生剂混合，反应5-15分钟后，再将反应体系与所述第三衍生剂混合，得到衍生化的样品；
优选地，所述样品制备液为含有同位素标记氰钴胺的甲醇溶液；
更优选地，将所述衍生化的样品经萃取、干燥、复溶后再进行液相色谱分离。


4.根据权利要求1或2所述的总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，所述氰钴胺的检测包括：将所述待处理样品与所述样品制备液混合后分离上清液，将所述上清液干燥后，与所述第三衍生剂混合，经萃取、干燥、复溶后，再采用液相色谱串联质谱法进行检测。


5.根据权利要求1～4任一项所述的总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，所述检测中，液相色谱的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为含有0.01-0.5％甲酸的水溶液，所述流动相B为甲醇。


6.根据权利要求5所述的总钴胺素和氰钴胺的检测方法，其特征在于，所述流动相按照以下梯度进行梯度洗脱：0-0.5min，流动相A95％，0.5-3.0min，流动相A95-50％，3.0-4.0m...

【专利技术属性】
技术研发人员：禹松林，邱玲，程歆琦，马晓丽，邹雨桐，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京;11