包含乳杆菌属的代谢健康用益生菌补充剂制造技术

本申请披露了对哺乳动物受试者的代谢健康具有有益作用的乳杆菌属菌株。进一步披露了包含此类菌株的组合物及其用于改进哺乳动物受试者的代谢健康或用于降低血糖水平的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含乳杆菌属的代谢健康用益生菌补充剂对保藏生物材料的引用本申请含有对保藏生物材料的引用，该保藏通过引用并入本文。关于完整的信息，参见说明书的最后一段。
本专利技术涉及具有改进哺乳动物受试者的代谢健康的能力的细菌菌株、其细胞组分、代谢物和分泌的分子。本申请还涉及包含此类细菌菌株的组合物，以及此类组合物用于改进哺乳动物受试者的代谢健康的用途。
技术介绍
近年来，已经多次显示细菌对哺乳动物，特别是人类的健康具有重要且重大影响，并且已经认识到胃肠道中的有益微生物群对于适当的营养和健康很重要。现在已经认为摄取微生物培养物或菌株(也称为益生菌)是使用微生物培养物或菌株改进个体健康的一种方式。就此而言，在整个说明书和权利要求书中，术语益生菌、微生物培养物和微生物菌株以普遍接受的方式理解为“当以适当量施用时赋予宿主健康益处的活微生物”(http://www.nature.com/articles/nrgastro.2014.66？foxtrotcallback＝true)。微生物菌株既可用于改进个体的不佳健康状况，又可用于防止不佳健康状况的出现。益生菌的有益特性取决于形成益生菌的微生物菌株的特性，因此，重要的是提供具有有益特性的新微生物菌株，以使这些菌株可用作益生菌。
技术实现思路
在第一方面，本专利技术涉及一种乳杆菌属(Lactobacillus)菌株，该乳杆菌属菌株具有改进哺乳动物受试者的代谢健康，诸如减轻糖尿病前期的能力。在另一或替代方面，本专利技术的乳杆菌属菌株具有降低哺乳动物受试者的血糖水平的能力。本专利技术的乳杆菌属菌株可以例如为以如下保藏号保藏在DSMZ-“德国微生物和细胞培养物保藏中心(GermanCollectionofMicroorganismsandCellCulture)”中的菌株：DSM17648、DSM32851、DSM32853、DSM32910和/或DSM32911。在第二方面，本专利技术涉及一种组合物，该组合物包含本专利技术的一种或多种乳杆菌属菌株，优选以离散剂量配制品进行配制。在第三方面，本专利技术涉及使用本专利技术的一种或多种乳杆菌属菌株或包含本专利技术的一种或多种乳杆菌属菌株的组合物来改进哺乳动物受试者的代谢健康，诸如减轻糖尿病前期，维持个体的正常血糖水平和/或降低餐后血糖反应，预防或减轻胰岛素抵抗，或者预防或减少高脂肪和/或高糖饮食的个体的重量增加。最后，在第四方面，本专利技术涉及一种用于筛选乳杆菌属菌株的方法，该乳杆菌属菌株具有改进哺乳动物受试者的代谢健康，诸如减轻糖尿病前期的能力。附图说明图1显示了表示与乳杆菌属菌株一起孵育24h的外周血单核细胞(PBMC)的上清液中，通过Luminex或ELISA测量的抗炎症细胞因子白介素10(IL10)与促炎症细胞因子白介素12(IL12)的比率的条形图。各列表示使用健康PBMC供体进行的3个实验的均值。更多细节，参见实例2。图2显示了表示用促炎症刺激物(脂多糖)刺激并与乳杆菌属菌株一起孵育24h的PBMC的上清液中，通过Luminex测量的促炎症细胞因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的条形图。各列表示使用健康PBMC供体进行的3个实验的均值。更多细节，参见实例2。图3显示了表示用促炎症刺激物(脂多糖)刺激并与乳杆菌属菌株一起孵育24h的PBMC的上清液中，通过Luminex测量的促炎症骨桥蛋白的条形图。各列表示使用健康PBMC供体进行的3个实验的均值。更多细节，参见实例2。图4显示了显示促炎症环境中树突细胞(DC)分泌的细胞因子的条形图。每列代表n＝1-3的均值。A：MCP-1；B：骨桥蛋白；C：IL12p70。通过离心收获上清液，并使用多重测定用于细胞因子分析。更多细节，参见实例3。图5显示表示与乳杆菌属和由TNFα+IFNγ+LPS(混合物)组成的低级别炎症混合物一起孵育的DC培养物的上清液中，通过BDTM细胞计量珠阵列(CytometricBeadArray；CBA)测量的抗炎症细胞因子白介素10(IL10)与促炎症细胞因子白介素12p70(IL12p70)的比率的条形图。将数据根据来自各供体的混合物对照标准化。将DC与乳杆菌属一起培养4小时，然后添加混合物，再维持16小时。混合物对照为与混合物一起培养16小时的DC。