山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用制造技术

本发明专利技术公开了山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用。具体制备工艺为：提取、在线自由基抑制剂组分筛选、微孔树脂柱中压色谱粗分、在线自由基抑制剂筛选及反相制备柱制备五个步骤。上述方法制得的山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Saximonsin B自由基抑制剂可在制备自由基抑制药物或保健食品中应用，具体作为有效成分按药学上或者食品科学上可接受的任何载体制成各类药用制剂或者保健类食品。本发明专利技术制备工艺中的提取溶剂、微孔树脂柱、反相色谱柱分离溶剂及反相色谱分离用材均可回收利用；原料来源广泛，甲醇室温冷浸提取等工艺步骤均可实现规模化操作，且高压制备色谱分离可以保证产品的纯度大于95％。

【技术实现步骤摘要】
山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用
本专利技术涉及山地虎耳草中新的二芳基壬烷类自由基抑制剂分离
，具体涉及山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用。
技术介绍
山地虎耳草(Saxifragamontana)，为虎耳草科(Saxifragaceae)虎耳草属(Saxifraga)的多年生草本植物，藏药名：“寒仁交木”，主要分布在中国陕西、青海、四川西部、云南西北部及西藏东部和南部。主要功效：清热解毒，平肝潜阳。主治肝胆湿热、脾胃湿热，痈肿疮毒用于肝阳上亢所致的头痛。现代药理学研究证明酚类是虎耳草属植物主要活性成分。文献报道，酚类化合物具有良好的清除自由基活性。为了进一步加快山地虎耳草的质量评价、生产销售及相关新药的研发步伐，有必要从中挖掘其潜在的活性成分。目前，仅有一篇有关山地虎耳草中化学成分(DiversityofchemicalconstituentsfromSaxifragamontana,Jun-XiLiu,Duo-LongDi,Yan-PingShi,2008,55,863-870)研究报道，该研究利用传统植物化学手段从山地虎耳草中分离鉴定了包括苯丙素类、苯甲酸类、黄酮类、萜类等18个化合物。有关山地虎耳草中自由抑制剂的分离制备工艺及其应用并未见文献报道。因此，亟需建立一种工艺简单、规模化从山地虎耳草中分离制备新的二芳基壬烷类自由基抑制剂的方法。
技术实现思路
基于上述技术问题，本专利技术的目的是提供山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用。本专利技术保护山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂，其中，该二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂呈棕色油状，其名称为二芳基壬烷类SaximonsinB自由基抑制剂，其分子式为C21H22O5，其化学结构式为：本专利技术保护山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂的分离制备工艺，具体包括如下步骤：步骤1，提取：将山地虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A经减压干燥得山地虎耳草提取物，按聚酰胺的量：山地虎耳草提取物的量＝3:1拌样并减压干燥，即得山地虎耳草提取物拌样样品；步骤2，在线自由基抑制剂组分筛选：在1g山地虎耳草拌样样品中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草甲醇样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草粗样中自由基抑制剂组分，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18(250×4.6mm，5μm)反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；步骤3，微孔树脂柱中压色谱粗分：山地虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第4个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr4，其中，所述微孔树脂柱的中压色谱分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为甲醇，色谱条件为0～90min，0～100％B，进样量为35.4g，流速为50mL/min；步骤4，在线自由基抑制剂筛选：在山地虎耳草目标组分中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草含有目标组分的溶液，即滤液C，取1mL滤液C，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草目标组分中自由基抑制剂，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18(250×4.6mm，5μm)反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；步骤5，反相制备柱制备：所述滤液C经反相制备柱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中对应的色谱峰馏分Fr4-2，色谱峰馏分Fr4-2经减压干燥即得纯度大于95％的新的二芳基壬烷类自由基抑制剂Fr4-2，并命名为SaximonsinB；其中，所述反相制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250mm、直径20mm，反相色谱柱固定相为5μm耐纯水C18，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，14％B洗脱，进样体积为4mL，流速为19mL/min。进一步的，所述步骤1、步骤3和步骤5中，减压干燥的条件均为：真空度50～250mbar，温度40～60℃。进一步的，所述步骤2中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，5～50％B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为25μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。进一步的，所述步骤4中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，14％B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为25μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。进一步的，步骤2、步骤4及步骤5所述的耐纯水C18反相色谱柱为耐纯水ReprosilC18反相色谱柱、耐纯水MegresC18反相色谱柱及耐纯水Kromasil100-5-C18(w)反相色谱柱中的任意一种。本专利技术还保护上述山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂的应用，其中，该二芳基壬烷类SaximonsinB自由基抑制剂可在制备自由基抑制药物或保健食品中应用，具体作为有效成分按药学上可接受的任何载体制成各类药用制剂，或作为有效成分按食品科学上可接受的任何载体制成各类保健类食品。相比于现有的技术，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术成本低廉、产品纯度高提取使用的溶剂，微孔树脂柱、反相色谱柱分离所使用的溶剂均可以回收利用；反相色谱分离使用的材料均可以重复利用，回收利用的溶剂和重复利用的分离材料保证了较低廉的分离平均成本，高压制备色谱分离可以保证产品的纯度大于95％。(2)本专利技术的制备方法可实现规模化生产需要原料要求不高、成本低廉，一般野生的或市售的山地虎耳草均可，易于批量备料；甲醇室温冷浸提取，易于操作；分离采用微孔树脂柱粗分，该微孔树脂分离材料可以装于中压柱层析系统中，易于实现规模化；分离纯化中使用的反相制备液相色谱为快速等度方法，也非常适宜规模生产。附图说明图1为本专利技术山地虎耳草总样在线HPLC-DPPH筛选色谱图；图2为本专利技术山地虎耳草提取物拌样样品微孔树脂中压色谱分离图；图3为本专利技术山地虎耳草目标组分在线HPL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂，其特征在于，该二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂呈棕色油状，其名称为二芳基壬烷类Saximonsin B自由基抑制剂，其分子式为C

【技术特征摘要】
1.山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂，其特征在于，该二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂呈棕色油状，其名称为二芳基壬烷类SaximonsinB自由基抑制剂，其分子式为C21H22O5，其化学结构式为：





2.根据权利要求1所述的山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅱ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：
步骤1，提取：将山地虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A经减压干燥得山地虎耳草提取物，按聚酰胺的量：山地虎耳草提取物的量＝3:1拌样并减压干燥，即得山地虎耳草提取物拌样样品；
步骤2，在线自由基抑制剂组分筛选：在1g山地虎耳草拌样样品中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草甲醇样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草粗样中自由基抑制剂组分，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18(250×4.6mm，5μm)反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；
步骤3，微孔树脂柱中压色谱粗分：山地虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第4个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr4，其中，所述微孔树脂柱的中压色谱分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为甲醇，色谱条件为0～90min，0～100％B，进样量为35.4g，流速为50mL/min；
步骤4，在线自由基抑制剂筛选：在山地虎耳草目标组分中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草含有目标组分的溶液，即滤液C，取1mL滤液C，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草目标组分中自由基抑制剂，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18(250×4.6mm，5μm)反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPP...

【专利技术属性】
技术研发人员：党军，王启兰，陶燕铎，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海;63