包含细胞衍生的囊泡的组合物及其用途制造技术

本文尤其提供了由肾细胞(诸如生物活性的肾细胞，例如，所选择的肾细胞)产生的细胞外产物(例如，囊泡诸如微囊泡(microvesicle)，例如，外泌体(exosome)。还包括改变由细胞产生的囊泡的组分(诸如miRNA或蛋白质)的方法，以及产生包含各种化合物的囊泡的方法。还提供了诊断和治疗方法。断和治疗方法。断和治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含细胞衍生的囊泡的组合物及其用途
[0001]专利技术背景
[0002]细胞外囊泡，尤其是外泌体(exosome)的研究一直在迅速增加。关于外泌体生物发生(Kowal et al.,2014,Curr Opin Cell Biol.29C：116
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125)，它们的诊断和预后潜力(Revenfeld et al.,2014,Clin Ther.36(6)：830
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846)，以及组织工程和再生医药的潜在治疗应用(Lamichhane et al.,2014,Tissue Eng Part B Rev.)的多篇文章已经发表。这些mRNA、miRNA、蛋白质和脂质介体的载体能够作用于靶细胞，从而促进细胞
‑
细胞通讯和功能遗传信息的交换(Simons and Raposo,2009,Curr Opin Cell Biol.21(4):575
‑
581；Stoorvogel et al.,2002,Traffic 3(5):321
‑
330；Nieuwland and Sturk,2010,Thrombosis Research 125(Supplement 1):S49
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S51)
[0003]专利技术概述
[0004]本文尤其提供了由肾细胞(诸如生物活性的肾细胞，例如，所选择的肾细胞)产生的细胞外产物(例如，囊泡诸如微囊泡(microvesicle)，例如，外泌体)。在某些实施方案中，此类产品用于治疗肾脏疾病，诸如慢性肾脏疾病。还包括改变由细胞产生的囊泡的组分(诸如miRNA或蛋白质)的方法，以及产生包含各种化合物的囊泡的方法。还提供了诊断和治疗方法。
[0005]在一方面，本文提供了治疗受试者中肾脏疾病的方法。在某些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的分离的分泌的肾细胞囊泡，其中所述囊泡通过静脉内注射或通过经导管递送来施用。
[0006]在一方面，本文提供了用于检测囊泡中至少一种化合物的方法。在某些实施方案中，所述方法包括获得所述囊泡并检测至少一种化合物是否在所述囊泡中，其中(i)所述至少一种化合物是蛋白质，且所述蛋白质是CD9、CD81、CD146、CD326、CD40、CD42a、CD44、CD49e和/或SSEA
‑
4；(ii)所述至少一种化合物包含miRNA，其中所述miRNA包括miR
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145、miR
‑
22、miR
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7、miR
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10a、miR
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143和/或let7b中的至少两种；和/或(iii)所述至少一种化合物不由天然肾脏中的肾细胞表达或产生。
[0007]在一方面，本文提供了用于在已施用所述生物活性的肾细胞群体的受试者中监测用生物活性的肾细胞群体治疗的方法。在某些实施方案中，所述方法包括根据本文公开的方法，检测来自所述受试者的囊泡中是否存在至少一种化合物。
[0008]在一方面，本文提供了鉴定囊泡是否是再生性的的方法。在某些实施方案中，所述方法包括(i)根据本文公开的方法检测所述囊泡中是否存在蛋白质和/或miRNA；和(ii)如果在所述囊泡中检测到所述蛋白质和/或miRNA，则将所述囊泡鉴定为是再生性的。
[0009]在一方面，本文提供了检测来自生物活性的肾细胞群体的囊泡中至少一种miRNA的水平的方法。在某些实施方案中，所述方法包括(i)检测与对照相比，在所述囊泡中以下miRNA分子中的一种或多种是否增加：miR
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1248、miR
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3168、miR
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7113
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5p、miR
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758
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3p、miR
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937
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3p、miR
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4455、miR
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4521、miR
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203a
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3p、miR
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22
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3p、miR
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574
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3p、miR
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181b
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5p、miR
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1260b和/或miR
‑
181b
‑
5p；和(ii)检测与对照相比，在所述囊泡中以下miRNA分子中的一种或多种是否减少：miR
‑1‑
3p、miR
‑1‑
3p、miR
