一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用，属于生物技术领域。硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075，所述硼砂硼酸缓冲液在电泳中的应用。优点是硼砂硼酸缓冲液使用硼砂和硼酸两种化学药品进行配制，这两种化学药品容易购买，价格便宜。缓冲液的pH容易调整，离子强度容易进行计算，适合开展血清醋酸纤维薄膜电泳和血清脂蛋白电泳实验，另外，硼砂硼酸缓冲液根据需要还可以使用在其它不同pH及不同离子强度的生命科学实验研究中。使用硼砂硼酸缓冲液效果非常好，血清醋酸纤维薄膜电泳区分出正确的蛋白质条带，而血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳也区分出脂蛋白条带，条带清晰，明确和完整，为正常开展实验研究和实验教学提供了支持。

Borax boric acid buffer and its application in electrophoresis

【技术实现步骤摘要】
一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用
本专利技术属于属于生物
，用于电泳的缓冲液，尤其涉及硼砂硼酸缓冲液及其在血清醋酸纤维薄膜和脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中的应用。
技术介绍
血清醋酸纤维薄膜电泳使用pH为8.6，离子强度为0.06的巴比妥钠/巴比妥缓冲液，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳所用pH为8.6，离子强度分别为0.05和0.075巴比妥钠/巴比妥缓冲液。血清醋酸纤维薄膜电泳实验在医学院生物化学实验教学中非常重要，可以将血浆蛋白分为：清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白；学生可以掌握电泳技术的原理，电泳必须具备的条件和影响电泳的因素等方面的知识。另外，对于掌握血清蛋白的分类和含量有重要的意义，有助于学生理解清蛋白与球蛋白比例倒置在肝硬化的诊断中的作用(正常人清蛋白/球蛋白＝1.5-2.5：1；而肝硬化清蛋白/球蛋白＝0.5：1)。血清琼脂糖凝胶电泳实验可以让学生掌握血清脂蛋白的分类、组成和功能，对于学生掌握血清脂蛋白代谢有十分重要的意义。多年来，这两个实验都使用巴比妥钠/巴比妥缓冲液，巴比妥钠为短时巴比妥类催眠药，对中枢的抑制作用随剂量增加可以达到镇静催眠的作用。巴比妥曾作为催眠药或镇静药应用于临床，但因作用弱、不良反应多、不安全、易成依赖性而被淘汰。由于巴比妥钠和巴比妥是麻醉药品和精神药品类，不能继续再使用。若没有相应的pH和离子强度的缓冲液代替，这两个实验将不能给学生再开设，学生将失去这两个验证理论知识的生物化学实验。因此找到巴比妥钠/巴比妥缓冲液的替代缓冲液就显得十分重要。专利技术内容本专利技术提供一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用，目的是使用硼砂、硼酸建立合适的pH及离子强度用于替代巴比妥钠/巴比妥缓冲液，使用在血清醋酸纤维薄膜和血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中。本专利技术采取的技术方案是：一种硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075。一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。本专利技术所述硼砂硼酸缓冲液在电泳中的应用。本专利技术将醋酸纤维薄膜浸泡到pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液中10-20分钟。本专利技术使用pH＝8.6，离子强度为0.05硼砂硼酸缓冲液配制0.035％琼脂糖凝胶步骤是：称取琼脂糖0.035g，加入该硼砂硼酸缓冲液100ml，置微波炉中溶解，分装于三角烧瓶中，冰箱保存。本专利技术使用pH＝8.6，离子强度为0.075硼砂硼酸缓冲液作为血清琼脂糖凝胶电泳槽内的缓冲液。本专利技术的优点是：硼砂硼酸缓冲液使用硼砂和硼酸两种化学药品进行配制，这两种化学药品容易购买，价格便宜。缓冲液的pH容易调整，离子强度容易进行计算，适合开展血清醋酸纤维薄膜电泳和血清脂蛋白电泳实验，其中配制0.06离子强度和pH8.6的硼砂硼酸缓冲液，可以用于血清醋酸纤维薄膜电泳实验，配制的0.05和0.075离子强度及pH8.6的硼砂硼酸缓冲液，用于血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳，完全可以替代巴比妥缓冲液。另外，硼砂硼酸缓冲液根据需要还可以使用在其它不同pH及不同离子强度的生命科学实验研究中。