用于治疗牛皮癣的药物及其生产方法技术

本发明专利技术涉及为治疗牛皮癣而开发的药物及其生产方法。本发明专利技术范围内开发的这种用于治疗牛皮癣的药物包含动物脂、落叶松树脂、蜂蜡、乳香、蜂胶、紫草、明矾和杜松焦油。明矾和杜松焦油。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗牛皮癣的药物及其生产方法
专利

[0001]本专利技术涉及为治疗牛皮癣而开发的药物及其生产方法。
[0002]专利技术背景牛皮癣是一种全身性炎性疾病，其特征在于在红色基底上的白色皮疹。牛皮癣主要在膝盖和肘部可见，并在患者中引起严重的瘙痒。虽然不清楚是什么引起为非感染性疾病的牛皮癣，但是已知在身体防御机制失效的情况下，应激因子对牛皮癣具有触发作用。
[0003]在2008年，观察到局部用于治疗生殖器疣的含有Imiquimib (IMQ)活性成分的乳膏(Aldara含有5% Imiquimib，商品名)具有诱导人牛皮癣样损伤的副作用，并且注意到对小鼠的相同作用已经引起了对该乳膏的关注[1]。研究已经很好地证明，结合Toll样TLR7和TLR8受体并作为免疫激活剂激活全身炎症途径的IMQ在小鼠中局部使用后产生全身应答，导致牛皮癣的形成[2，3，4，5，6]。当今已经决定在组织病理学和免疫组织化学上在小鼠模型中显示六个主要点，用于牛皮癣临床前研究的效率和标准化。这些如下：1. 观察表皮角质细胞过度增殖和表皮分化的变化，2. 乳头状瘤病，3. T细胞、树突细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的浸润，4. 观察T细胞的功能作用，5. 真皮血管形成的变化，和6. 所述试剂针对所述疾病表现出反应的能力。
[0004]目前，IMQ诱导的小鼠模型用作遵循所述六个点的理想临床前模型。
[0005]尽管还没有完全治愈牛皮癣的治疗方法，但是皮肤科医生试图用各种药物来控制。由于其严重的副作用(例如免疫抑制、毒性等)、住院治疗和随访困难、严重的代价和不能防止疾病的复发，最近开始使用的皮下免疫试剂不幸地在疾病的治疗中不是常见和有利的选择[7]。
[0006]专利技术概述本专利技术的目的是开发用于治疗牛皮癣的药物制剂。
[0007]专利技术详述为实现本专利技术目的而开发的“用于治疗牛皮癣的药物及其生产方法”在附图中说明，其中；图1是表皮厚度的图示。
[0008]图2是淋巴细胞增殖分析的图示。
[0009]图3是淋巴细胞培养物中的T调节细胞分析的图示。
[0010]图4是脾相对体重比率的图示。
[0011]图5是整个实验中耳厚度变化的图示。
[0012]图6是整个实验中皮肤上发红度变化的图示。
[0013]图7是整个实验中皮肤上厚度变化的图示。
[0014]图8是整个实验中皮肤上斑块形成的变化的图示。
[0015]图9是整个实验中总牛皮癣面积严重性指数(PASI)的变化的图示。
[0016]本专利技术的牛皮癣药物包含800
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1000 g的动物脂、250
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350 g的落叶松树脂、450
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550 g的蜂蜡、2
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3 g的乳香、40
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50 g的蜂胶、200
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250 g的紫草、200
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250 g的明矾、150
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200 g的杜松焦油。本专利技术的牛皮癣药物的生产方法包括以下步骤
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通过将动物脂与蜂蜡连续混合，在300℃下熔化动物脂，
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向获得的熔融混合物中首先加入乳香然后加入蜂胶，
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将研磨的落叶松树脂和明矾一起加入到所述混合物中，
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最后向所述混合物中加入研磨的紫草和杜松焦油，
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通过连续混合获得均匀混合物，
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过滤所述均匀混合物，
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获得用于治疗牛皮癣的药物，其为洗脱液形式的最终产品。