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143
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3p、miR
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150
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5p、miR
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509
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3p、miR
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653
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5p、
miR
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204
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5p、miR
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192
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5p和/或miR
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363
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3p。在某些实施方案中，所述miRNA是哺乳动物miRNA，诸如人miRNA。
[0010]在一方面，本文提供了治疗受试者中肾脏疾病的方法。在某些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的来自囊泡制剂的囊泡，其中来自所述囊泡制剂的囊泡根据本文公开的方法已经鉴定是再生性的。
[0011]在某些实施方案中，本文提供了治疗受试者中肾脏疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的包含生物活性的肾细胞群体的组合物，所述生物活性的肾细胞群体补充有尚未由所述生物活性的肾细胞群体分泌的肾细胞囊泡。
[0012]在一方面，本文提供了改变由生物活性的肾细胞群体产生的囊泡中至少一种miRNA和/或蛋白质的水平的方法，所述方法包括在低氧条件下培养所述群体。
[0013]在一方面，本文提供了囊泡，其包含不由天然肾脏中的肾细胞产生的化合物。
[0014]在一方面，本文提供了组合物，其包含本文公开的囊泡和药学上可接受的载体。
[0015]在一方面，本文提供了组合物，其包含肾细胞囊泡和非肾细胞囊泡。
[0016]在一方面，本文提供了组合物，其包含由原代肾细胞产生的囊泡和由所选择的肾细胞产生的囊泡。
[0017]在一方面，本文提供了治疗受试者中肾脏疾病的方法。在某些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文公开的组合物。
[0018]在一方面，本文提供了从细胞中产生囊泡(例如，微囊泡诸如外泌体)的方法，其中所述囊泡包含不由所述细胞产生的化合物。在某些实施方案中，所述方法包括从细胞培养上清液中分离所述囊泡，其中所述细胞培养上清液来自与所述化合物接触(例如，在含有其的培养基中培养)的细胞的培养物。在某些实施方案中，所述方法包括从细胞培养上清液中分离所述囊泡(例如，微囊泡诸如外泌体)，然后通过使外泌体膜透化以便于(facilitate)化合物的进入(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.治疗受试者中肾脏疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的分离的分泌的肾细胞囊泡，其中所述囊泡通过静脉内注射或通过经导管递送来施用。2.权利要求1的方法，其中所述囊泡静脉内注射至外周血管中。3.权利要求1的方法，其中所述经导管递送进入所述受试者的左肾动脉或右肾动脉。4.权利要求1
‑
3中任一项的方法，其中所述受试者患有慢性肾脏疾病。5.权利要求4的方法，其中所述慢性肾脏疾病是I、II、III、IV或V期肾脏疾病。6.权利要求1
‑
5中任一项的方法，其中治疗所述肾脏疾病包括降低或预防所述受试者中肾脏纤维化。7.权利要求1
‑
6中任一项的方法，其中所述受试者以每周至少1、2或3次接受透析，持续至少1或2周。8.权利要求1
‑
7中任一项的方法，其中所述受试者患有II型糖尿病。9.权利要求1
‑
8中任一项的方法，其中所述受试者患有肾脏和泌尿道先天性异常(congenital anomalies)(CAKUT)。10.权利要求1
‑
9中任一项的方法，其中所述受试者具有小于90mL/min/1.73m2的肾小球滤过率(GFR)、微量白蛋白尿或大量白蛋白尿。11.权利要求1
‑
10中任一项的方法，其中不将细胞施用于所述受试者。12.权利要求1
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12中任一项的方法，其中所述囊泡包含微囊泡(microvesicle)。13.权利要求1
‑
13中任一项的方法，其中所述囊泡包含直径为约30
‑
150nm的外泌体。14.权利要求1
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14中任一项的方法，其中所述囊泡在其外表面上、在其脂质双层中和/或在其内腔中包含化合物。15.权利要求14的方法，其中所述化合物减弱一种或多种细胞途径。16.权利要求14或15中任一项的方法，其中所述化合物是蛋白质、小分子或多核苷酸。17.权利要求16的方法，其中所述多核苷酸是miRNA分子。18.权利要求14
‑
17中任一项的方法，其中所述化合物不是由天然存在的肾细胞产生的。19.权利要求14
‑
16中任一项的方法，其中所述化合物是细胞因子。20.权利要求14
‑
16中任一项的方法，其中所述化合物是人工化合物。21.权利要求20的方法，其中所述化合物是用于治疗肾脏疾病的化合物。22.权利要求15
‑
21中任一项的方法，其中所述囊泡包含减弱纤溶酶原激活抑制剂
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1(Plasminogen Activation Inhibitor
‑
1)(PAI
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1)信号转导和/或转化生长因子β(TGFβ)信号转导的化合物。23.权利要求15
‑
21中任一项的方法，其中所述囊泡包含减弱规范Wnt信号转导的化合物。24.权利要求15
‑
21中任一项的方法，其中所述囊泡包含减弱非规范Wnt信号转导的化合物。25.权利要求15
‑
21中任一项的方法，其中所述囊泡包含减弱CXCR4介导的信号转导的化合物。26.权利要求15
‑
21中任一项的方法，其中所述囊泡包含下调炎性细胞因子的化合物。27.权利要求26的方法，其中所述炎性细胞因子是IL8。
28.权利要求15
