一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程技术

本发明专利技术公开了一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程，检测方法使用到的原料和器材包括：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2‑硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管；该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法包括如下步骤：S1：将水产品组织样品、盐酸溶液和2‑硝基苯甲醛混合，在水浴条件下进行衍生化，得到衍生液。本发明专利技术提供的检测方法只需要对水产品组织样品进行一次前处理，即可实现水产品中硝基呋喃代谢物、氯霉素这两类药物的同步提取和检测，且处理时间短、效率高、成本低、操作简便，检出限低。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程
本专利技术涉及检测方法优化
，具体为一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程。
技术介绍
硝基呋喃类抗生素主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因，是一类广谱抗生素，被广泛用作饲料添加剂，近年来成为全球水产品安全监测中的必检测项目，有关研究表明，硝基呋喃类药物是一种诱导有机体基因突变的有害物质，检测硝基呋喃类化合物的代谢产物对监控禁药，特别是对水产养殖中的禁药监控更具有实际意义。氯霉素是一种广谱、廉价、高效的抗生素，曾广泛应用于水产动物疾病的防治，该药理化性质极为稳定，可通过食物链在人体内蓄积，从而对人体健康造成严重损害，目前，对于水产品中的硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的检测工作主要是参照GB/T21311-2007和农业部1025号公告-26-2008进行，然而现有检测方法都不能同步提取、检测多种类的药物残留量，且存在前处理时间长、操作步骤繁琐、检测成本高等缺点。针对现有问题，急需在原有检测方法的基础上进行创新。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程，以解决上述
技术介绍
中提出的现有检测方法都不能同步提取、检测多种类的药物残留量，且存在前处理时间长、操作步骤繁琐、检测成本高等缺点。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程，该检测方法使用到的原料和器材包括：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管；该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法包括如下步骤：S1：将水产品组织样品、盐酸溶液和2-硝基苯甲醛混合，在水浴条件下进行衍生化，得到衍生液；S2：将所述衍生液、磷酸二氢钾、氢氧化钾和乙酸乙酯进行混合，进行提取，得到提取液；S3：采用正己烷对所述提取液进行净化，将所得净化液进行浓缩，得到浓缩液；S4：对所述浓缩液中硝基呋喃代谢物和氯霉素的残留量进行检测；S5：将所述浓缩液用1ml纯净水溶解，得到待测液，将所述待测液经0.22μm滤膜过滤后，采用液相色谱-串联质谱仪进行检测；优选的，所述硝基呋喃代谢物包括呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物。优选的，所有试剂均为分析纯水，且为GB/T6682规定的一级水。优选的，所述硝基呋喃类药物代谢物衍生物的色谱条件包括：色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。优选的，所述氯霉素的液相色谱条件包括：色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。优选的，所述甲酸水溶液为现用现配，且配制方法优选为将1ml色谱纯甲酸溶于水中，定容至1000ml。优选的，所述乙腈为色谱纯乙腈，且甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷均为高效液相色谱级。优选的，所述盐酸溶液的浓度为0.2Mol/L，且邻硝基苯甲醛的溶液的浓度为100mMol/L，并且磷酸二氢钾溶液的浓度为0.1Mol/L，而且衍生化的温度为60℃，同时时间为0.5h。一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的检测操作流程包括如下步骤：第一步，试样制备：虾去壳取虾肉，用组织粉碎机匀质，装入洁净容器内，密封，标记，并在-18℃保存，每份样品量不少于100g；第二步，提取步骤：称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL0.2Mol/L盐酸溶液在匀浆机上以16000r/min速度匀浆15秒，用5mL0.2Mol/L盐酸溶液洗涤匀浆刀，合并提取液；第三步，样品恒温孵育：离心管中加入400μL100mMol/L新配制的2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂振荡1分钟，放在60℃恒温水浴锅中反应0.5小时，孵育过程要注意避光操作；第四步，样品提取：离心管在4500r/min下离心10min，上清液转入另一离心管中，残渣弃去，上清液中加入5mL0.1Mol/LKH2PO4溶液，用1Mol/LKOH溶液调节pH值在7～7.5范围。