一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，包括供试样品的制备；包括对照品溶液、供试品溶液、全方溶液以及阴性溶液；芍药甘草汤指标成分含量测定；包括专属性试验、标准曲线绘制；冻干粉含量测定；取X批冻干粉样品，制作供试品溶液，按照色谱条件进样测定，计算芍药苷、甘草苷和甘草酸的含量，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，检测波长为237nm进行梯度洗脱；记录色谱图，统计特征峰的保留时间及相对保留时间；参考指标选择相对保留时间及相对标准偏差，选取参照峰进行归一化值处理，对X批冻干粉样品运用SPSS 22.0软件进行聚类分析，以平方Euclidean距离为指标，组间联接法聚类。

【技术实现步骤摘要】
一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法
本专利技术涉及一种芍药甘草汤，具体为一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法。
技术介绍
芍药甘草汤始载于东汉医家张仲景所著《伤寒论》，由芍药、甘草两味药组成，临床应用历史悠久，安全性高，疗效确切。该方配伍精简，具有和营散逆，舒挛止痛的功效。经典名方对药材来源、饮片炮制、配伍比例、制备工艺等进行了严格要求。由于经典名方配方多样，且成分复杂，建立经典名方的质量标准，将经典名方中有效成分量化，更有利保证传统古方的质量及疗效。为此，提出一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，芍药甘草汤特征图谱的建立方法包括以下步骤：步骤一：供试样品的制备；步骤二：芍药甘草汤指标成分含量测定；步骤三：冻干粉含量测定；步骤四：芍药甘草汤特征图谱的建立。优选的，步骤一中的供试样品包括对照品溶液、供试品溶液、全方溶液以及阴性溶液；具体的，所述对照品溶液包括芍药苷对照品溶液、甘草苷对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液，芍药苷对照品溶液的制备方法为：取芍药苷对照品Mmg，取甲醇3Mml，将芍药苷对照品与甲醇充分混合，即得芍药苷对照品溶液；甘草苷对照品溶液的制备方法为：取甘草苷对照品nμg，取70％乙醇20nml，将甘草苷对照品与70％乙醇充分混合，即得甘草苷对照品溶液；>甘草酸对照品溶液的制备方法为：取甘草酸铵对照品pμg，取70％乙醇200pml，将甘草酸铵对照品与70％乙醇充分混合，即得甘草酸对照品溶液；所述供试品溶液的制备方法包括以下步骤：步骤S1：取芍药甘草汤冻干粉0.2-0.4g；步骤S2：将芍药甘草汤冻干粉置于塞锥形瓶中，加入70％甲醇25-30ml，密封锥形瓶，称定重量；步骤S3：将锥形瓶加热回流1-1.5h，放冷，再次称定重量；步骤S4：用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。优选的，所述全方溶液的制备方法包括以下步骤：步骤P1：取芍药55.00-60.00g，炒甘草55.00-60.00g，置1.8L-2L的砂锅中；步骤P2：向砂锅加入去离子水600-800ml，盖上盖子，浸泡30-40分钟；步骤P3：用电陶炉作为热源，先武火(1800w)加热至沸，后文火(600w)保持微沸煎至300-350ml，趁热滤过；步骤P4：滤液减压浓缩至50-55ml，预冻至结冰，冷冻干燥，研细，装袋，即得全方溶液。优选的，所述阴性溶液的制备方法为：分别取缺少芍药或甘草的芍药甘草汤冻干粉0.2-0.4g；将缺少芍药或甘草的芍药甘草汤冻干粉置于塞锥形瓶中，加入70％甲醇25-30ml，密封锥形瓶，称定重量；将锥形瓶加热回流1-1.5h，放冷，再次称定重量；用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得阴性溶液。优选的，步骤二中的芍药甘草汤指标成分含量测定包括专属性试验、标准曲线绘制；具体的，所述专属性试验为：取供试品溶液和缺少芍药的阴性溶液以及缺少甘草的阴性溶液按照色谱条件进样，记录色谱图；所述标准曲线绘制的曲线包括芍药苷标准曲线、甘草苷标准曲线、甘草酸标准曲线，具体的芍药苷标准曲线的绘制过程包括以下：取芍药苷对照品，称定后加甲醇制成每1ml含580μg的芍药苷试验品溶液，分别吸取芍药苷对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、3.0ml置5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；将芍药苷试验品溶液连同芍药苷对照品溶液一同按照色谱条件进样测定，记录峰面积；以芍药苷的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线；甘草苷标准曲线的绘制过程包括以下：取甘草苷对照品，称定后加70％乙醇制成每1ml含303.5μg的甘草苷试验品溶液，分别吸取甘草苷对照品溶液0.3ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、3.0ml置5ml量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀；将甘草苷试验品溶液连同甘草苷对照品溶液一同按照色谱条件进样测定，记录峰面积；以甘草苷的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线；甘草酸标准曲线的绘制过程包括以下：取甘草酸铵对照品，称定后加70％乙醇制成每1ml含771.5μg的甘草酸试验品溶液，分别吸取甘草酸铵对照品溶液0.4ml、0.6ml、1.0ml、1.5ml、3.0ml置5ml量瓶中，用70％乙醇稀释至刻度，摇匀；将甘草酸试验品溶液连同甘草酸铵对照品溶液一同按照色谱条件进样测定，记录峰面积；以甘草酸的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。优选的，冻干粉含量测定具体表现为：取X批冻干粉样品，制作供试品溶液，按照色谱条件进样测定，计算芍药苷、甘草苷和甘草酸的含量。优选的，所述色谱条件具体为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，检测波长为237nm进行梯度洗脱。考察不同溶剂及其体积体积分数(甲醇、70％甲醇、70％乙醇、50％甲醇、50％乙醇)对供试样品的制备的影响，通过对色谱峰峰形及分离度等综合因素的考虑，选用70％甲醇。特征图谱色谱条件考察了不同色谱柱(InertsilODS-SP(4.6×250mm，5μm)、COSMOSIL-5C18-MS-Ⅱ(4.6×250mm，5μm)、Kromasil100-5-C18(4.6×250mm，5μm))、柱温(柱温25℃、30℃和35℃)、流动相(0.1％磷酸水-乙腈，0.05％磷酸水-乙腈，0.01％磷酸水-乙腈)等因素。查阅中国药典2020年版各药材和制剂，芍药苷的检测波长为230nm，甘草苷和甘草酸的检测波长为237nm，比较接近，故选择237nm最为检测波长。结果显示最优的色谱条件为：Kromasil100-5-C18(4.6×250mm)色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸水溶液，进行梯度洗脱；以237nm为检测波长，柱温为30℃。优选的，芍药甘草汤特征图谱的建立的包括以下：取X批冻干粉样品，制作供试品溶液，按照色谱条件进样测定，记录色谱图，统计特征峰的保留时间及相对保留时间；参考指标选择相对保留时间及相对标准偏差，选取参照峰进行归一化值处理，对X批冻干粉样品运用SPSS22.0软件进行聚类分析，以平方Euclidean距离为指标，组间联接法聚类。优选的，还包括精密度试验、重复性试验以及稳定性试验，具体的精密度试验为：取3种对照品溶液，按色谱条件分别连续进样6次测定峰面积，RSD均小于2％，表明仪器具有良好的精密度；重复性试验：取样品6份，按供试品溶液制备方法平行制备6份供试品溶液，按色谱条件进样测定，计算3种指标成分的RSD，均小于2％，表明本含量测定方法的重复性良本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于，芍药甘草汤特征图谱的建立方法包括以下步骤：/n步骤一：供试样品的制备；/n步骤二：芍药甘草汤指标成分含量测定；/n步骤三：冻干粉含量测定；/n步骤四：芍药甘草汤特征图谱的建立。/n