[0017]在本专利技术的优选的实施方案中，通过将获得的洗脱液铺展在观察到损伤的牛皮癣患者的皮肤表面上，将所述获得的洗脱液作为膏剂施用。
[0018]实验研究模拟小鼠牛皮癣和药物的施用将含有5% Imiquimib (IMQ)的名为Aldara (Meda Pharma, 3M Health Care)的乳膏每天一次，持续6天，给药于8
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11周龄成年雄性BALB/c小鼠的剃后的背和右耳，使得每只动物每天施用总共62.5 mg乳膏，从而在动物模型中产生牛皮癣炎症。将凡士林施用于对照组中动物的剃后的区域。阳性对照组每天口服接受1 mg/kg Mtx (甲氨蝶呤)。在实验期间，以5 mg/kg的剂量每天一次通过口服给予药物。在用IMQ诱导牛皮癣开始后1天开始向待测试药物的半治疗作用的组中的动物给予药物，并持续到实验期结束。每天测量体重和皮肤发红度、剥落和增厚，并根据牛皮癣面积严重性指数(PASI)评分，以监测动物的一般健康状态和用IMQ对牛皮癣的诱导。根据模型的需要，自实验开始那天起还定期记录右耳皮肤的增厚。
[0019]在施用结束时，用异氟烷麻醉动物，然后通过颈椎脱臼法实施安乐死。记录脾组织的大小和重量。
[0020]表皮厚度分析将解剖后从经IMQ治疗的小鼠背部收集的皮肤样品在福尔马林中固定，并制备石蜡块。以相等的间隔从每只动物收集十块厚度为10微米的切片。切片用Masson三色胶原染色，并通过显微镜拍摄它们的图像。通过取在每个切片的5个不同点处进行的测量的平均值来计算表皮厚度。
[0021]从脾组织进行T淋巴细胞分离、染色和刺激解剖后，在含有RPMI培养基的培养皿中用解剖刀将脾组织分成更小的部分，然后用巴斯德吸管将它们彻底研磨并洗涤而不使其分解。将细胞悬浮液通过70 μm过滤器后，将其吸收在PBS中并以2000 rpm离心10分钟。将沉淀的细胞溶解在含有0.037 g/L EDTA、1 g/L碳酸氢钾和8.29 g/L氯化铵的无菌裂解溶液中，并在室温下孵育10分钟。将以800 rpm离心10分钟后获得的上清液溶解在PBS中，并以2000 rpm离心10分钟。将沉淀的细胞溶解在10 ml的cRPMI培养基中，并确定细胞数。
[0022]为了染色的目的，将CFSE放在分离的细胞上。该过程和其余过程在黑暗环境中进
行。然后将在+4℃下孵育6分钟的细胞放在cRPMI中，并以2000 rpm离心5分钟。将cRPMI加入到沉淀的细胞中，并再次将其以1200 rpm离心5分钟。将沉淀的细胞重悬于cRPMI培养基中，并确定细胞数。每个孔中接种55
×
105个细胞。用CD3和CD28刺激淋巴细胞。将培养物放在37℃的培养箱中3天。
[0023]淋巴细胞的增殖分析将分离的淋巴细胞以每孔5
×
105个细胞的浓度铺展到48孔板的每个孔中。将用CFSE染色的淋巴细胞培养3天用于增殖分析。每组中进行非刺激性和抗
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CD3+CD28 (CDmix)刺激的淋巴细胞培养。在第三天，通过流式细胞术检查淋巴细胞的增殖分析。CFSE荧光染色可以在流式细胞术中在FL
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1中显示。分析后，比较存在或不存在刺激下T细胞的增殖。
[0024]淋巴细胞培养物中的T调节细胞分析培养分离的淋巴细胞3天后，检查CD4
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CD25
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于治疗牛皮癣的药物，其特征在于其包含动物脂、落叶松树脂、蜂蜡、乳香、蜂胶、紫草、明矾和杜松焦油。2.根据权利要求1所述的用于治疗牛皮癣的药物，其特征在于其包含800
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1000 g的动物脂、250
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350 g的落叶松树脂、450
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550 g的蜂蜡、2
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3 g的乳香、40
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50 g的蜂胶、200
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250 g的紫草、200
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250 g的明矾和150
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【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：耶迪特普大学，
类型：发明
国别省市：