雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条及其制备方法与应用，所述雌激素为具有酚羟基、雌激素效应的雌激素化合物以及类雌激素化合物，包括雌二醇、雌三醇、雌酮、双酚A、己烯雌酚、炔雌醇等。该试纸条基于免疫识别和荧光共振能量转移原理，以雌激素‑牛血清蛋白‑长余辉粒子为荧光供体并将其固定在试纸检测区，以雌激素单克隆抗体修饰的胶体金为荧光受体，以智能手机拍照方式获得时间分辨荧光照片，试纸检测区的时间分辨荧光强度与雌激素含量呈正相关，显色强度与雌激素含量呈负相关，建立了雌激素的竞争型时间分辨荧光、显色双信号免疫层析试纸条，可对具有羟基、雌激素效应的雌激素以及类雌激素进行准确快速的检测。

【技术实现步骤摘要】
雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条及其制备方法与应用
本专利技术属于分析检测
，具体涉及环境雌激素的检测方法，特别是雌激素的时间分辨荧光、显色双信号免疫层析试纸条及其制备方法与应用。
技术介绍
雌激素(Estrogen,E)是促进雌性动物第二性征发育及性器官成熟的物质，由雌性动物卵巢和胎盘分泌产生。雌激素具有广泛而重要的生理作用，不仅有促进和维持女性生殖器官和第二性征的生理作用，并对内分泌、心血管、代谢系统、骨骼的生长和成熟，皮肤等均有明显的影响。天然雌激素主要是雌二醇E2、雌酮E1、雌三醇Estriol；目前临床上常用的雌激素类药物多是以雌二醇为母体人工合成的衍生物，如己烯雌酚、炔雌醇等。17β-雌二醇是所有内分泌干扰物中具有最强活性的天然雌激素，常被用作更年期女性的内分泌调节药物。然而，当雌激素通过饮用水和食物在人体内积累超过安全阈值时，会损害人类健康、破坏机体平衡，甚至危害后代。目前，雌激素的检测方法主要有色谱法、电化学法、表面增强拉曼光谱(SERS)法等。色谱法灵敏度高、稳定性好，但无法应用于现场检测；电化学法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条，其特征在于：所述试纸条结构为PVC底板上沿水平方向依次交叠粘贴有样品垫、硝酸纤维素膜即NC膜、吸收垫，所述NC膜两端位于交叠下层；/n所述NC膜包括检测区即T区、质控区即C区；/n所述检测区上固定有雌激素-牛血清蛋白-长余辉粒子E-BSA-PLPs，所述雌激素为具有酚羟基且具有雌激素效应的雌激素化合物以及类雌激素化合物，包括雌二醇、雌三醇、雌酮、双酚A、己烯雌酚、炔雌醇；/n所述质控区上固定有二抗。/n

【技术特征摘要】
1.一种雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条，其特征在于：所述试纸条结构为PVC底板上沿水平方向依次交叠粘贴有样品垫、硝酸纤维素膜即NC膜、吸收垫，所述NC膜两端位于交叠下层；
所述NC膜包括检测区即T区、质控区即C区；
所述检测区上固定有雌激素-牛血清蛋白-长余辉粒子E-BSA-PLPs，所述雌激素为具有酚羟基且具有雌激素效应的雌激素化合物以及类雌激素化合物，包括雌二醇、雌三醇、雌酮、双酚A、己烯雌酚、炔雌醇；
所述质控区上固定有二抗。


2.根据权利要求1所述的雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条，其特征在于：所述质控区固定的二抗包括但不限于羊抗鼠二抗、兔抗鼠二抗、羊抗兔二抗、驴抗兔二抗。


3.根据权利要求1所述的雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条的制备方法，其特征在于：制备步骤如下：
(1)合成雌激素-牛血清蛋白偶联物E-BSA；
(2)对长余辉粒子PLPs进行羧基修饰；
(3)制备偶联E-BSA的长余辉粒子复合物E-BSA-PLPs；
(4)构建试纸：T区滴加E-BSA-PLPs，C区滴加针对一抗来源的二抗，干燥后于真空袋中保存备用。


4.如权利要求3所述的雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)使用活性酯法进行生物偶联，具体方法为：将被羧基修饰过的长余辉粒子超声分散至磷酸盐缓冲溶液PBS中；然后加入1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl和N-羟基琥珀酰亚胺NHS，室温条件下持续搅拌后离心，除去上清液，并用PBS洗涤；再加入E-BSA，持续搅拌过夜，通过离心收集偶联产物，随后用PBS洗涤后再复溶于PBS中备用。


5.如权利要求3所述的雌激素的时间分辨荧光、显色双信号试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中，T区滴加含有0.5-5mg/mLE-BSA-PLPs的5-20mMPBS溶液，C区滴加含有0.05-0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张毅，王凌凌，何永熙，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32