一种高纯度金线莲多糖的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种高纯度金线莲多糖的制备方法：取金线莲全植株预处理得预处理粉末；热水浸提法提取预处理粉末，提取液浓缩后用80％乙醇醇沉，静置离心，用无水乙醇和丙酮洗涤沉淀，挥干溶剂后复溶于水，溶液经透析、浓缩、冷冻干燥后得金线莲多糖。金线莲多糖复溶于水，用40％乙醇醇沉，静置离心：沉淀复溶于水后透析，透析液经浓缩、冷冻干燥得金线莲多糖分级组分I；上清液用70％乙醇醇沉，静置离心后将沉淀复溶于水，加入弱阴离子交换树脂搅拌脱色，离心收集上清液并透析，透析液经浓缩、冷冻干燥得金线莲多糖分级组分II。本发明专利技术金线莲多糖的制备工艺简单，能同时获得多个纯度高的金线莲多糖组分，所得不同分级金线莲多糖总糖含量均在95％以上。量均在95％以上。量均在95％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度金线莲多糖的制备方法


[0001]本专利技术属于天然产物多糖制备
，具体涉及一种高纯度金线莲多糖的制备方法。

技术介绍

[0002]金线兰俗称金线莲，为兰科开唇兰属多年生草本陆生兰，是我国传统名贵珍稀中草药，民间素有“鸟人参”、“金草”、“南方的冬虫夏草”等美誉。金线莲色泽口感俱佳，民间常将其泡茶饮用。福建龙岩地区居民煲汤时常佐以金线莲，长江以南百姓常用金线莲煲汤给新生儿喂食。多糖是金线莲的主要活性成分之一，具有护肝、降血糖和保护血管等作用。然而，由于金线莲自然繁殖率低，对生态环境要求严格，生长缓慢，加上鸟类嗜食，特别是近年来对该植物需求量激增，产区人们过度采摘，使得金线莲野生资源日渐枯竭。因此，加快金线莲的开发与研究，对于丰富中华食谱，提高民众健康素养，建设健康中国具有十分重要的作用。
[0003]目前，金线莲多糖的制备一般是采用热水浸提法提取，然后经过浓缩、醇沉等步骤得到金线莲粗多糖，粗多糖再经柱层析等工艺得到纯多糖。如曾碧玉等采用热水浸提法得到金线莲多糖提取液，但并未对提取液进行进一步处理(专利申请公开号CN 105085696 A)。吴岩斌等采用水提醇沉法得到金线莲粗多糖，然后用阳离子交换树脂柱层析处理得到金线莲多糖提取物(授权公告号CN 107412254 B)。韩金光水提醇沉得到金线莲粗多糖后，依次采用季铵盐沉淀法、醇沉法、盐洗法和大孔树脂柱层析法进行纯化，得到金线莲多糖(专利公开号CN 101580554 A)。这些制备金线莲多糖的方法耗时费力，不适宜进行大规模的应用和金线莲多糖相关产品的开发与应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种金线莲多糖的提取纯化方法，该方法操作简便、高效快速，有效保存了金线莲多糖的生物活性，极大地提高了金线莲多糖的纯度。另外，本方法工艺过程绿色环保，能够保证食品的安全性。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种高纯度金线莲多糖的制备方法，包括：
[0007]1)取新鲜金线莲全植株洗净、烘干，机械粉碎后过筛备用，将粉碎后的金线莲用15
‑
25倍体积95％乙醇浸泡8
‑
10h，重复浸泡3
‑
4次进行脱脂，离心后挥干乙醇，收集残渣得到预处理粉末；
[0008]2)向预处理粉末中加入15
‑
25倍体积蒸馏水，80
‑
85℃水提2
‑
3h，水提液离心，取离心后上清液，重复水提、离心4
‑
5次，合并上清液，将所得上清液真空浓缩；
[0009]3)向浓缩液中缓慢加入无水乙醇并搅拌，当乙醇浓度达到80％停止加入，4℃静置10
‑
20h，离心收集沉淀，沉淀依次用无水乙醇和丙酮各洗涤2
‑
3次，再次离心得到沉淀挥干溶剂；
[0010]4)将挥干后的沉淀按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水，所得溶液置于透析袋中，透析袋放入蒸馏水中透析72h，透析液浓缩、冷冻干燥后得到金线莲多糖；
[0011]5)将步骤4)制得的金线莲多糖按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水得到金线莲多糖水溶液，向溶液中缓慢加入无水乙醇并搅拌，当乙醇浓度达到40％停止加入，4℃静置10
‑
20h，离心分别收集沉淀与上清液；
[0012]6)将步骤5)得到的沉淀按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水，所得溶液置于透析袋中，透析袋放入蒸馏水中透析72h，透析液浓缩、冷冻干燥后得到金线莲多糖分级组分，记为I；
[0013]7)向步骤5)得到的上清液中继续缓慢加入无水乙醇并搅拌，当乙醇浓度达到70％停止加入，4℃静置10
‑
20h，离心收集沉淀，将沉淀按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水，得到的水溶液按体积质量比(mL/g)1：1
