一种培育不结球白菜小孢子植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种培育不结球白菜小孢子植株的方法。该方法包括如下步骤：(1)取样及花蕾挑选；(2)小孢子培育：用次氯酸钠对花蕾消毒，灭菌水清洗2遍，1/2NLN

【技术实现步骤摘要】
一种培育不结球白菜小孢子植株的方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种培育不结球白菜小孢子植株的方法。

技术介绍

[0002]不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensisMakino)常被称为小白菜，为十字花科(Cruciferae)芸薹属(Brassica)，其口感好、食用价值高、生长周期短、适应性强，在我国各地均有种植，是我国重要的蔬菜作物之一。不结球白菜为常异花授粉作物，通过优良亲本杂交获得杂种优势的品系是常见的育种方法之一，因此如何获得稳定的纯合亲本对于不结球白菜种质创新工作意义重大。
[0003]游离小孢子培养技术(Isolated Microspore Culture，IMC)是指通过机械挤压花蕾的方式，分离小孢子，利用细胞全能性，培养成单个植株的过程。游离小孢子培养技术从培养到双单倍体(Doubled Haploid，DH)植株的获得仅需1～2年，大幅提升育种工作的效率。
[0004]1982年，德国科学家Lichter从甘蓝型油菜的花蕾中分离出小孢子，通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种培育不结球白菜小孢子植株的方法，其特征在于具体包括如下步骤(1)取样：在不结球白菜的盛花期，摘取不结球白菜花序，加入少量的无菌水保持花蕾湿润，放入4℃冰箱进行低温预处理24h；(2)挑蕾：用镊子挑选不结球白菜的花蕾，从步骤(1)预处理后的花序中挑选饱满、无病虫害且长度在2～3mm之间的花蕾，放置于离心管中；(3)花蕾消毒：向离心管中加入质量浓度为1％的NaClO溶液，震荡，弃去NaClO溶液，加入无菌水清洗，弃去无菌水，用1/2NLN
‑
13培养基润洗；(4)小孢子分离及纯化：取步骤(3)消毒后的花蕾加入1/2NLN
‑
13培养基，研磨，过滤，离心，弃上清液，下层产物待用；(5)小孢子稀释及分装：将步骤(4)所得下层产物用NLN
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13培养基稀释，使混合液中小孢子浓度为1
×
105～2
×
105个/mL，优选的，使混合液中小孢子浓度为1
×
105；向混合液中加入活性炭溶液，使混合液中活性炭终浓度为1mg/mL；优选的，还包括向混合液中加入褪黑素溶液，使混合液中褪黑素终浓度为0.05～0.1mg/L，得到小孢子混合液，将小孢子混合液分装至培养皿中，密封；(6)培养：将培养皿放入生化培养箱中，避光，32～33℃热激24～32h，再移入人工气候箱，25℃暗培养10～15天，当培养皿中出现白色小点时，放进摇床，以25℃、60r/min、8h/d光强为800～1200cd光照条件震荡培养7天，待胚状体转绿，转移到改良1/2MS固体培养基中培育45～60d，待再生植株长出健壮根系，开始炼苗并移栽到基质中。2.根据权利要求1所述的培育不结球白菜小孢子植株的方法，其特征在于步骤(1)中选取花蕾的时间为天气晴朗的早上10点。3.根据权利要求1所述的培育不结球白菜小孢子植株的方法，其特征在于步骤(3)中所述质量浓度为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李英，蒋林钫，侯喜林，王建军，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：