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21中任一项的方法，其中所述囊泡包含减弱Notch信号转导的化合物。29.权利要求14
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16中任一项的方法，其中所述化合物是用于细胞的免疫表型分型的细胞表面分子。30.权利要求29的方法，其中所述化合物是CD9、CD63、CD81、CD133、CD146、CD326、CD40、CD42a、CD44或CD49e。31.权利要求14的方法，其中所述化合物是蛋白受体。32.权利要求31的方法，其中所述蛋白受体是类视黄醇相关受体(ROR4)。33.权利要求14的方法，其中所述化合物是发育阶段标志物。34.权利要求33的方法，其中所述发育阶段标志物是阶段特异性胚胎抗原
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4(SSEA
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4)。35.权利要求14的方法，其中所述化合物是应激保护蛋白(stress
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protecting protein)。36.权利要求35的方法，其中所述应激保护蛋白是热休克蛋白(HSP)70或HSP90。37.权利要求14的方法，其中所述化合物是支架蛋白。38.权利要求37的方法，其中所述支架蛋白是TST101。39.权利要求14
‑
17中任一项的方法，其中所述化合物是miRNA且在所述囊泡的腔中。40.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是细胞周期调节miRNA。41.权利要求40的方法，其中所述细胞周期调节miRNA是let7a、miR
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143或miR22。42.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是细胞衰老调控miRNA。43.权利要求42的方法，其中所述细胞衰老调控miRNA是miR
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34。44.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是细胞迁移调控miRNA。45.权利要求44的方法，其中所述细胞迁移调控miRNA是miR30
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C。46.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是细胞生长调节miRNA。47.权利要求46的方法，其中所述细胞生长调节miRNA是miR194
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2。48.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是细胞信号途径调控miRNA。49.权利要求48的方法，其中所述细胞信号途径调控miRNA是miR
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142。50.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是炎症调控miRNA。51.权利要求50的方法，其中所述炎症调控miRNA是miR
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10a。52.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是血管生成调控miRNA。53.权利要求52的方法，其中所述血管生成调控miRNA是miR
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296和/或miR
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146a。54.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述miRNA是激酶活性调控miRNA。55.权利要求54的方法，其中所述激酶活性调控miRNA是miR
‑
83。56.权利要求14
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17或39中任一项的方法，其中所述化合物是抑制PAI
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1、TGFβ、规范Wnt信号转导、非规范Wnt信号转导、CXCR4介导的信号转导和/或Notch信号转导的miRNA。57.权利要求6
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56中任一项的方法，其中通过抑制上皮到间充质转化(mesenchymal transition)(EMT)来降低或预防肾脏纤维化。58.权利要求1
‑
57中任一项的方法，其中囊泡包含miR
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145、miR
‑
22、miR
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7、miR
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10a、miR
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143和/或let7b。59.权利要求1
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58中任一项的方法，其中囊泡包含miR
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1248、miR
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3168、miR
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7113
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5p、miR
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758
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3p、miR
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937
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3p、miR
