肺炎球菌融合蛋白疫苗制造技术

本发明专利技术涉及用于预防和/或治疗肺炎球菌感染的技术。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肺炎球菌融合蛋白疫苗相关申请的交叉引用本申请要求2018年9月12日提交的美国临时申请第62/730,199号的权益，所述临时申请的内容特此整体并入本文。
技术介绍
肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)仍是严重疾病的主要原因，所述严重疾病包括全世界儿童和成人中的菌血症、败血症、脑膜炎和肺炎。婴儿、幼儿、老年和患有某些潜在医学疾患的受试者中的发病率和死亡率高。肺炎链球菌是在约5-10％健康成人和20-40％健康儿童中定殖鼻咽的革兰氏阳性包囊球菌(Gram-positiveencapsulatedcoccus)。当肺炎链球菌携载至耳咽管、鼻窦、肺脏、血流、脑膜、关节空间、骨骼和腹腔中时，正常定殖变得具有感染性。肺炎链球菌感染是菌血症、肺炎、脑膜炎、窦炎和急性中耳炎的最常见原因[CDC，2010]。肺炎球菌疾病可为侵袭性或非侵袭性的。最常见形式的非侵袭性疾病非菌血症性肺炎球菌肺炎仍是肺炎住院的最常见原因中的一种。侵袭性肺炎球菌疾病(Invasivepneumococcaldisease，IPD)定义为从正常无菌部位(例如脑脊髓液、血液、关节液、胸膜液或腹膜液)分离的肺炎链球菌。在年龄极值即在老年成人和年龄小于2岁的幼儿中存在IPD的最高发生率。在美国，在第一种肺炎球菌疫苗出现之前，肺炎链球菌每年在年龄小于5岁的儿童中导致约17,000例侵袭性疾病，包括700例脑膜炎和200例死亡[CDC，2000]。在发展中国家报道了最高发病率和死亡率，但疾病负担在工业化国家中也相当大。肺炎链球菌具有使得生物体能够避开免疫系统的若干毒力因子。实例包括防止宿主免疫细胞吞噬作用的多糖囊，抑制补体介导的调理作用的蛋白酶和引起宿主细胞裂解的蛋白质。在多糖囊中，复合多糖的存在形成肺炎球菌分化成不同血清型的基础。迄今为止，已鉴定出接近100种肺炎链球菌血清型。两种针对肺炎链球菌的疫苗当前在美国可用：肺炎球菌缀合疫苗(PCV13或)和肺炎球菌多糖疫苗(PPSV23或)。PCV13无法赋予针对大多数已知肺炎链球菌血清型的保护。虽然PPSV23相比于PCV13包括更多肺炎链球菌血清型的多糖组分，但其诱导的免疫反应既不长效，在后续攻击时也不具有记忆性。PPSV23保护成人和老年人免患侵袭性肺炎球菌疾病；然而，在肺炎预防中未观测到一致作用[Gruber等人,2008]。因此，医学上需要提供针对宽范围的肺炎链球菌血清型的T细胞依赖性免疫的疫苗。
技术实现思路
本公开解决了用于预防和/或治疗肺炎球菌感染的合适技术的缺乏。尤其，本公开解决了在提供具有保护免患侵袭性肺炎球菌疾病和肺炎的足够免疫原性的疫苗方面的挑战。本文所描述的技术可诱导T细胞和B细胞反应和/或提供针对宽范围的肺炎链球菌血清型(包括一种或多种未包括在市售疫苗例如PCV13或PPSV23中的血清型)的免疫。在一些实施方案中，当向受试者施用时，本文所描述的融合蛋白可诱导更高的Th17反应，与由融合蛋白的单个抗原性组分所诱导的Th17反应相比，高至少25％或更多，包括例如至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或更多。在一些实施方案中，当向受试者施用时，本文所描述的融合蛋白可诱导更高的Th17反应，与由融合蛋白的单个抗原性组分所诱导的Th17反应相比，高至少1.1倍或更多，包括例如至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍或更多。在一些实施方案中，当向受试者施用时，本文所描述的融合蛋白可诱导针对一种或多种代表性非疫苗肺炎球菌血清型的免疫反应，所述肺炎球菌血清型不包括在市售疫苗例如PCV13或PPSV23中。在一些实施方案中，当向受试者施用时，本文所描述的融合蛋白可诱导针对一种或多种选自由6B、16F、15A和35B组成的组的非疫苗肺炎球菌血清型的免疫反应。附图说明当与附图一起阅读时，将根据各种说明性实施方案的以下描述更充分地理解本文所描述的本专利技术教导内容。应理解，下文所描述的附图仅出于说明的目的，而并不旨在以任何方式限制本专利技术教导内容的范围。图1是示例性CP1融合蛋白的示意图。这种示例性CP1融合蛋白包含生物素结合蛋白例如截短根瘤菌抗生物素蛋白(rhizavidin)(例如，野生型根瘤菌抗生物素蛋白的氨基酸45-179(标示为Rhavi))、第一接头(例如，GGGGSSS接头)、SP1500多肽(例如，肺炎链球菌蛋白SP1500的氨基酸27-278)、第二接头(例如，氨基酸序列或接头AAA)和SP0785多肽(例如，肺炎链球菌蛋白SP0785的氨基酸33-399)。在一些实施方案中，CP1融合蛋白还可包含His标签。对于GGGGSSS接头，SSS氨基酸序列可来自PET21/24b质粒上的SacI位点，其中添加了GGGG氨基酸序列以产生具有最小空间位阻的柔性接头。或者，可合成GGGGSSS接头。AAA氨基酸序列可来自PET21/24b质粒上的NotI位点，或者是合成的。图2说明对示例性融合蛋白CP1的SP1500和SP0785多肽组分的免疫反应。左图显示对示例性融合蛋白CP1的SP1500多肽和SP0785多肽的Th17反应。Th17反应显示为在用单独的霍乱毒素或用佐以霍乱毒素的SP1500或SP0785多肽免疫接种的小鼠的外周血样品刺激后培养基中分泌的IL-17A的几何平均浓度。图上的每个点代表一只小鼠的分泌的IL-17A。右图显示了在用单独的霍乱毒素或用佐以霍乱毒素的SP1500或SP0785多肽免疫接种以及用肺炎链球菌鼻内攻击后免于肺炎链球菌定殖的保护。图上的每个点代表一只小鼠的每次鼻部洗涤的肺炎链球菌CFU。两个图中的水平条分别代表每个组的分泌的IL-17A的几何平均值(左图)和每次鼻部洗涤的CFU的几何平均值(右图)。通过曼-惠特尼U检验(Mann-WhitneyUtest)对数据进行统计分析。CT：霍乱毒素；CFU：菌落形成单位；ELISA：酶联免疫吸附测定；IL-17A：白介素17A。**p<0.01；***p<0.001。图3说明对示例性融合蛋白CP1的免疫反应。左图显示了对示例性融合蛋白CP1的Th17反应。Th17反应显示为在用截短根瘤菌抗生物素蛋白(Rhavi)或CP1(均佐以霍乱毒素)免疫接种的小鼠的外周血样品刺激后培养基中分泌的IL-17的几何平均浓度。图上的每个点代表一只小鼠的分泌的IL-17A。右图显示了在用截短根瘤菌抗生物素蛋白(Rhavi)、CP1或杀灭的(灭活的)肺炎球菌全细胞(WCC)(佐以霍乱毒素)免疫接种和用肺炎链球菌鼻内攻击后免于肺炎链球菌定殖的保护。图上的每个点代表一只小鼠的每次鼻部洗涤的肺炎链球菌CFU。两个图中的水平条分别代表每个组的分泌的IL-17A的几何平均值(左图)和每次鼻部洗涤的CFU的几何平均值(右图)。通过曼-惠特尼U检验对数据进行统计分析。CT：霍乱毒素；CFU：菌落形成单位；IL-17A：白介素17A；rh本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：/n(i)生物素结合部分；/n(ii)SP1500多肽或片段；和/n(iii)SP0785多肽或片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180912 US 62/730,1991.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：
(i)生物素结合部分；
(ii)SP1500多肽或片段；和
(iii)SP0785多肽或片段。


2.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：
(i)包含与SEQIDNO:2具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其生物素结合部分的生物素结合部分；
(ii)包含与SEQIDNO:7具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其抗原性部分的多肽；和
(iii)包含与SEQIDNO:4具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其抗原性部分的多肽。


3.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：
(i)包含与SEQIDNO:2具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其生物素结合部分的生物素结合部分；
(ii)包含与SEQIDNO:7具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其抗原性部分的第一多肽；
(iii)包含与SEQIDNO:4具有至少80％、85％、90％同一性的氨基酸序列或其抗原性部分的第二多肽；和
(iv)位于所述生物素结合部分与所述第一多肽之间的第一接头和/或位于所述第一多肽与所述第二多肽之间的第二接头。


4.如权利要求3所述的融合蛋白，其中所述第一接头包含氨基酸序列GGGGSSS。


5.如权利要求3或权利要求4所述的融合蛋白，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·马利，路英杰，F·张，
申请(专利权)人：儿童医疗中心公司，
类型：发明
国别省市：美国;US