一种高山杜鹃组培繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种高山杜鹃组培繁殖方法，包括如下步骤：S1、外植体诱导：将高山杜鹃的无菌外植体接种于诱导培养基中，诱导产生不定芽丛；S2、增殖及壮苗培养：将上述获得的不定芽丛切分后接入壮苗培养基中，培养成不定芽；S3、生根培养：将上述壮苗培养后的不定芽，接种于生根培养基中，培养28‑30天；再将不定芽取出并接入疏松多孔生根基质中，在无菌条件下培养，10‑15天开始诱导产生不定根，50‑60天长成具有完整根系的生根苗；S4、生根苗移栽：将上述生根苗进行移栽，获得成活高山杜鹃组培苗；本申请方法通过将壮苗培养的不定芽进行生根培养，将其培养成具有完整根系的生根苗，提高了高山杜鹃的移植成功率。

【技术实现步骤摘要】
一种高山杜鹃组培繁殖方法方法领域本专利技术属于植物组织培养方法领域，具体涉及一种高山杜鹃组培繁殖方法。背景方法高山杜鹃原产于我国，近年来，随着国内花卉市场的快速发展，高山杜鹃盆花不仅多次出现在国家领导人会见外宾的重要场合，还作为高档年宵花，受到消费者的追捧，每盆售价300～1000元不等，甚至高达8800元。目前，国内高山杜鹃盆花主要依赖从德国、比利时进口，价格居高不下；国内现有高山杜鹃原产地，仅有少量企业开展种苗生产和盆花生产。在国外，高山杜鹃种苗生产企业主要通过组织培养方式进行规模化生产；在国内，高山杜鹃种苗生产主要通过播种育苗，由于高山杜鹃的种子极小，需借助苔藓才能萌发，且幼苗生长缓慢，从而限制了高山杜鹃特定种或品种的规模化生产。现有高山杜鹃组织培养时，通常是取高山杜鹃的茎段作为外植体，将外植体置于乙醇中浸泡消毒，多次无菌水冲洗后，再次利用灭菌剂进行灭菌后，继续利用无菌水冲洗的方式来完成外植体的灭菌；然后将浸泡灭菌后的外植体置于诱导培养基中诱导产生不定芽，最后将诱导产生的不定芽洗去培养基后在瓶外炼苗生根。这种培养方法中，一方面消毒方式步骤复杂，消毒时间长，而且高山杜鹃体毛较多，且体毛多分布在茎段等处，传统消毒灭菌过程很难达到彻底消毒，并对外植体造成较大损伤；另一方面，将诱导产生的不定芽直接在瓶外培养生根，这种生根培养方式需要在较为苛刻的温湿度环境下进行，并且生根时间较长，生根率较低。公开号为CN102119660A的中国专利技术专利公开了一种高山杜鹃组培苗温室内生根培养以及炼苗移栽的方法，其在瓶苗出苗后，采用水培生根的方法在温室内生根培养后再进行移栽，在一定程度上提高了高山杜鹃组培苗的生根率和移栽成活率，但是该方法对温室内的温湿度和水的无菌条件要求较高，受季节性天气变化影响较大，更适合于春季使用。
技术实现思路
为了解决现有方法存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种高山杜鹃组培繁殖方法。本专利技术所采用的方法方案为：一种高山杜鹃组培繁殖方法，包括如下步骤：S1、外植体诱导：将高山杜鹃的无菌外植体接种于诱导培养基中，诱导产生不定芽丛；S2、增殖及壮苗培养：将上述产生的不定芽丛切分后接入壮苗培养基中，培养成不定芽；S3、生根培养：将上述壮苗培养后的不定芽，接种于生根培养基中，培养28-30天；再将不定芽取出并接入疏松多孔生根基质中，在无菌条件下培养，10-15天开始诱导产生不定根，50-60天长成具有完整根系的生根苗；S4、生根苗移栽：将上述生根苗进行移栽，获得成活高山杜鹃组培苗。作为优选地，所述无菌外植体为高山杜鹃的花苞或/和花蕾中的顶芽。作为优选地，所述步骤S1中，所述无菌外植体采用如下方法获得：选取具有4-5厘米长花枝、膨大未绽放且内部保持完好无菌环境的花蕾，采用乙醇溶液喷洒在花蕾表面进行灭菌后，在无菌环境下利用无菌刀片逐层环剥花蕾的苞片，获得无菌花苞或/和无菌顶芽，该无菌花苞或/和无菌顶芽为无菌外植体。作为优选地，所述步骤S1中，将无菌外植体接种于诱导培养基中后10-14天，对未污染外植体进行切分，然后再次接入诱导培养基中，80-90天后，获得愈伤组织并形成不定芽丛。作为优选地，所述步骤S4中，在生根苗移栽时，将具有完整根系的生根苗移栽入由草炭和珍珠岩混合得到的、pH值为5.9-7.0的炼苗移栽基质中，培养30-40天后获得成活高山杜鹃组培苗。作为优选地，所述S1中，诱导培养基由WPM培养基+TDZ+NAA+琼脂+蔗糖组成；所述TDZ的质量浓度为0.5～2mg·L-1；NAA的质量浓度为0～0.5mg·L-1；琼脂的质量浓度为7g·L-1；蔗糖的质量浓度为30g·L-1；所述诱导培养基的pH值为5.8。作为优选地，所述S2中，增殖及壮苗培养基由WPM培养基+TDZ+IBA+GA3+琼脂+蔗糖组成；所述TDZ的质量浓度为0～0.1mg·L-1；IBA的质量浓度为0～0.1mg·L-1；GA3的质量浓度为5～7mg·L-1；琼脂的质量浓度为7g·L-1；蔗糖的质量浓度为30g·L-1；所述增殖及壮苗培养基的pH值为5.8。作为优选地，所述S3中，生根培养基由WPM培养基+IBA+琼脂+蔗糖组成，所述IBA的质量浓度为0.5～1mg·L-1；琼脂的质量浓度为7g·L-1；蔗糖的质量浓度为30g·L-1；所述生根培养基的pH值为5.8。作为优选地，所述S3中，所述疏松多孔生根基质为疏松多孔珍珠岩和/或疏松多孔蛭石。作为优选地，所述S4中，生根苗移栽时，将生根苗移出无菌环境，并在空气相对湿度不低于80％且阴凉通风处进行培养。本专利技术的有益效果为：本申请在将高山杜鹃外植体经诱导、增殖和壮苗培养成粗壮不定芽后，将该不定芽接种于生根培养基中进行生根培养，培养28-30天后，使得不定芽充分吸收营养。期间，不定芽在生根培养基中获得进一步生长的同时，在其体内同步构建营养库，储存营养物质；再将不定芽取出，置于疏松多孔生根基质中，在无菌条件下培养，利用改良的具有透气性的生根基质，结合不定芽体内的库存营养，在无菌条件下培养出具有主动营养吸收功能的完整根系，提高组培苗自身的生长势，增强组培苗在炼苗移栽过程中对环境胁迫的抵抗力，提高移栽成活率，解决高山杜鹃特定品种规模化生产中，组培苗瓶外生根缓慢和炼苗移栽时间长、成活率低等问题。该组培繁殖过程中，培养材料始终处于无菌环境，直至炼苗移栽时，组培苗方才会移出无菌环境。整体组培步骤少，流程简单，而且有效减少了各种添加剂等的加入，充分利用自身营养达到生根效果，节约成本，降低能耗，具有环保性，实用性和适用性较强等特点。附图说明图1是该高山杜鹃组培实施例的不定芽诱导示意图；图2是该高山杜鹃组培实施例的壮苗培养示意图；图3是该高山杜鹃组培实施例的生根培养示意图；图4是该高山杜鹃组培实施例的具有完整根系的苗示意图；图5是该培苗移栽成活的高山杜鹃组培苗实施例的示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步阐释。本领域方法人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通方法人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件进行。所用试剂均为可以通过市售购买获得的常规产品。本申请高山杜鹃组培繁殖方法，包括如下步骤：S1、外植体诱导：将高山杜鹃的无菌外植体接种于诱导培养基中，诱导产生不定芽丛。诱导产生的不定芽丛如图1所示。无菌外植体可采用高山杜鹃任意可诱导产生不定芽的组织经常规方法消毒灭菌获得，只要保证外植体为无菌状态即可。在一种实施例中，无菌外植体为高山杜鹃的花苞或/和花蕾中的顶芽，其可直接在无菌环境下由花蕾中剥出。具体的，在连续晴日5天以上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高山杜鹃组培繁殖方法，包括如下步骤：/nS1、外植体诱导：将高山杜鹃的无菌外植体接种于诱导培养基中，诱导产生不定芽丛；/nS2、增殖及壮苗培养：将上述产生的不定芽丛切分后接入壮苗培养基中，培养成不定芽；/n其特征在于，还包括如下步骤，/nS3、生根培养：将上述壮苗培养后的不定芽，接种于生根培养基中，培养28-30天；再将不定芽取出并接入疏松多孔生根基质中，在无菌条件下培养，10-15天开始诱导产生不定根，50-60天长成具有完整根系的生根苗；/nS4、生根苗移栽：将上述生根苗进行移栽，获得成活高山杜鹃组培苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种高山杜鹃组培繁殖方法，包括如下步骤：
S1、外植体诱导：将高山杜鹃的无菌外植体接种于诱导培养基中，诱导产生不定芽丛；
S2、增殖及壮苗培养：将上述产生的不定芽丛切分后接入壮苗培养基中，培养成不定芽；
其特征在于，还包括如下步骤，
S3、生根培养：将上述壮苗培养后的不定芽，接种于生根培养基中，培养28-30天；再将不定芽取出并接入疏松多孔生根基质中，在无菌条件下培养，10-15天开始诱导产生不定根，50-60天长成具有完整根系的生根苗；
S4、生根苗移栽：将上述生根苗进行移栽，获得成活高山杜鹃组培苗。


