一种小鼠脑脊液的抽取方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠脑脊液的抽取方法，属于生物医学技术领域。该方法是先将玻璃电极采用玻璃电极拉制器通过加热熔断拉制成电极吸管，然后将麻醉后的小鼠固定，切开脑部皮肤后，采用钝性分离肌肉，使白色硬脊膜暴露，最后将制得的电极吸管从硬脊膜左侧或右侧插入延髓池，通过电极习惯的虹吸作用提取脑脊液。本发明专利技术的方法简单易行、重复性好，手术创伤小，不易感染，手术后将缺口缝合，饲养正常后可再次抽取，小鼠存活率高，可反复抽取。

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠脑脊液的抽取方法
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种小鼠脑脊液的抽取方法。
技术介绍
脑脊液（cerebrospinalfluid，CSF）是一种无色透明的液体，走行于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管；其性质与血浆和淋巴液相似，略带黏性。脑脊液不仅为中枢神经系统提供营养物质、运输代谢产物，还可以调节大脑、脊髓内部压力，起到保护性的作用。中枢系统疾病常常以脑脊液为观察对象，检测脑脊液中目的物含量变化。若中枢神经系统发生病变，神经细胞代谢紊乱，将使脑脊液的性状和成分发生改变。脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor，BDNF)是神经营养因子家族中的主要成员，广泛分布在中枢和周围神经系统内；亦是脑脊液的重要内含物之一。BDNF对神经元的生长、分化、存活及损伤后修复等都具有十分重要的作用。有关研究表明，抑郁症患者血清内BDNF的含量显著降低；癫痫儿童血清BDNF的含量显著高于与健康儿童；帕金森患者的血清BDNF含量低，而且含量越低,患者的认知障碍就越明显。在小鼠模型中发现，BDNF表达量的下调是年龄相关性的学习记忆衰退的关键因素。因此，采用何种方法抽取脑脊液，对于脑脊液的研究有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种小鼠脑脊液的抽取方法，采用该方法可以顺利抽取小鼠脑脊液。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术手段：一种小鼠脑脊液的抽取方法，包括以下步骤：步骤1，玻璃电极的拉制，将玻璃电极采用玻璃电极拉制器通过加热熔断拉制成电极吸管；步骤2，组织分离，将麻醉后的小鼠固定，切开脑部皮肤后，采用钝性分离肌肉，使白色硬脊膜暴露；步骤3，脑脊液抽取，将步骤1制得的电极吸管从硬脊膜左侧或右侧插入延髓池，通过电极习惯的虹吸作用提取脑脊液。在本专利技术中，玻璃电极采用的是SUTTER公司生产的BF120-69-15玻璃电极，其内径为0.69mm、外径为1.2mm、长度为15cm。本专利技术通过钝性分离组织，利用电极虹吸作用可以在短时间内抽取出5-7μL脑脊液；该方法简单易行、重复性好，手术创伤小，不易感染，手术后将缺口缝合，饲养正常后可再次抽取，小鼠存活率高，可反复抽取。附图说明图1为电极吸管的示意图。图2为延髓池的示意图。图3中(A)为ELISA试剂盒标准曲线检测；(B)为B6和ICR小鼠脑脊液内BDNF的表达水平。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步详细说明，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。实施例11.玻璃电极的拉制预先设置好玻璃电极拉制器（SUTTER公司P-97微电极拉制仪）的相关参数（HEAT=50，PULL=0，VEL=100，TIME=100），捏住玻璃电极（SUTTERBF120-69-15）两端将其固定在拉制器轨道中，使玻璃电极处于加热丝中央；加热丝熔断电极后通过两端拉力将玻璃电极拉制成两段，电极吸管即制作成功，如图1所示。2.组织分离异氟烷麻醉后将小鼠放置在操作台上，头部去毛后用酒精棉球对皮肤进行消毒，沿脑后两耳连线正中位置纵行切开小口；用弯镊夹住皮肤往两侧拉开皮肤，钝性分离肌肉（避免出血，污染手术视野），重复操作直至暴露白色硬脊膜（可见节奏性搏动）。3.脑脊液提取暴露硬脊膜后用酒精棉球擦拭干净视野。取玻璃电极一根，用剪刀稍微剪短尖端后，从硬脊膜左侧或右侧轻轻的缓慢的旋转下针至延髓池，图2所示。观察到玻璃电极中是有清亮液体（脑脊液）出现后立即停止旋入，静待液体上升。液体不再上升后轻轻抽出，玻璃电极内液体即为脑脊液；如果有血液深入，可以低温离心后取白色上清。将液体转移至无菌EP管内，低温保存，以备后续实验使用。缝合手术缺口，饲养正常后可再次抽取。4.ELISA检测采用ELISA试剂盒（RD公司，货号DBNT00，TotalBDNFQuantikineELISA）检测抽取得到的B6和ICR小鼠脑脊液中BDNF的含量，用酶标仪读取OD值，绘制标准曲线后计算出样品浓度。如图3所示，B6和ICR小鼠BDNF的基础值约为600-630pg/mL，B6和ICR小鼠BDNF的基础值相近，没有显著性差异。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠脑脊液的抽取方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1，玻璃电极的拉制，将玻璃电极采用玻璃电极拉制器通过加热熔断拉制成电极吸管；/n步骤2，组织分离，将麻醉后的小鼠固定，切开脑部皮肤后，采用钝性分离肌肉，使白色硬脊膜暴露；/n步骤3，脑脊液抽取，将步骤1制得的电极吸管从硬脊膜左侧或右侧插入延髓池，通过电极习惯的虹吸作用提取脑脊液。/n

【技术特征摘要】
1.一种小鼠脑脊液的抽取方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，玻璃电极的拉制，将玻璃电极采用玻璃电极拉制器通过加热熔断拉制成电极吸管；
步骤2，组织分离，将麻醉后...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘静莹，杨日云，夏盼慧，包璟崟，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32