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4455、miR
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4521、miR
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203a
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3p、miR
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22
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3p、miR
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574
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3p、miR
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181b
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5p、miR
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1260b和/或miR
‑
181b
‑
5p。60.权利要求1
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59中任一项的方法，其中所述囊泡包含CD9、CD63、CD81、CD133、CD146、CD326、CD40、CD42a、CD44、CD49e和/或SSEA
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4。61.权利要求60的方法，其中所述囊泡包含CD63、CD9和/或CD81，且所述CD63、CD9和/或CD81在所述囊泡的外表面上。62.权利要求60的方法，其中所述囊泡包含CD133、CD326和/或CD49e，且所述CD133、CD326和/或CD49e在所述囊泡的外表面上。63.权利要求1
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62中任一项的方法，其中与未与所述囊泡接触的肾细胞相比，与所述囊泡接触的肾细胞的增殖增加。64.权利要求1
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63中任一项的方法，其中与未与所述囊泡接触的内皮细胞相比，与所述囊泡接触的内皮细胞的血管形成增加。65.权利要求1
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64中任一项的方法，其中与未与所述囊泡接触的肾细胞相比，与所述囊泡接触的肾细胞的肾单位肾小管(nephron tubule)形成增加。66.权利要求1
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65中任一项的方法，其中所述囊泡包含磷脂、鞘磷脂、胆固醇、神经酰胺(cerimide)和/或磷脂酰胆碱。67.权利要求1
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67中任一项的方法，其中所述囊泡处于包含药学上可接受的载体的组合物中。68.权利要求67的方法，其中所述药学上可接受的载体包含水性溶液。69.权利要求1
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68中任一项的方法，其中所述囊泡已由原代肾细胞群体分泌。70.权利要求69的方法，其中所述细胞已传代1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。71.权利要求1
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70中任一项的方法，其中所述囊泡已由富集的肾细胞群体分泌，其中所述富集的肾细胞群体包含生物活性的肾细胞。72.权利要求71的方法，其中所述群体包含：(a)肾小管细胞的富集群体；或(b)肾小球细胞以及血管细胞中一种或多种，和肾小管细胞的富集群体。73.权利要求71或72的方法，其中所述群体衍生自起始肾细胞群体，且与所述起始群体相比包含更大百分比的肾小管细胞。74.权利要求73的方法，其中所述群体包含肾小球细胞。75.权利要求74的方法，其中所述群体包含血管细胞。76.权利要求69
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75中任一项的方法，其中所述群体对于所述受试者是非自体的。77.权利要求69
‑
75中任一项的方法，其中所述群体对于所述受试者是自体的。78.权利要求69
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75中任一项的方法，其中所述群体是同种异体的。79.权利要求70
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78中任一项的方法，其中所述群体的细胞是低氧和/或碘克沙醇抗性的。80.权利要求70
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79中任一项的方法，其中所述群体中的细胞表达CK18和/或GGT1。81.权利要求70
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80中任一项的方法，其中所述群体具有LAP和/或GGT酶活性。82.权利要求70
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81中任一项的方法，其中所述群体中至少80％的细胞表达GGT
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1。83.权利要求70
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82中任一项的方法，其中所述群体表达VEGF和/或KIM
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1。84.权利要求70
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83中任一项的方法，其中所述群体中4.5％至81.2％的细胞表达GGT
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1，所述群体中3.0％至53.7％的细胞表达AQP2，并且所述群体中81.1％至99.7％的细胞表达CK18。85.权利要求70
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84中任一项的方法，其中与来自肾脏活组织检查的肾细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒂莫西伯特伦，迪帕克简，
申请(专利权)人：迪帕克简，
类型：发明
国别省市：