【技术实现步骤摘要】
DNA提取液以及革兰氏阳性菌DNA的提取方法
本专利技术涉及DNA的提取方法,特别涉及DNA提取液以及用于革兰氏阳性菌DNA的提取方法,属于细菌DNA的提取领域。
技术介绍
在革兰氏阳性菌菌种鉴定及转化子筛选的过程中,经常要用到基因组DNA用于PCR扩增。传统的酚氯仿法具有通用性广、稳定性高的优点,因此应用较为广泛。然而其操作繁琐、耗时久的缺点使其难以满足大量样本DNA快速提取的要求,同时提取过程中需要使用氯仿、苯酚等有毒有害试剂,对操作人员的健康带来威胁,实验后产生的废弃物垃圾也可能会对环境产生污染。目前市面上的的细菌基因组DNA提取试剂盒主要利用溶菌酶破碎细胞壁,蛋白酶水解蛋白质,使基因组DNA与蛋白质分离,并通过硅胶膜离心柱收集DNA,使用这种试剂盒提取的DNA浓度高、质量好,且不使用氯仿等有毒有害试剂,但这些试剂盒费用昂贵,含有需要冷藏的组分,且DNA提取仍需1h以上的时间,因此也不适合作为大量微生物样本DNA提取的用途。随后科研人员相继研发出碱裂解法、沸水浴法等快速提取革兰阳性菌基因组DNA的方法,虽然这些 ...
【技术保护点】
1.一种DNA提取液,其特征在于,由溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和溶液Ⅳ组成;其中,溶液Ⅰ的组成成分包括氯化钠、EDTA和Tris-HCl;/n溶液Ⅱ是8%~12.5%质量体积分数的十二烷基硫酸三乙醇胺;/n溶液Ⅲ是2.5~3.2mol/L氯化钾;/n溶液Ⅳ是水杨酸甲酯。/n
【技术特征摘要】
1.一种DNA提取液,其特征在于,由溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和溶液Ⅳ组成;其中,溶液Ⅰ的组成成分包括氯化钠、EDTA和Tris-HCl;
溶液Ⅱ是8%~12.5%质量体积分数的十二烷基硫酸三乙醇胺;
溶液Ⅲ是2.5~3.2mol/L氯化钾;
溶液Ⅳ是水杨酸甲酯。
2.按照权利要求1所述的DNA提取液,其特征在于,溶液Ⅰ的各成分的浓度为:氯化钠0.15~0.20mol/L,EDTA10~20mmol/L,Tris-HCl10~20mmol/L,其中,Tris-HCl的pH值为8.5。
3.按照权利要求2所述的DNA提取液,其特征在于,溶液Ⅰ的各成分的浓度为:氯化钠0.15mol/L,EDTA10mmol/L,Tris-HCl15mmol/L。
4.按照权利要求1所述的DNA提取液,其特征在于,溶液Ⅱ是10%质量体积分数的十二烷基硫酸三乙醇胺;溶液Ⅲ是3mol/L氯化钾。
5.权利要求1所述的DNA提取液在提取细菌DNA中的应用。
6.按照权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的细菌是革兰氏阳性菌。
7.一种应用权利要求1所述DNA提取液提取细菌基因组DNA的方法,其特征在于,包括:
(1...
【专利技术属性】
技术研发人员:许崇敬,李凤兰,贺付蒙,徐永清,冯旭,
申请(专利权)人:东北农业大学,
类型:发明
国别省市:黑龙江;23
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