各列表示用来自个别健康人PBMC供体的单核细胞衍生DC进行的12个实验的比率。图6显示表示与乳杆菌属和由TNFα+IFNγ+LPS(混合物)组成的低级别炎症混合物一起孵育的DC培养物的上清液中，通过BDTM细胞计量珠阵列(CytometricBeadArray；CBA)测量的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/CCL2)的平均浓度的条形图。将DC与乳杆菌属一起培养4小时，然后添加混合物，再维持16小时。混合物对照为与混合物一起培养16小时的DC。各列表示用来自健康人PBMC供体的单核细胞衍生DC进行的12个实验的均值。图7显示表示与乳杆菌属和由TNFα+IFNγ+LPS(混合物)组成的低级别炎症混合物一起孵育的DC培养物的上清液中，通过BD细胞计量珠阵列(CytometricBeadArray；CBA)测量的细胞因子白介素6(IL6)的平均浓度的条形图。将DC与乳杆菌属一起培养4小时，然后添加混合物，再维持16小时。混合物对照为与混合物一起培养16小时的DC。各列表示用来自健康人PBMC供体的单核细胞衍生DC进行的12个实验的均值。图8.显示了乳杆菌属菌株在孵育24h后，在感染复数(MOI)5下，对上皮细胞系Caco2的屏障强度的作用。使用跨上皮电阻(TEER)技术测量此作用，并表示为TEER比率。TEER比率在不存在促炎症刺激物下测量为A，在存在促炎症刺激物下测量为B。更多细节，参见实例5。图9通过在存在和不存在MOI为5的乳杆菌属菌株以及由TNF-alpha(TNFα)和INF-gamma(INFγ)组成的促炎症混合物下孵育24h后，显示了乳杆菌对上皮细胞系Caco2的屏障强度的作用。A)乳杆菌属HH02的TEER比率。每组2-3只的均值。B)乳杆菌属HH04的TEER比率。每组2-3只的均值。C)乳杆菌属HH05的TEER比率。每组2-3只的均值。图10显示了冷冻干燥的乳杆菌属菌株HH02和HH04的跨上皮电阻(TEER)，将这些菌株以感染复数(MOI)500与上皮细胞Caco2共孵育24h后，储存在-20℃、4℃、25℃和40℃下一个月。A)乳杆菌属菌株HH02的TEER比率。每组3-4只的均值。B)乳杆菌属菌株HH04的TEER比率。每组3-4只的均值。图11显示了在模拟肠中低糖(实心点)或高糖摄取(7mM果糖，实心倒三角形)的实验环境中，或在基底侧模拟全身性高葡萄糖(7mM葡萄糖，实心三角形)的情况下，或两者的组合情况下(实心正方形)，乳杆菌属菌株HH02和HH04在MOI为5下对上皮细胞系Caco2的跨上皮电阻(TEER)的影响。培养基对照描绘为空心圆。作为描述为在24h的孵育时间内连续的TEER值。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳杆菌属菌株，该乳杆菌属菌株具有改进代谢健康，诸如减轻糖尿病前期的能力，或具有降低哺乳动物受试者的血糖水平的能力。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181024 EP 18202187.31.一种乳杆菌属菌株，该乳杆菌属菌株具有改进代谢健康，诸如减轻糖尿病前期的能力，或具有降低哺乳动物受试者的血糖水平的能力。


2.根据权利要求1所述的乳杆菌属菌株，其中该菌株具有改进或减轻选自由以下组成的组的一种或多种糖尿病前期症状的能力：胰岛素抵抗、高血糖、低度炎症和肠屏障功能。


3.根据权利要求1或2所述的乳杆菌属菌株，其中该菌株在胃肠(GI)道中存活。


4.根据前述权利要求中任一项所述的乳杆菌属菌株，其中该菌株在包含选自以下的至少一种筛选方法的筛选方案中选择：PBMC筛选、TEER测定、树突细胞测定、脂肪细胞测定、L细胞测定、胆汁盐水解酶测定和MIC测定。


5.根据前述权利要求中任一项所述的乳杆菌属菌株，该乳杆菌属菌株为罗伊氏乳杆菌或属于干酪乳杆菌群。


6.根据前述权利要求中任一项所述的乳杆菌属菌株，其中该菌株选自以DSM17648、DSM32910、DSM32911、DSM32851和DSM32853保藏的菌株。


7.一种组合物，该组合物包含一种或多种根据权利要求1至6中任一项所述的乳...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·N·克里斯滕森，A·马特恩，D·M·A·索尔尼尔，J·舒尔特琴，T·詹森，B·A·H·詹森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK