从含有核酸的样品中分离核酸的方法及用于该方法的样品处理试剂技术

本发明专利技术提供从含有核酸的样品中分离核酸的方法及用于该方法的样品处理试剂。所述样品处理试剂含有：0.5重量％～15重量％的选自N

【技术实现步骤摘要】
从含有核酸的样品中分离核酸的方法及用于该方法的样品处理试剂
[0001]本申请是申请日为2016年9月9日、优先权日为2015年9月10日、中国专利申请号为201680062710.4、专利技术名称为“从含有核酸的样品中分离核酸的方法及用于该方法的装置”的分案申请。


[0002]本专利技术涉及从生物体试样等含有核酸的样品中分离核酸的方法。本专利技术还涉及用于从含有核酸的样品中分离核酸的装置。

技术介绍

[0003]基因检查通过对核酸进行解析，能够高灵敏度且在短时间内对结果进行判定，是在医疗、农畜水产、品质检查等多种领域中应用的产业上重要的检查方法。为了该检查，需要从样品中对核酸进行洗脱、精制，作为核酸精制法，最为常用的是应用了在促溶剂的存在下、核酸与核酸吸附性载体相结合的性质的结合
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洗脱法(专利文献1、2)。该精制法由所下述工序构成：(a)溶解工序：样品的溶解和核酸的溶解析出、(b)吸附工序：核酸吸附性载体与核酸的结合、(c)洗涤工序：结合于核酸吸附性载体的核酸的洗涤、(d)溶解析出工序：核酸的溶解析出；特别是与吸附柱组合的方法是能够精制高纯度核酸的优异方法。
[0004]但是，该方法需要熟练的研究者在设备齐备的实验室等中使用离心机或微量移液器、旋涡混合器、培养箱等理化学机器进行作业，是技术难度高的作业。实际上，在需要进行基因检查的医疗、农畜水产、食品等领域中，不具备具有所需技术的人才或设备的机构也很多。这种机构中，实际情况是将本来能够在短时间内进行结果判定的基因检查委托至花费时间和费用的外单位，无法充分地发挥作为基因检查特征的结果判定的迅速性。
[0005]另外，成为基因检查对象的样品多是病毒或细菌等具有病原性的物质，对检查作业者的感染风险经常成为问题。因此，基因检查多需要使用对应于生物安全等级的装备、设备，这些设备或装备的使用对于不需要其的情况而言，是非常繁琐的操作。实际情况是会对作业者造成很大的负担。
[0006]专利文献3中公开了使含有自样品溶解析出的核酸的核酸提取液接触于沸石、使不需要的物质吸附在沸石上，对核酸进行精制的方法，但该方法不具有如结合
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洗脱法那样对核酸进行浓缩精制的能力，存在依赖于样品中的核酸浓度的课题。另外，能够吸附除去的杂质是有限的，精制度比结合
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洗脱法差，在代替结合
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洗脱法方面技术水平还不足。
[0007]专利文献4中公开了用于痰中所含抗酸杆菌的基因检测的前处理方法。该方法的目的是从痰中将抗酸杆菌的菌体分离，而并非是从痰中对基因(核酸)进行提取的方法。
[0008]专利文献5中公开了适于自动化及小型化、使用了核酸吸附性多孔性膜的核酸的分离精制方法。专利文献5中作为核酸吸附性多孔性膜，其特征在于使用核酸以与离子键实质上无关的相互作用吸附的多孔性膜。专利文献5的方法仍无法解决现有的结合
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洗脱法的上述课题。
[0009]专利文献6中公开了用于使溶液中的核酸吸附在固相载体上的促溶剂的组成。但是，专利文献6中未公开用于解决现有的结合
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洗脱法的上述课题的手段。
[0010]现有技术文献
[0011]专利文献
[0012]专利文献1：日本特开2001
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78790号公报
[0013]专利文献2：日本特表2014
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526255号公报
[0014]专利文献3：国际公开WO2009/060847
[0015]专利文献4：日本特开2009
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100688号公报
[0016]专利文献5：日本特开2005
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168449号公报
[0017]专利文献6：美国专利公开US2009/0306359