‑
1：2加入交换树脂进行搅拌脱色2h，高速离心获得上清液，上清液重复脱色2
‑
3次，最后将上清液置于透析袋中，透析袋放入蒸馏水中透析72h，透析液浓缩、冷冻干燥后得到另一个金线莲多糖分级组分，记为II。
[0014]进一步地，步骤1)所述过筛目数为60
‑
80。
[0015]进一步地，步骤1)至步骤7)中所述离心均为3000
‑
5000rpm转速下离心5
‑
10min。
[0016]进一步地，步骤2)所述真空浓缩为在真空度
‑
0.1MPa条件下将上清液浓缩至原有体积的1/10。
[0017]进一步地，步骤4)、步骤6)和步骤7)中所述透析袋其相对截留分子量为3500Da。
[0018]进一步地，步骤7)所述交换树脂为大孔弱碱苯乙烯系阴离子交换树脂，基体为苯乙烯
‑
二乙烯苯共聚物。
[0019]进一步地，步骤7)所述高速离心为8000
‑
10000rpm转速下离心5
‑
10min。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0021]本专利技术以新鲜金线莲全植株为原料，通过热水提取、乙醇分级沉淀及离子交换树脂脱色技术获得两个级分的高纯度金线莲分级多糖组分，其主要优点是：1、多糖制备步骤简单，所得多糖纯度高，所得多糖的总糖含量达到95％以上；2、制备工艺绿色环保，可为天然产物中高纯度多糖提供参考，应用前景广阔。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例1中金线莲多糖及其分级多糖组分的凝胶渗透色谱图。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法，所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
[0024]实施例1
[0025](1)取新鲜金线莲全植物用蒸馏水洗净，55℃烘干，粉碎过筛(80目)备用。
[0026](2)取50g金线莲粉末用20倍95％乙醇浸泡10h，重复处理4次，离心(5000rpm，10min)收集残渣，挥干乙醇，获得预处理粉末。
[0027](3)向预处理粉末中加入20倍体积蒸馏水，在80℃温度下进行提取，提取时间为
3h，提取次数为4次，水提液离心(5000rpm，10min)获得上清液。
[0028](4)将所得上清液合并后，真空浓缩(真空度
‑
0.1MPa)至原有体积的1/10。
[0029](5)向浓缩液中缓缓加入无水乙醇并搅拌，至乙醇浓度达到80％，4℃静置20h。
[0030](6)将所得溶液离心(5000rpm，10min)收集沉淀，依次用无水乙醇和丙酮各洗涤3次，再通过离心(5000rpm，10min)收集沉淀本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度金线莲多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取新鲜金线莲全植株洗净、烘干，机械粉碎后过筛备用，将粉碎后的金线莲用15
‑
25倍体积95％乙醇浸泡8
‑
10h，重复浸泡3
‑
4次进行脱脂，离心后挥干乙醇，收集残渣得到预处理粉末；2)向预处理粉末中加入15
‑
25倍体积蒸馏水，80
‑
85℃水提2
‑
3h，水提液离心，取离心后上清液，重复水提、离心4
‑
5次，合并上清液，将所得上清液真空浓缩；3)向浓缩液中缓慢加入无水乙醇并搅拌，当乙醇浓度达到80％停止加入，4℃静置10
‑
20h，离心收集沉淀，沉淀依次用无水乙醇和丙酮各洗涤2
‑
3次，再次离心得到沉淀挥干溶剂；4)将挥干后的沉淀按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水，所得溶液置于透析袋中，透析袋放入蒸馏水中透析72h，透析液浓缩、冷冻干燥后得到金线莲多糖；5)将步骤4)制得的金线莲多糖按质量体积比(g/mL)1：50
‑
1：100复溶于水得到金线莲多糖水溶液，向溶液中缓慢加入无水乙醇并搅拌，当乙醇浓度达到40％停止加入，4℃静置10
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20h，离心分别收集沉淀与上清液；6)将步骤5)得到的沉淀按质量体积比(g/mL)1：50
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1：100复溶于水，所得溶液置于透析袋中，透析袋放入蒸馏水中透析72h，透析液浓缩、冷冻干燥后得到金线莲多糖分级组分，记为I；7)向步骤5)得到的上清液中继续缓慢加...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯蕾，张政，万益群，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：