一种植物叶片基因组DNA快速提取方法技术

本发明专利技术公开了一种植物叶片基因组DNA快速提取方法。本发明专利技术所提供的提取植物叶片基因组DNA的方法包括：将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；加入提取缓冲液，95‑100℃加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；所述提取缓冲液为pH 7.0‑8.0的10‑20mM Tris‑HCl。本发明专利技术操作简单，大幅减少了提取实验所用的时间，适用于大量植物叶片样品的基因组DNA提取。更重要的是，本发明专利技术所用试剂成本低廉，容易配制；且无需有毒有害试剂，对操作人员和操作环境安全无毒。本发明专利技术的方法适用性广，能应用于多种植物。

【技术实现步骤摘要】
一种植物叶片基因组DNA快速提取方法
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种植物叶片基因组DNA快速提取方法。
技术介绍
基因组DNA是生物遗传信息的载体。以基因组DNA为模板，通过PCR扩增获取基因组DNA信息是研究基因结构和功能的必要步骤。目前，实验室常用的植物基因组DNA提取方法主要有三种：SDS提取法、CTAB提取法和高盐低pH提取法。这三种方法操作繁琐，提取过程中需使用SDS、CTAB、β-巯基乙醇、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇等有毒有害的试剂。市场上常见的植物基因组DNA提取试剂盒，一般利用膜吸附柱或磁珠分离基因组DNA。虽然试剂盒法在一定程度上简化了操作步骤，但仍然略显繁琐，更适用于少量样本的植物基因组DNA提取，无法满足大量样本的基因组提取实验。此外，试剂盒法虽然减少了有毒有害试剂的使用量，但仍然无法完全避免使用这些试剂。
技术实现思路
为了有效解决上述技术问题，本专利技术旨在提供一种简单、无毒、高效，且对实验室设备条件要求不高的快速提取植物基因组DNA的方法。第一方面，本专利技术要求保护一种提取植物叶片基因组DNA的方法。本专利技术所要求保护的提取植物叶片基因组DNA的方法，可包括如下步骤：(A)将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；(B)向步骤(A)处理后的样品中加入提取缓冲液，95-100℃(如100℃)加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；所述提取缓冲液为pH7.0-8.0的10-20mMTris-HCl(如pH8.0的20mMTris-HCl)。在步骤(A)中，所述预冷的时间应至少为10秒(如10秒)。在本专利技术的具体实施方式中，步骤(A)具体为：取50-100mg植物叶片，置于1.5mL离心管中，再取一个组织研磨杵放入离心管中，一并浸于液氮中预冷10秒。然后用组织研磨杵捣碎叶片组织10秒，使叶片组织变成粉末状。在步骤(B)中，所述加热的时间可为5-10分钟(如10分钟)。所述离心可为12000g离心5-10分钟(如5分钟)。在步骤(B)中，所述提取缓冲液的用量与步骤(A)中所述植物叶片的用量配比可为200μL：50-100mg。在所述方法中，所述植物叶片可为1月龄叶片或2月龄叶片。在所述方法中，不使用有毒有害试剂(如SDS、CTAB、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇和β-巯基乙醇等)；不使用组织研磨仪。第二方面，本专利技术要求保护一种对植物基因组中目的基因进行PCR检测的方法。本专利技术要求保护的对植物基因组中目的基因进行PCR检测的方法，可包括如下步骤：P1、利用前文第一方面中所述的方法制备得到植物叶片基因组DNA粗提液；P2、直接以植物叶片基因组DNA粗提液为模板，针对目的基因进行PCR扩增。在步骤P2中，进行所述PCR扩增时的反应体系中，作为模板的所述植物叶片基因组DNA粗提液的用量可为0.5-2.0μL(如1.0μL)。在本专利技术的具体实施方式中，步骤P2中，进行所述PCR扩增时的反应体系为：2×TaqMix10.0μL；浓度均为10μM的正向引物和反向引物各0.8μL；作为模板的所述植物叶片基因组DNA粗提液1.0μL；ddH2O补足至20μL。第三方面，本专利技术要求保护前文第一方面或第二方面中所述方法在对转基因植物和/或基因编辑植物进行检测中的应用。进一步地，所述植物可为双子叶植物或单子叶植物；更进一步地，所述单子叶植物为禾本科植物；所述双子叶植物为十字花科植物或茄科植物；更加具体地，所述植物为水稻、玉米、拟南芥或番茄。在本专利技术的具体实施方式中，所述植物具体为水稻中花10、玉米B73、拟南芥Columbia或番茄Micro-Tom。本专利技术操作简单，大幅减少了提取实验所用的时间，适用于大量植物叶片样品的基因组DNA提取。