一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒以及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒以及制备方法，本发明专利技术的原理和最核心的关键技术是选择合适插入位点以及sgRNA。插入RFP后进行病毒的纯化，获得可以稳定扩增的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入外源基因RFP，成功获得了表达RFP的重组FAdV‑4病毒，由此可见，RFP的插入位置可以作为插入其他病原的保护性抗原插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了夯实的理论基础。

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒以及制备方法
本专利技术涉及一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒以及制备方法，属于基因工程

技术介绍
禽腺病毒(FowlAdenovirus，FAdV)是dsDNA病毒，属于腺病毒科禽腺病毒属。根据限制性内切酶图谱分析以及基因测序将其分为5个种(A-E)，又依据血清交叉中和试验分为12个血清型(1-8a,8b-11)。自1987年在巴基斯坦安卡纳地区大规模爆发后，陆续在世界多个国家和地区流行。据报道，FAdV感染一般引起亚临床症状，而急性感染主要出现包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等症状。2013年，国内鸡群由FAdV引起的包涵体肝炎、心包积液病例逐渐增多，但并未出现爆发情况。然而在2015年，我国江苏、山东、河南、江西等多个地区3-4周龄肉鸡爆发以心包膜内积聚大量淡黄色液体以及肝脏出现明显肿胀和黄色坏死灶为主要特征的临床症状。经病毒分离培养鉴定，发现该病主要是由FAdV-4引起的肝炎-心包水综合征(Hydropericardiumsyndrome，H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，其载体为野生型血清4型禽腺病毒SD株。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，其载体为野生型血清4型禽腺病毒SD株。


2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，所述重组血清4型禽腺病毒的外源基因为红色荧光蛋白RFP，在激发光的照射下可以发出红色荧光，可以作为插入位点的荧光标签分子，其序列如SEQIDNO.1所示；
SEQIDNO.1为：
AGCGAGCTGATTAAGGAGAACATGCACATGAAGCTGTACATGGAGGGCACCGTGAACAACCACCACTTCAAGTGCACATCCGAGGGCGAAGGCAAGCCCTACGAGGGCACCCAGACCATGAAGATCAAGGTGGTCGAGGGCGGCCCTCTCCCCTTCGCCTTCGACATCCTGGCTACCAGCTTCATGTACGGCAGCAAAGCCTTCATCAACCACACCCAGGGCATCCCCGACTTCTTTAAGCAGTCCTTCCCTGAGGGCTTCACATGGGAGAGAATCACCACATACGAAGACGGGGGCGTGCTGACCGCTACCCAGGACACCAGCTTCCAGAACGGCTGCATCATCTACAACGTCAAGATCAACGGGGTGAACTTCCCATCCAACGGCCCTGTGATGCAGAAGAAAACACGCGGCTGGGAGGCCAACACCGAGATGCTGTACCCCGCTGACGGCGGCCTGAGAGGCCACAGCCAGATGGCCCTGAAGCTCGTGGGCGGGGGCTACCTGCACTGCTCCTTCAAGACCACATACAGATCCAAGAAACCCGCTAAGAACCTCAAGATGCCCGGCTTCCACTTCGTGGACCACAGACTGGAAAGAATCAAGGAGGCCGACAAAGAGACCTACGTCGAGCAGCACGAGATGGCTGTGGCCAAGTACTGCGACCTCCCTAGCAAACTGGGGCACAAG。


3.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR-Cas9技术的重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，所述的重组血清4型禽腺病毒，其中RFP插入的位置落在Fiber1基因的杆部，Fiber1的序列如SEQIDNO.2所示；
SEQIDNO.2为：
ATGTCGGCCCTAATCGCCTCCGCAGCCGATACCGTCTCCGCCAGCGGAAAAAAACGACCCCGCAGGGCCCTATCCGAACCTAGCCGGTACCTTTCGGAGGGCGACGAGCGTCGAAAACCCAAACGCGCGCGACCGGCCACCCGCGCGAATGGTCCCCTCCTCGATCTGGTGTATCCATTTGACTTCAATGCGGGGGGAGGAGGTGGCAGCGGTGGCGGCGGTGGGGGAGGTGGAGGTCAGCAGATCGCGGTCGACCCCGATGGGCCGCTCGAACTCACTGGTGACCTACTGACCCTCAACACCAAAACGCCCATTTACGTCAGCGATCGAGCGGTCAGTCTGCTCATCGATGACAATACTTTGGCCACTAAGCAAGCCAACGGGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建强，穆雅茹，谢泉，万志敏，李拓凡，秦爱建，邵红霞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32