使用硼砂硼酸缓冲液效果非常好，血清醋酸纤维薄膜电泳区分出正确的蛋白质条带，而血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳也区分出脂蛋白条带。条带清晰，明确和完整，达到了预期的实验效果，为正常开展实验研究和实验教学提供了支持。附图说明图1是使用本专利技术0.06离子强度和pH8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清醋酸纤维薄膜电泳图；图2是使用本专利技术0.05和0.075离子强度及pH8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式硼砂Na2B4O7·10H2O，分子量为381.43，硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存；硼酸H3BO3分子量为61.84。实施例1、配制pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液：取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.02M，硼酸的浓度为0.0534M；离子强度＝1/2×(2×0.02×12+0.02×22)＝0.06实施例2、配制pH＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.0167M，硼酸的浓度为0.0445M；离子强度＝1/2×(2×0.0167×12+0.0167×22)＝0.05实施例3、配制pH＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.025M，硼酸的浓度为0.0667M；离子强度＝1/2×(2×0.025×12+0.025×22)＝0.075实施例4、血清醋酸纤维薄膜电泳试剂和仪器：1、醋酸纤维素薄膜2cm×8cm或1.5cm×8cm；2、硼砂硼酸缓冲液，pH＝8.6，离子强度0.06；3、染色液：氨基黑10B称取0.5g溶于50ml甲醇中，再加入冰醋酸10ml及蒸馏水40ml；4、漂洗液：95％乙醇45ml，加冰醋酸5ml及蒸馏水50ml混匀；5、电泳仪和电泳槽；实验操作：1、醋酸纤维薄膜处理：将醋酸纤维薄膜浸泡到硼砂硼酸缓冲液10-20分钟，将醋酸纤维薄膜取出，用滤纸轻轻吸去多余的缓冲液；2、点样：吸取一滴血清于玻璃板上，用点样刀蘸取血清，然后将钢口平直印于醋酸纤维薄膜的一端2厘米处，然后将点样端放到电泳槽的阴极端用4层滤纸搭桥；3、通电；电压110伏，通电45分钟，断电后，将薄膜从电泳槽取出，使用滤纸轻轻吸去多余的水份；4、染色和洗脱：电泳好的醋酸纤维薄膜浸泡于染色液中5分钟，使用漂洗液洗数次，可以看到清晰的5条色带，分别为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白，可以使用分光光度计进行定量，见图1。实施例5、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳试剂和仪器1、硼砂硼酸缓冲液pH＝8.6:用于电泳时的离子强度为0.075，配制琼脂糖凝胶时的离子强度为0.05；2、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035g，加入硼砂硼酸缓冲液pH＝8.6、离子强度0.05，100ml，置沸水浴中溶解，分装于试管中，冰箱保存；3、染色液：苏丹黑0.1g，溶干异丙醇10m1中；4、电泳仪和电泳槽。实验操作1、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种硼砂硼酸缓冲液，其特征在于：硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075。/n

【技术特征摘要】
1.一种硼砂硼酸缓冲液，其特征在于：硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075。


2.如权利要求1所述的硼砂硼酸缓冲液的配制方法，其特征在于，配制pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。


3.如权利要求1所述的硼砂硼酸缓冲液的配制方法，其特征在于，配制pH＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。


4.如权利要求1所述的硼砂硼酸缓冲液的配制方法，其特征在于，配制pH＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘泽民，李冬妹，潘璐彤，王露月，郑志红，者湘漪，张金莉，王慧娟，付少伟，王芳，张春贺，高蕊，李洪涛，龙海晨，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65