技术实现思路

[0018]专利技术所要解决的课题
[0019]本专利技术的课题在于提供从含有核酸的样品中有效率地分离核酸的方法、用于该方法的装置及用于该方法的试剂。
[0020]用于解决课题的手段
[0021]本专利技术中，作为用于解决上述课题的手段，提供以下的专利技术。
[0022]本专利技术提供一种方法，其为通过使含有核酸的样品与使样品中的核酸游离的处理试剂的混合物与吸附核酸的载体接触，从含有核酸的样品中将核酸分离的方法，
[0023]其特征在于，使用具备处理试剂收纳容器和核酸采集构件的装置，
[0024]所述处理试剂收纳容器将使样品中的核酸游离的处理试剂收纳在容器内空间，具有释放所述处理试剂的释放口且按照容器内空间的体积能够减少的方式构成；
[0025]所述核酸采集构件形成有用于收纳样品的收纳空间，在所述收纳空间的一侧形成有按照能够供给处理试剂的方式与所述处理试剂收纳容器连接的处理试剂供给口，在所述收纳空间的另一侧形成有介由在透过所述混合物的同时将所述混合物中游离的核酸吸附的载体将所述混合物排出的混合物排出口，
[0026]所述处理试剂收纳容器的释放口安装有对所述释放口进行密封的盖体，
[0027]所述核酸采集构件按照在将所述处理试剂收纳容器与所述核酸采集构件的处理试剂供给口连接时、由所述盖体密封的所述释放口开放、将所述释放口与所述处理试剂供给口连通的方式构成，
[0028]所述方法包含以下工序：
[0029]工序1：在所述核酸采集构件的收纳空间中收纳样品；
[0030]工序2：在工序1后，将所述处理试剂收纳容器与所述核酸采集构件的处理试剂供给口连接，使所述释放口与所述处理试剂供给口连通；
[0031]工序3：在工序2中形成的、所述处理试剂收纳容器的容器内空间与所述核酸采集构件的收纳空间成为一体的混合用空间内，将所述样品与所述处理试剂混合形成所述混合物，在所述混合物内使所述样品中的核酸游离；
[0032]工序4：通过减少所述处理试剂收纳容器的容器内空间的体积来压送含有工序3中游离的核酸的所述混合物，介由所述载体从所述核酸采集构件的混合物排出口排出。
[0033]本专利技术方法中使用的装置优选具备后述装置的特征。
[0034]本专利技术的方法优选在工序4后进一步包含工序5：使用洗涤液对载体进行洗涤、从载体中将除核酸以外的不需要成分除去。
[0035]本专利技术的方法优选在工序5后进一步包含工序6：使将核酸洗脱的洗脱液与载体接触、从载体中将核酸洗脱。
[0036]本专利技术的方法中，优选所述处理试剂含有降低微生物感染性的成分和使核酸游离的成分。
[0037]本专利技术还提供一种装置，其为通过使含有核酸的样品与使样品中的核酸游离的处理试剂的混合物与吸附核酸的载体接触，从含有核酸的样品中将核酸分离的装置，其具备处理试剂收纳容器和核酸采集构件，
[0038]所述处理试剂收纳容器将使样品中的核酸游离的处理试剂收纳在容器内空间，具有释放所述处理试剂的释放口且按照容器内空间的体积能够减少的方式构成；
[0039]所述核酸采集构件形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于使含有通过S
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S键交联的成分的样品中的核酸游离、使其吸附于含有二氧化硅的载体的样品处理试剂，其含有：0.5重量％～15重量％的选自N
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乙酰基
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L
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半胱氨酸、L
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半胱氨酸乙酯、L
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半胱氨酸甲酯、N
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乙基
‑
L
‑
半胱氨酸、N
‑
甲基
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L
‑
半胱氨酸和它们的盐中的至少一种硫醇系还原剂；3重量％～20重量％...

【专利技术属性】
技术研发人员：冈岛基范，西园贵志，宫本重彦，田中穂积，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：发明
国别省市：