2.根据权利要求1所述的一种高山杜鹃组培繁殖方法，其特征在于，所述无菌外植体为高山杜鹃的花苞或/和花蕾中的顶芽。


3.根据权利要求2所述的一种高山杜鹃组培繁殖方法，其特征在于，所述无菌外植体采用如下方法获得：
选取具有4-5厘米长花枝、膨大未绽放且内部保持完好无菌环境的花蕾，采用乙醇溶液喷洒在花蕾表面进行灭菌后，在无菌环境下利用无菌刀片逐层环剥花蕾的苞片，获得无菌花苞或/和无菌顶芽，该无菌花苞或/和无菌顶芽为无菌外植体。


4.根据权利要求1所述的一种高山杜鹃组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤S1中，将无菌外植体接种于诱导培养基中后10-14天，对未污染外植体进行切分，然后再次接入诱导培养基中，80-90天后，获得愈伤组织并形成不定芽丛。


5.根据权利要求1所述的一种高山杜鹃组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤S4中，在生根苗移栽时，将具有完整根系的生根苗移栽入由草炭和珍珠岩混合得到的、pH值为5.9-7.0的生长...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玲莉，邹世慧，汤丽红，
申请(专利权)人：重庆市风景园林科学研究院，
类型：发明
国别省市：重庆;50