一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法，涉及糖化血红蛋白检测技术领域，为解决现有技术中的现有的糖化血红蛋白检测方法虽然可以在饱腹状态下实现高效的检测效果，但其检测出的数据仍然会与空腹状态下的检测数值存在一定的差异的问题。所述糖化血红蛋白检测试剂包括：A

【技术实现步骤摘要】
一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法
本专利技术涉及糖化血红蛋白检测
，具体为一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法。
技术介绍
血红蛋白分子是一个工作效率极高的分子机器，它通过运动和小的结构改变来调节它的行为。氧气和血红蛋白四个位点的结合并不是同步的。第一个氧气和血红蛋白结合，使相应的蛋白链发生微小的变化，这些变化使它们与氧结合更容易。所以，虽然结合第一个氧是困难的，但是结合第二个，第三个，第四个变得越来越容易。这为血红蛋白行使功能提供了便利。当血液流经氧气充足的肺时，氧气很容易和第一个亚单位结合，然后很快的充满其他部分。然后当血液在体内循环时，氧气浓度下降，二氧化碳浓度升高，在这种情况下，血红蛋白释放氧气，一旦一个氧气脱离，血红蛋白就改变形状，这使得其他三个氧很快被释放。以这种方式血红蛋白再肺部装载最大量的氧，然后运到需氧的组织，而糖化血红蛋白(GHb)是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类相结合的产物。它是通过缓慢、持续及不可逆的糖化反应形成，其含量的多少取决于血糖浓度以及血糖与血红蛋白接触时间，而与抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。因此，GHb可有效地反映糖尿病患者过去8～12周平均血糖水平。GHb由HbA1a、HbA1b、HbA1c组成,其中HbA1c约占70％,且结构稳定,因此被用作糖尿病控制的监测指标。但是，现有的糖化血红蛋白检测方法虽然可以在饱腹状态下实现高效的检测效果，但其检测出的数据仍然会与空腹状态下的检测数值存在一定的差异；因此，不满足现有的需求，对此我们提出了一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种糖化血红蛋白检测试剂及其检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的现有的糖化血红蛋白检测方法虽然可以在饱腹状态下实现高效的检测效果，但其检测出的数据仍然会与空腹状态下的检测数值存在一定的差异的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种糖化血红蛋白检测试剂，所述糖化血红蛋白检测试剂包括：A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂；A1衍化试剂包括：0.002mol/L8-羟基奎林水溶液,0.2～0.3ml/L果糖基肽氧化酶，50ml/L蒸馏水；A2抑制试剂包括：0.05～0.015mg/Lα-葡萄糖苷酶抑制剂，0.1～0.2mg/L二肽基肽酶-4抑制剂，50ml/L蒸馏水；B1显化试剂包括：0.01～0.02mg/L4,4'-二氨基联苯，5～10ml/L乙酸。优选的，所述A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂均采用断口式密封包装，其中A1衍化试剂和A2抑制试剂需要进行冷藏贮存，而B1显化试剂不可以进行冷藏贮存，且需要进行避光处理。一种糖化血红蛋白检测试剂的检测方法，包括如下步骤：步骤一：采集患者静脉2ml血液，并加入抗凝剂静置，随后将采血样本放入到离心机中进行操作，2～4min后取出血液样本，通过滴管进行样本的提取；步骤二：将试管中的血液样本滴入到培养皿中，取出A1衍化试剂并将其头部掰开，然后通过试管提取2～3ml的试剂滴入到培养皿中的血液样本上，完成后静置观察3min；步骤三：上述步骤中为空腹采样检测方法，而患者为饱腹状态下提取的血液样本在加入A1衍化试剂后，还需加入A2抑制试剂，A2抑制试剂与A1衍化试剂的加入比例为1:2；步骤四：在A试剂加入并且静置完成后，同样通过滴管提取定量的B1显化试剂滴加到血液样本的培养中，在试剂滴加后需要将培养皿移放到暗室中进行反应观察；步骤五：在出现反应后，将装有反应样本的培养皿放入到显色仪器中进行检测，最终通过测定吸光度求出HbA1c的百分浓度。优选的，所述步骤二中，A1衍化试剂中的8-羟基奎林水溶液配合蒸馏水作为血液样本的预处理液，与此同时果糖基肽氧化酶与血液中的糖化血红蛋白发生反应，在蛋白酶的作用下切断HbA1c的β链N末端的糖化二肽，而糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢。优选的，所述步骤三中，饱腹患者受消化系统的影响血液中仍会存在大量的未反应糖分，而血红蛋白发生糖化反应将不可逆，A2抑制试剂中的α-葡萄糖苷酶抑制剂和二肽基肽酶-4抑制剂均为糖分的抑制类药物，其中α-葡萄糖苷酶抑制剂包括：糖-100，利用枯草芽孢杆菌MORI产生的1-脱氧野尻霉素对小肠绒毛里面的α-葡萄糖苷酶有很好的抑制活性。优选的，所述步骤四中，完成反应后的培养皿中会分解出过氧化物酶，当过氧化物酶与B1显化试剂中的4,4'-二氨基联苯接触后会发生氧化反应，促使联苯胺氧化成蓝色化合物，其反应方程式为：RH2+H2O2→R+2H2O。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术的糖化血红蛋白检测试剂包括：A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂；A1衍化试剂包括：0.002mol/L8-羟基奎林水溶液,0.2～0.3ml/L果糖基肽氧化酶，50ml/L蒸馏水；A2抑制试剂包括：0.05～0.015mg/Lα-葡萄糖苷酶抑制剂，常见的α-葡萄糖苷酶抑制剂有糖-100、阿卡波糖和伏格列波糖，0.1～0.2mg/L二肽基肽酶-4抑制剂，50ml/L蒸馏水；B1显化试剂包括：0.01～0.02mg/L4,4'-二氨基联苯，5～10ml/L乙酸，4,4'-二氨基联苯为白色或微带淡黄色的稳定针状结晶或粉末，露置于空气中光线照射时颜色加深，且难溶于冷水，微溶于热水、乙醚，易溶于乙酸、稀盐酸和沸乙醇；2、本专利技术通过将试管中的血液样本滴入到培养皿中，取出A1衍化试剂并将其头部掰开，然后通过试管提取2～3ml的试剂滴入到培养皿中的血液样本上，完成后静置观察3min，上述步骤中为空腹采样检测方法，而患者为饱腹状态下提取的血液样本在加入A1衍化试剂后，还需加入A2抑制试剂，饱腹状态下身体还会分解产生糖分，而产生的糖分又会不断的与血红蛋白发生反应，从而导致检测数值的差值过大，并使检测精度下降，A2抑制试剂中的α-葡萄糖苷酶抑制剂和二肽基肽酶-4抑制剂均为糖分的抑制类药物，其中α-葡萄糖苷酶抑制剂包括：糖-100，利用枯草芽孢杆菌MORI产生的1-脱氧野尻霉素对小肠绒毛里面的α-葡萄糖苷酶有很好的抑制活性，这样即使在饱腹状态下也可以保障高精度的数值测定。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。本专利技术提供的一种实施例：一种糖化血红蛋白检测试剂，糖化血红蛋白检测试剂包括：A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂；A1衍化试剂包括：0.002mol/L8-羟基奎林水溶液,0.2～0.3ml/L果糖基肽氧化酶，50ml/L蒸馏水；A2抑制试剂包括：0.05～0.015mg/Lα-葡萄糖苷酶抑制剂，常见的α-葡萄糖苷酶抑制剂有糖-100、阿卡波糖和伏格列波糖，0.1～0.2mg/L二肽基肽酶-4抑制剂，50ml/L蒸馏水；B1显化试剂包括：0.01～0.02mg/L4,4'-二氨基联苯，5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种糖化血红蛋白检测试剂，其特征在于，所述糖化血红蛋白检测试剂包括：A

