【技术实现步骤摘要】
血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rR188I及其构建方法和应用
本专利技术涉及一株血清4型禽腺病毒疫苗株及其构建方法和应用，特别涉及一株通过点突变获得的血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株及其构建方法和应用。本专利技术属于医药
技术介绍
禽腺病毒(FAdVs)在全世界广泛流行，流行毒株主要有FAdV-4、FAdV-11、FAdV-1、FAdV-8a、FAdV-8b等血清型，给家禽养殖业造成了严重的经济损失。FAdVs感染最早于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发现，因此该病也称为“安卡拉病”，之后在中国、日本、韩国、印度、美国、加拿大等不同国家和地区都有相关的报道。FAdVs根据群特异性抗原的不同可以分为3个群：I群包括传统的从鸡、火鸡、鹅及其他禽类获得的腺病毒；II群主要是和火鸡出血性肠炎、大理石脾病相关的腺病毒；III群主要是与减蛋综合征病毒有关的一类病毒。I群腺病毒根据分子结构可以进一步分为5个种(A-E)，根据血清型不同分为12个血清型(1-7、8a、8b、9-11)。I群禽腺病毒致病性差异很大，致病毒株主要...
【技术保护点】
1.血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株，其特征在于，所述的疫苗株是通过将我国FAdV-4新近分离株HLJFAd15的Hexon基因的第563位碱基由G突变为A，即编码的第188位氨基酸由R突变位I，然后通过病毒拯救后获得的。/n
【技术特征摘要】
1.血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株，其特征在于，所述的疫苗株是通过将我国FAdV-4新近分离株HLJFAd15的Hexon基因的第563位碱基由G突变为A，即编码的第188位氨基酸由R突变位I，然后通过病毒拯救后获得的。
2.如权利要求1所述的血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株，其特征在于，所述的FAdV-4新近分离株HLJFAd15的全基因组GenBank序列号为KU991797.1。
3.如权利要求1或2所述的血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株，其特征在于，所述的血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株是通过以下方法构建得到的：
(1)含有HLJFAd15毒株完整基因组的粘粒的构建
获得FAdV-4新近分离株HLJFAd15毒株的全基因序列，HLJFAd15的全基因组GenBank序列号为KU991797，连接至pCC1Fos载体，经噬菌体包装后电转进EPI300感受态细胞中，涂布在氯霉素抗性LB平板上，挑取阳性克隆，经ZRBACDNAminiprepKit提取粘粒后，使用载体通用引物测序，得到含有HLJFAd15毒株完整基因组的粘粒，命名为Fos-rFAdV4；
(2)rR188I感染性克隆粘粒的构建
将HLJFAd15的Hexon基因克隆至pCAGGS载体中，所用引物为pCAGGS-HexonF/R，然后将Hexon基因的第563位碱基由G突变为A，即编码的第188位氨基酸由R突变为I，所用引物为pR188IF/R，生成突变质粒pCAGGS-Hexon-R188I；接着使用Counter-SelectionBACModificationKit构建rR188I感染性克隆粘粒，方法如下：首先将步骤(1)构建的Fos-rFAdV4电转进DH10B感受态细胞中，通过氯霉素抗生素筛选阳性克隆；然后再将Counter-SelectionBACModificationKit试剂盒中的重组酶质粒pRedE/T电转进含Fos-rFAdV4的DH10B感受态细胞中，通过氯霉素和链霉素筛选阳性克隆；以Counter-SelectionBACModificationKit试剂盒中的rpsl-neo表达盒DNA为模板，使用引物R188I-rpslneoF和R188I-rpslneoR扩增带有需替换Hexon基因片段两端各50bp同源臂的rpsl-neo表达盒，将回收的PCR产物直接转化进入经L-阿拉伯糖诱导的含有Fos-rFAdV4和pRedE/T的DH10B感受态细胞中，即可替换原始Hexon基因，通过氯霉素、链霉素和卡那霉素抗生素筛选阳性克隆，得到Fos-rFAdV4-Hexon-rpslneo；再...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘青，王笑梅，高玉龙，祁小乐，刘长军，崔红玉，刘爱晶，张艳萍，李凯，高立，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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