一种分子组装类荧光探针及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种分子组装类荧光探针及其制备方法与应用。该荧光探针是以赫斯特荧光染料33258与超分子葫芦脲通过分子组装形成的。具体的制备方法为：用甘脲与多聚甲醛在酸性条件缩聚反应，制备CB[n]，然后通过它们在水中和不同浓度的盐酸中的溶解度不同，分离纯化得到各自相应的葫芦脲纯产物。将H33258用水溶解，加入CB[n]，使H33258与CB[n]的摩尔比为1:1‑2，搅拌，旋转蒸发浓缩溶液，然后冷冻干燥得到。该荧光探针能够快速而精确地识别Lys3以及P‑Lys3，提供了一种全新的甲基化赖氨酸和甲基化肽的具有高灵敏度和高特异性的检测手段，对于深入研究蛋白质甲基化修饰在生理过程中的调控作用有着重大的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种分子组装类荧光探针及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一种分子组装类荧光探针及其制备方法与应用。
技术介绍
赖氨酸甲基化是在赖氨酸甲基转移酶(lysinemethyltransferases，KMTs)催化作用下将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的一个至三个甲基转移到赖氨酸ε-胺侧链分别形成单甲基化(Me1)，二甲基化(Me2)，三甲基化(Me3)，是最常见的蛋白质翻译后修饰之一。赖氨酸甲基化修饰在很多生理过程的调控中发挥着重要的作用。研究表明：蛋白质中赖氨酸甲基化修饰可以调节目标蛋白质分子内或分子间的相互作用，影响它们和RNA的亲和作用，从而影响多种细胞进程，如转录调节、细胞定位、核糖体装配、RNA加工、不均一核糖核酸核糖体蛋白(hnRNPs)的成熟、蛋白质-蛋白质相互作用、准确翻译、细胞核运输、蛋白质与核酸的运输和代谢、细胞内信号传导等。到目前为止，甲基化修饰的蛋白质组学研究还是一个较新的领域。甲基化肽段的分离富集是对甲基化蛋白质组进行深入研究的关键。基于甲基化赖氨酸结合结构域的亲和方法也被引入到甲基化蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分子组装类荧光探针，其特征在于，其结构式分别如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种分子组装类荧光探针，其特征在于，其结构式分别如下：



所述分子组装类荧光探针是通过H33258与CB[n]非共价键相互作用组装所得，所述的CB[n]为CB[6]、CB[7]或CB[8]这三种葫芦脲中的任意一种。


2.如权利要求1所述的分子组装类荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将H33258用水溶解，加入CB[n]，使H33258与CB[n]的摩尔比为1:1-2，搅拌1-4h后，旋转蒸发浓缩溶液，然后冷冻干燥得到所述分子组装类荧光探针。


3.如权利要求1所述的分子组装类荧光探针在识别三甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
1)先配置浓度为3.0-10μM的荧光探针水溶液三份，在激发波长361nm条件下测其发射的荧光光谱，记录每一份荧光探针水溶液在400-650nm处的最大发射荧光强度I0A，I0B，I0C；
2)往三份溶液中分别加入Fmoc保护的赖氨酸、二甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸和三甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸并混合均匀，每种类型的赖氨酸与所述荧光探针的摩尔比为0.3-0.5，在激发波长361nm条件下分别测三份溶液发射的荧光光谱，记录其在400-650nm处的荧光强度I1A，I1B，I1C；
3)重复步骤2)n遍，使每次滴加的每种类型的赖氨酸的量与步骤2)相同，分别得到Fmoc保护的赖氨酸的荧光强度为I2A至InA；二甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸的荧光强度为I2B至InB；；三甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸的荧光强度为I2C至InC；
4)分别以荧光强度I0X,…InX对应的赖氨酸类型的摩尔数与荧光探针的摩尔数之比为横坐标，以I0X,…InX为纵坐标，做非线性拟合，即得到不同类型赖氨酸的荧光响应性曲线，其中X为A、B或C；若InX/I0X≤0.55时，则说明溶液中包含有三甲基取代的Fmoc保护的赖氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：卿光焱，陈缘愿，朱志超，
申请(专利权)人：武汉纺织大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42