一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1及其制备方法和应用，属于生物高分子技术领域。本发明专利技术公开的一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1，由15aa组氨酸标签区、184aa烟草环斑病毒重链可变区、15aa连接肽和反向连接的120aa烟草环斑病毒轻链可变区4段顺次连接构成，长度为334个氨基酸残基。TRAB1产量为480～2300mg/L发酵液，纯度为84.9～96.8％。本发明专利技术烟草环斑病毒单链抗体TRAB1具有选择性识别烟草环斑病毒外壳蛋白的特性，且对携带烟草环斑病毒样本反应阳性，在烟草环斑病毒出入境检验检疫领域具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物高分子
，更具体的说是涉及一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1及其制备方法和应用。
技术介绍
烟草环斑病毒(Tobaccoringspotvirus，TRSV)属豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒，等径二十面体，直径约28nm，是一种高风险的病毒，为我国禁止入境的一类检疫性有害生物。基因组含两条正义单链RNA，分别编码复制酶、运动蛋白(MP)和外壳蛋白(CP)。TRSV广泛分布于欧美及大洋州，能侵染烟草、葡萄、桃、李、苹果、樱桃、及番茄等150多种作物，引起多种病害，严重时导致绝产。TRSV远距离传播主要靠种子(苗)调运。种子传毒的植物很多，有的种传率很高，如大豆76％、千日红76％、接骨木11％、蒲公英24％、红三叶草3～7％、烟草3％。由于TRSV是一种可随种子苗木调运进行远距离传播的高风险检疫性有害生物，为防止该病毒进入我国，建立有效的快速检测方法十分重要。目前，国内外针对TRSV的检疫所使用的手段包括电镜观察、鉴别寄主反应(生物学方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1，其特征在于，其由15aa组氨酸标签区、184aa烟草环斑病毒重链可变区、15aa连接肽和反向连接的120aa烟草环斑病毒轻链可变区4段顺次连接构成。


3.一种编码权利要求1所述的烟草环斑病毒单链抗体TRAB1的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


4.根据权利要求1或2所述的一种烟草环斑病毒单链抗体TRAB1的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)单链抗体TRAB1表达载体构建：将SEQIDNO.2所示的基因序列接插入到pUC57载体上，获得单链抗体TRAB1表达载体；
(2)将步骤(1)获得的单链抗体TRAB1表达载体导入大肠杆菌TOP10中，获得单链抗体TRAB1表达菌株；
(3)单链抗体TRAB1的自诱导表达：将步骤(2)获得的单链抗体TRAB1表达菌株接种到自诱导表达培养基中，16～40℃培养12～24h，获得产物发酵液；
(4)单链抗体TRAB1的分离纯化：将步骤(3)获得的产物发酵液离心收集菌体，并重悬于细胞破碎缓冲液中，超声破碎，然后再次离心收集上清液，最后将上清液过镍离子柱并以梯度浓度咪唑洗脱，收集单链抗体TRAB1洗出液，经透析和冷冻干燥获...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓬军，傅慧兰，杨倩倩，刘光富，俞晓平，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33