离心管中加入10mL乙酸乙酯，在振荡器上震荡5分钟，以4500r/min速度离心10min；第五步，净化方法：吸取5mL上层清液（相当于1g样品）移至吹氮浓缩仪的吹氮管中，在50℃下用氮气将试管内的溶剂挥干，残渣用1mL纯净水溶解，漩涡振荡器上混漩60秒，加入3mL正己烷，漩涡振荡器上混漩60秒，在4500r/min下离心10min后，样液经0.22μm滤膜过滤后上机测定。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程；1、该检测方法前处理时间短，最快的检测周期由传统质谱检测方法的19小时缩短至3.5小时，且操作较为的简单。2、该检测方法的检测成本较低，将两种检测项目方法合并，降低人力试剂等成本，能够实现同时对水产品中的硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的进行检测。附图说明图1为本专利技术的硝基呋喃类药物代谢物衍生物流动相梯度表图；图2为本专利技术的硝基呋喃类药物代谢物衍生物的质谱参数图；图3为本专利技术的氯霉素的流动相梯度表图；图4为本专利技术的氯霉素的质谱参数图；图5为本专利技术的检测操作流程图；图6为本专利技术的呋喃唑酮代谢物(AOZ)的检测色谱图；图7为本专利技术的呋喃西林代谢物(SEM)的检测色谱图；图8为本专利技术的呋喃妥因代谢物(AHD)的检测色谱图；图9为本专利技术的呋喃它酮代谢物(AMOZ)的检测色谱图；图10为本专利技术的氯霉素(CAP)检测色谱图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-10，本专利技术提供一种技术方案：一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法与流程，所需原料和器材为：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管。实施例1S1.虾去壳取虾肉，用组织粉碎机匀质，装入洁净容器内，密封，标记，并在-18℃保存，每份样品量不少于100g；S2.称取经肉类组织粉碎机粉碎的试样2g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL0.2Mol/L盐酸溶液在匀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：该检测方法使用到的原料和器材包括：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管；/n该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法包括如下步骤：/nS1：将水产品组织样品、盐酸溶液和2-硝基苯甲醛混合，在水浴条件下进行衍生化，得到衍生液；/nS2：将所述衍生液、磷酸二氢钾、氢氧化钾和乙酸乙酯进行混合，进行提取，得到提取液；/nS3：采用正己烷对所述提取液进行净化，将所得净化液进行浓缩，得到浓缩液；/nS4：对所述浓缩液中硝基呋喃代谢物和氯霉素的残留量进行检测；/nS5：将所述浓缩液用1ml纯净水溶解，得到待测液，将所述待测液经0.22μm滤膜过滤后，采用液相色谱-串联质谱仪进行检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：该检测方法使用到的原料和器材包括：组织粉碎机、容器、离心管、盐酸溶液、匀浆机、2-硝基苯甲醛（NBA）衍生试剂、恒温水浴锅、KH2PO4溶液、KOH溶液、乙酸乙酯、振荡器、吹氮浓缩仪和吹氮管；
该同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法包括如下步骤：
S1：将水产品组织样品、盐酸溶液和2-硝基苯甲醛混合，在水浴条件下进行衍生化，得到衍生液；
S2：将所述衍生液、磷酸二氢钾、氢氧化钾和乙酸乙酯进行混合，进行提取，得到提取液；
S3：采用正己烷对所述提取液进行净化，将所得净化液进行浓缩，得到浓缩液；
S4：对所述浓缩液中硝基呋喃代谢物和氯霉素的残留量进行检测；
S5：将所述浓缩液用1ml纯净水溶解，得到待测液，将所述待测液经0.22μm滤膜过滤后，采用液相色谱-串联质谱仪进行检测。


2.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃代谢物包括呋喃它酮代谢物、呋喃唑酮代谢物、呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物。


3.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所有试剂均为分析纯水，且为GB/T6682规定的一级水。


4.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述硝基呋喃类药物代谢物衍生物的色谱条件包括：
色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；
流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。


5.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：所述氯霉素的液相色谱条件包括：
色谱柱：菲罗门C18，150mm×2.0mm（id），粒度5µm，luna；
流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液。


6.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中硝基呋喃代谢物和氯霉素残留量的方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：周道志，劳波，
申请(专利权)人：湛江国联水产开发股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44