孕早期进行重症子痫前期患者筛查的方法技术

本发明专利技术涉及一种孕早期进行重症子痫前期患者筛查的方法，采用孕早期孕妇血浆纤连蛋白FN和补体4b作为预测sPE的孕早期血浆标记物，并建立预测或辅助预测孕妇是否会进展至sPE患者的预测模型，能够准确预测sPE。有益效果：本方法采用基于MS的蛋白质组学方法查找sPE孕妇孕早期的血浆生物学标志物，并通过市售ELISA试剂盒验证蛋白质组学分析得到的差异表达血浆标志物，通过蛋白质组学分析及ELISA验证，基于前瞻性队列中孕妇基线特征中的差异指标及孕妇血浆生物标志物中的差异指标，构建sPE的孕早期预测模型，提高sPE的预测准确率，以指导临床早期干预，尽可能降低PE的发病率，减少妊娠不良事件。娠不良事件。娠不良事件。

【技术实现步骤摘要】
孕早期进行重症子痫前期患者筛查的方法


[0001]本专利技术属于临床医学
，尤其涉及一种孕早期进行重症子痫前 期患者筛查的方法。

技术介绍

[0002]子痫前期(preeclampsia,PE)作为是妊娠期高血压疾病 (hypertensive disorder in pregnancy，HDP)的一种最重要的亚型， 是一种主要发生于妊娠20周后的多系统功能障碍疾病，主要表现为新发 的高血压及蛋白尿，严重者可进展至具有致命危险的重度子痫前期 (severe preeclampsia，sPE)或子痫(eclampsia)，是围生期发病率及 死亡率最高的危险因素之一，严重威胁母婴健康。多项流行病学调查研究 证实存在PE病史的妇女及其子代更易发生心血管事件，推测可能与PE和 心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)存在共同关键危险因素如 内皮功能紊乱、炎症反应和糖脂代谢异常等有关。PE提供了可以鉴别心血 管事件风险增加的妇女的机会，因此对PE的早期识别及干预，意味着将 CVD的预防窗口提前至妊娠期，降低母子两代的CVD风险，意义重大。
[0003]PE是孕妇在怀孕期间出现的全身性炎症和血管疾病，是女性随后发生 心血管事件的终生危险因素，目前尚无有效的防治策略，主要基于以下两 点：一、PE作为一种“理论上”的疾病，病理及病理生理机制不明，目前 最为有效地解决方案为结束妊娠，娩出胎盘，但这种方案考虑到了母体的 健康，但势必会造成过多的早产儿，影响胎儿健康，加重家庭和社会的负 担。如何尽早识别PE，针对不同类型的PE采取不同的策略(如加强监护、 小剂量阿司匹林及适时终止妊娠)对医务工作者来说是个极大的挑战。二、 PE孕妇孕早期乃至中期大多并无临床症状，至少至孕20周后才出现以高 血压及蛋白尿等为特征的临床症状，而待症状出现后方给予干预措施(如 降压药物)虽能改善孕妇临床症状，但对孕妇及胎儿预后作用有限。研究 发现如能在妊娠早期(妊娠16周之前)给予小剂量阿司匹林干预可显著 降低高危人群PE的发病率。那么如何在妊娠早期及时准确识别PE高危孕 妇，在PE高危孕妇出现临床症状前给予重点监测，及时给予药物干预， 降低围生期孕妇及胎儿发病率及死亡率，是一项十分有意义的研究方向。 目前在PE预测方面遇到的问题一方面单一预测指标准确率低，且研究结 论不甚一致，另外一方面如预测时点距离PE发病时间间隔过短，错过最 佳干预时机，则预测实际意义不大。目前关于PE孕妇孕早期预测的研究 虽数量众多，但仍未发现有效的孕早期预测标志物和简便准确适宜临床开 展的预测模型。
[0004]考虑到基因检查的预测方案因检查手段相对有创(羊水穿刺)，且研 究发现基因的水平与蛋白质的丰度相关性并不强，尤其是低丰度蛋白相关 性更差，而PE蛋白质标志物考虑为低丰度蛋白。蛋白质作为机体功能的 最终执行者，研究蛋白质的变化对深入理解PE发病机制及预防PE均存在 重大意义。考虑到蛋白质存在翻译后修饰、蛋白质与蛋白质之间的相互作 用等复杂机制，结合PE异质性及各项研究结果，目前研究者在PE预测方 向存在一致意见，即单一预测指标不能有效预测PE，需采用多种指标联合 以提高PE预测水平。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述技术的不足，而提供一种孕早期进行重症 子痫前期患者筛查的方法，能够解决孕早期准确预测sPE的临床技术问 题，以指导临床早期干预，尽可能降低PE的发病率，减少妊娠不良事件， 进而减低女性人群CVD暴露。
[0006]本专利技术为实现上述目的，采用以下技术方案：一种孕早期进行重症子 痫前期患者筛查的方法，采用孕早期孕妇血浆纤连蛋白FN和补体4b作为 预测sPE的孕早期血浆标记物，并建立预测或辅助预测孕妇是否会进展至 sPE患者的预测模型，能够准确预测sPE，具体步骤如下：
[0007]步骤一、标准孕妇的信息收集和整理：在社区医院招募单胎孕妇孕早 期入组，随访至妊娠结束后45天以HDP为主要切入点的队列研究，对入 组孕妇收集其基线特征，并进行相应的体格检查及血液标本的采集，同时 与妇幼信息系统及生产医院病历系统联网，记录孕妇产检及分娩时体重、 血压及诊断状态，确定其妊娠结局；