更重要的是，本专利技术所用试剂为20mMTris-HCl(pH8.0)，成本低廉，容易配制；且无需SDS、CTAB、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇和β-巯基乙醇等有毒有害试剂，对操作人员和操作环境安全无毒。本专利技术的方法适用性广，能应用于水稻、玉米、拟南芥、番茄等多种植物。附图说明图1为利用本专利技术的方法提取多种植物叶片基因组DNA的PCR检测。1、2：1月龄叶片基因组DNA，立即进行PCR扩增；3、4：1月龄叶片基因组DNA，4℃放置1天后进行PCR扩增；5、6：2月龄叶片基因组DNA，立即进行PCR扩增；7、8：2月龄叶片基因组DNA，4℃放置1天后进行PCR扩增。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。水稻(中花10)：记载于“PichangGong,ChaoyingHe.Uncoveringdivergenceofriceexonjunctioncomplexcoreheterodimergeneduplicationrevealstheiressentialroleingrowth,development,andreproduction.PlantPhysiology,2014,165(3):1047-1061”一文中的‘zhonghua10’，公众可从申请人处获得，仅可用于重复本专利技术实验使用，不得他用。玉米(B73)：记载于“Li-MinZhang,etal.EarlytranscriptomicadaptationtoNa2CO3stressalteredtheexpressionofaquarterofthetotalgenesinthemaizegenomeandexhibitedsharedanddistinctiveprofileswithNaClandhighpHstresses.JournalofIntegrativePlantBiology,2013,55(11):1147-1165”一文，公众可从申请人处获得，仅可用于重复本专利技术实验使用，不得他用。拟南芥(Columbia生态型)：记载于“RuiliLi,etal.Amembranemicrodomain-associatedprotein,ArabidopsisFlot1,isinvolvedinaclathrin-independentendocyticpathwayandisrequiredforseedlingdevelopment.ThePlantCell,2012,24(5):2105-2122”一文，公众可从申请人处获得，仅可用于重复本专利技术实验使用，不得他用。番茄(Micro-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取植物叶片基因组DNA的方法，包括如下步骤：/n(A)将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；/n(B)向步骤(A)处理后的样品中加入提取缓冲液，95-100℃加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；/n所述提取缓冲液为pH 7.0-8.0的10-20mM Tris-HCl。/n

【技术特征摘要】
1.一种提取植物叶片基因组DNA的方法，包括如下步骤：
(A)将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；
(B)向步骤(A)处理后的样品中加入提取缓冲液，95-100℃加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；
所述提取缓冲液为pH7.0-8.0的10-20mMTris-HCl。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(A)中，所述预冷的时间为至少10秒。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(B)中，所述加热的时间为5-10分钟；和/或
步骤(B)中，所述离心为12000g离心5-10分钟。


4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(B)中，所述提取缓冲液的用量与步骤(A)中所述植物叶片的用量配比为200μL：50-100mg。


5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述植物叶片为1月龄叶片或2月龄叶片。

【专利技术属性】
技术研发人员：秦国政，王威浩，王豫颖，王柯茹，
申请(专利权)人：中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11