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白检测试剂，其特征在于，所述糖化血红蛋白检测试剂包括：A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂；
A1衍化试剂包括：0.002mol/L8-羟基奎林水溶液,0.2～0.3ml/L果糖基肽氧化酶，50ml/L蒸馏水；
A2抑制试剂包括：0.05～0.015mg/Lα-葡萄糖苷酶抑制剂，0.1～0.2mg/L二肽基肽酶-4抑制剂，50ml/L蒸馏水；
B1显化试剂包括：0.01～0.02mg/L4,4'-二氨基联苯，5～10ml/L乙酸。


2.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白检测试剂，其特征在于：所述A1衍化试剂、A2抑制试剂和B1显化试剂均采用断口式密封包装，其中A1衍化试剂和A2抑制试剂需要进行冷藏贮存，而B1显化试剂不可以进行冷藏贮存，且需要进行避光处理。


3.一种糖化血红蛋白检测试剂的检测方法，基于权利要求1-2任意一项糖化血红蛋白检测试剂，其中，包括如下步骤：
步骤一：采集患者静脉2ml血液，并加入抗凝剂静置，随后将采血样本放入到离心机中进行操作，2～4min后取出血液样本，通过滴管进行样本的提取；
步骤二：将试管中的血液样本滴入到培养皿中，取出A1衍化试剂并将其头部掰开，然后通过试管提取2～3ml的试剂滴入到培养皿中的血液样本上，完成后静置观察3min；
步骤三：上述步骤中为空腹采样检测方法，而患者为饱腹状态下提取的血液样本在加入A1衍化试剂后，还需加入A2抑制试剂，A2抑制试剂与A1衍化试剂的加入比例为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张神赐，
申请(专利权)人：奥研生物科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32