[0008]步骤二、在确定孕妇妊娠结局基础上，将最终进展为sPE的孕妇孕早 期血浆样本与年龄、入组孕周相匹配的正常分娩健康孕妇的孕早期血浆样 本进行蛋白质组学分析；
[0009]步骤三、蛋白质组学分析：采用液相色谱分离串联质谱的分析方法和 数据非依赖性获取的数据采集模式分析sPE孕妇和健康孕妇孕早期血浆, 使用Maxquant软件和Spectronaut软件分析质谱数据，生物信息分析以两 组蛋白表达量差异倍数变化≥1.2倍且Q值＜0.05的标准作为筛选差异表 达蛋白的依据，使用Blast2 GO软件、CytoScape软件和KASS、STRING 网站进行生物信息分析，并采用基因加权共表达网络分析(weighted gene co
‑
expression network analysia，WGCNA从鉴定出的总蛋白中筛选出生物 标记物；
[0010]步骤四、通过上述的生物信息分析方法和WGCNA方法得到重叠蛋白 中的分泌性蛋白作为sPE的血浆生物学标志物，最终确定血浆纤连蛋白及 补体4b作为sPE孕早期血浆标记物；
[0011]步骤五、建立预测模型：
[0012]1)随机选取sPE孕妇信息及其孕早期的血浆样本及正常分娩的孕妇信 息和其孕早期的血浆样本，分别对上述血浆样本进行酶联免疫吸附试验检 测；
[0013]2)采用FN ELISA试剂盒和C4b ELISA试剂盒进行实验；
[0014]3)采用Curve Expert软件制作标准曲线，并根据样本OD值，得到血 浆FN和C4b的水平结果；
[0015]4)通过SPSS统计软件对孕妇入组时的基线特征及血浆中两组存在差 异的指标，并以sPE作为结局变量，进行单因素Logistic回归分析，对存 在统计学差异的变量指标经二分类Logistic回归模型，计算入组孕妇进展 至sPE的预测概率；
[0016]5)绘制受试者工作状态(Received Operation Characteristic，ROC)曲 线，并计算ROC曲线下面积，以孕妇入组时基线特征BMI和SBP、DBP 三项指标作为基础的指标，最终纳入sPE预测模型的四项指标分别为孕妇 孕早期BMI、SBP及血浆FN、C4b；
[0017]6)得到预测孕妇进展至sPE的风险的公式：
[0018]Logit(P)＝
‑
15.703+0.130
×
BMI+0.074
×
SBP+0.007
×
FN+0.003
×
C4b；
[0019]其中：BMI、SBP为孕妇孕早期基线特征，
[0020]FN为血浆纤连蛋白，
[0021]C4b为补体，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种孕早期进行重症子痫前期患者筛查的方法，采用孕早期孕妇血浆纤连蛋白FN和补体4b作为预测sPE的孕早期血浆标记物，并建立预测或辅助预测孕妇是否会进展至sPE患者的预测模型，能够准确预测sPE，具体步骤如下：步骤一、标准孕妇的信息收集和整理：在社区医院招募单胎孕妇孕早期入组，随访至妊娠结束后45天以HDP为主要切入点的队列研究，对入组孕妇收集其基线特征，并进行相应的体格检查及血液标本的采集，同时与妇幼信息系统及生产医院病历系统联网，记录孕妇产检及分娩时体重、血压及诊断状态，确定其妊娠结局；步骤二、在确定孕妇妊娠结局基础上，将最终进展为sPE的孕妇孕早期血浆样本与年龄、入组孕周相匹配的正常分娩健康孕妇的孕早期血浆样本进行蛋白质组学分析；步骤三、蛋白质组学分析：采用液相色谱分离串联质谱的分析方法和数据非依赖性获取的数据采集模式分析sPE孕妇和健康孕妇孕早期血浆,使用Maxquant软件和Spectronaut软件分析质谱数据，生物信息分析方法以两组蛋白表达量差异倍数变化≥1.2倍且Q值＜0.05的标准作为筛选差异表达蛋白的依据，使用Blast2 GO软件、CytoScape软件和KASS、STRING网站进行生物信息分析，并采用基因加权共表达网络分析(weighted gene co
‑
expression network analysia，WGCNA从鉴定出的总蛋白中筛选出生物标记物；步骤四、通过上述的生物信息分析方法和WGCNA方法得到重叠蛋白中的分泌性蛋白作为sPE的血浆生物学标志物，最终确定血浆纤连蛋白及补体4b作为sPE孕早期血浆标记物；步骤五、建立预测模型：1)随机选取sPE孕妇信息及其孕早期的血浆样本及正常分娩的孕妇信息和其孕早期的血浆样本，分别对上述血浆样本进行酶联免疫吸附试验检测；2)采用FN ELISA试剂盒和C4b ELISA试剂盒进行实验；3)采用Curve Expert软件制作标准曲线，并根据样本OD值，得到血浆FN和C4b的水平结果；4)通过SPSS统计软件对孕妇入组...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宁，邹晓译，李玉明，陈少伯，张芯，蔡伟，
申请(专利权)人：泰达国际心血管病医院，
类型：发明
国别省市：