【技术特征摘要】
1.一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于，芍药甘草汤特征图谱的建立方法包括以下步骤：
步骤一：供试样品的制备；
步骤二：芍药甘草汤指标成分含量测定；
步骤三：冻干粉含量测定；
步骤四：芍药甘草汤特征图谱的建立。


2.根据权利要求1所述的一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于：步骤一中的供试样品包括对照品溶液、供试品溶液、全方溶液以及阴性溶液；
具体的，所述对照品溶液包括芍药苷对照品溶液、甘草苷对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液，芍药苷对照品溶液的制备方法为：
取芍药苷对照品Mmg，取甲醇3Mml，将芍药苷对照品与甲醇充分混合，即得芍药苷对照品溶液；
甘草苷对照品溶液的制备方法为：
取甘草苷对照品nμg，取70％乙醇20nml，将甘草苷对照品与70％乙醇充分混合，即得甘草苷对照品溶液；
甘草酸铵对照品溶液的制备方法为：
取甘草酸铵对照品pμg，取70％乙醇200pml，将甘草酸铵对照品与70％乙醇充分混合，即得甘草酸铵对照品溶液；
所述供试品溶液的制备方法包括以下步骤：
步骤S1：取芍药甘草汤冻干粉0.2-0.4g；
步骤S2：将芍药甘草汤冻干粉置于塞锥形瓶中，加入70％甲醇25-30ml，密封锥形瓶，称定重量；
步骤S3：将锥形瓶加热回流1-1.5h，放冷，再次称定重量；
步骤S4：用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。


3.根据权利要求2所述的一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于：所述全方溶液的制备方法包括以下步骤：
步骤P1：取芍药55.00-60.00g，炒甘草55.00-60.00g，置1.8L-2L的砂锅中；
步骤P2：向砂锅加入去离子水600-800ml，盖上盖子，浸泡30-40分钟；
步骤P3：用电陶炉作为热源，先武火(1800w)加热至沸，后文火(600w)保持微沸煎至300-350ml，趁热滤过；
步骤P4：滤液减压浓缩至50-55ml，预冻至结冰，冷冻干燥，研细，装袋，即得全方溶液。


4.根据权利要求2所述的一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于：所述阴性溶液的制备方法为：
分别取缺少芍药或甘草的芍药甘草汤冻干粉0.2-0.4g；将缺少芍药或甘草的芍药甘草汤冻干粉置于塞锥形瓶中，加入70％甲醇25-30ml，密封锥形瓶，称定重量；将锥形瓶加热回流1-1.5h，放冷，再次称定重量；用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得阴性溶液。


5.根据权利要求1所述的一种芍药甘草汤特征图谱的建立方法，其特征在于：步骤二中...

【专利技术属性】
技术研发人员：李翔宇，王翔，葛德助，陈庆，杨黎，郭婷，
申请(专利权)人：安徽济人药业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34