紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法及其应用，包括菌种培养、过表达载体构建、过表达质粒转化等步骤。本发明专利技术成功克隆出紫色红曲菌M1菌株中的comp52324_c4基因，验证其存在，并成功构建了过表达质粒pBARGPE‑Hygro‑

【技术实现步骤摘要】
紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法及其应用
本专利技术涉及一种紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法，属于生物基因工程领域。
技术介绍
红曲菌是一种嗜酸性丝状腐生真菌，在许多亚洲国家特别是东亚地区作为传统食品加工的微生物。它的次级代谢产物主要包括MonacolinK、红曲色素、桔霉素、麦角固醇、γ-氨基丁酸等。MonacolinK是红曲菌产生的一种聚酮类次级代谢产物，具有降血压的功效，可以治疗心血管疾病且疗效显著。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法。本专利技术通过研究发现，紫色红曲菌中comp52324_c4基因可以抑制和降低紫色红曲菌的monacolinK产量。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：利用基因过表达技术对comp52324_c4基因进行过表达，通过电击转化方式将重组质粒导入红曲菌原生质体，并成功筛选出重组菌株。comp52324_c4基因序列如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 紫色红曲菌中comp52324_c4基因在降低紫色红曲菌monacolin K产量上的应用。/n

【技术特征摘要】
1.紫色红曲菌中comp52324_c4基因在降低紫色红曲菌monacolinK产量上的应用。


2.紫色红曲菌comp52324_c4基因过表达菌株的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：
（1）菌株培养
由北京工商大学食品添加剂工程技术中心保存的紫色红曲菌M1（菌种号：CGMCC.30568），将M1菌株在固体培养基(g/L)上活化2代，取菌液接种到种子培养基(g/L)中，30℃、200r/min培养2d，按10%的接种量将种子液接种到发酵养基(g/L)中，30℃、150r/min培养2d，再25℃、150r/min培养13d；
（2）comp52324_c4基因过表达菌株的构建
设计引物序列如下：
C4-F：GAGTCGCTGGAGGGGTAATTTC；
C4-R：AGGATACGGGTATGTAGGATTG；
利用上述引物进行comp52324_c4目的基因扩增，
以pBARGPE-Hygro（武汉淼灵生物公司）为过表达载体，通过DNAman软件选出该载体上的两个单一酶切位点，通过双酶切将扩增出的comp52324_c4目的基因进行连接，构建过表达pBARGPE-Hygro-c4重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，并进行重组质粒的提取和验证；
（3）过表达质粒转化
将红曲霉M1接种于PDA培养基平板上，在30℃恒温培养箱中培养4d；在每个培养皿中加入10ml灭菌水，用接种环轻轻刮擦细菌表面以释放孢子，制备孢子悬浮液；将孢子悬液（200...

【专利技术属性】
技术研发人员：张婵，王成涛，孙宝国，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：北京;11