经修饰的丝状真菌宿主细胞制造技术

本发明专利技术涉及分泌目的多肽的丝状真菌细胞，其中与非突变的其他等基因或亲本细胞相比，citT基因的表达被改变、降低或消除，以及在所述细胞中产生分泌的目的多肽的方法，以及产生所述细胞的方法。所述细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的丝状真菌宿主细胞
[0001]序列表的引用
[0002]本申请包含计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。


[0003]本专利技术涉及经修饰的丝状真菌细胞，以及用于生产此类细胞的方法，连同生产其中分泌的目的多肽的方法。

技术介绍

[0004]已经表明，黑曲霉(Aspergillus niger)中的citT基因编码柠檬酸盐转运蛋白，CitT。通过内源黑曲霉citT基因的分裂标记基因替代的灭活消除了此真菌分泌柠檬酸盐的能力，并且在通常有利于黑曲霉柠檬酸盐生产的条件下，增加了细胞外草酸盐的积累(Odoni D.I.等人Aspergillus niger citrate exporter revealed by comparison of two alternative citrate producing conditions[通过比较两种替代柠檬酸盐生产条件揭示了黑曲霉柠檬酸盐出口],2018年4月23日在线发表；https://doi.org/10.1101/259051)。

技术实现思路

...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种突变的丝状真菌宿主细胞，其包含编码分泌的目的多肽的异源多核苷酸，其中与非突变的其他等基因或亲本细胞相比，citT基因的表达被改变、降低或消除，其中所述citT基因编码柠檬酸盐转运蛋白多肽CitT，该柠檬酸盐转运蛋白多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％氨基酸序列同一性。2.如权利要求1所述的宿主细胞，该宿主细胞属于选自下组的属，该组由以下组成：枝顶孢属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌科、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属和木霉属。3.如权利要求2所述的宿主细胞，该宿主细胞是曲霉属细胞；优选地棘孢曲霉、aculetinus曲霉、泡盛曲霉、巴西曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、琉球曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、或米曲霉。4.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该分泌的目的多肽是酶；优选地，该酶是水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶，例如氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、α
‑
半乳糖苷酶、β
‑
半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α
‑
葡糖苷酶、β
‑
葡糖苷酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、或β
‑
木糖苷酶。5.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该柠檬酸盐转运蛋白多肽CitT包含与SEQ ID NO:3所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列或由其组成；优选地包含与SEQ ID NO:3所示氨基酸序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或最优选地至少99％同一性的氨基酸序列或由其组成。6.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该citT基因或其同源物包含与SEQ ID NO:1所示的基因组DNA序列具有至少80％同一性的基因组核苷酸序列或由其组成；优选地包含与SEQ ID NO:1所示的基因组DNA序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或最优选地至少99％同一性的基因组核苷酸序列或由其组成。7.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中该citT基因或其同源物包含基因组核苷酸序列或由其组成，其cDNA序列与SEQ ID NO:2所示的cDNA序列具有至少80％同一性；优选地与SEQ ID NO:2所示的cDNA序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或最优选地至少99％同一性。8.如任一项前述权利要求所述的宿主细胞，其中与非突变的其他等基因或亲本细胞相比，该分泌的目的多肽的产量和/或生产力提高。9.一种产生分泌的目的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：a)在有助于该分泌的目的多肽的表达的条件下，培养包含编码分泌的目的多肽的异源多核苷酸的突变的丝状真菌宿主细胞，其中与非突变的其他等基因或亲本细胞相比，citT基因的表达被改变、降低或消除，并且其中所述citT基因编码柠檬酸盐转运蛋白多肽CitT，该柠檬酸盐转运蛋白多肽与SEQ ID NO:3具有至少80％氨基酸序列同一性；以及，任选地b)回收该分泌的目的多肽。10.如权利要求9所述的方法，其中该丝状真菌宿主细胞属于选自下组的属，该组由以
下组成：枝顶孢属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌科、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属和木霉属。11.如权利要求10所述的方法细胞，其中该丝状真菌宿主细胞是棘孢曲霉、aculetinus曲霉、泡盛曲霉、巴西曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、琉球曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、或米曲霉。12.如权利要求9
‑
11中任一项所述的方法，其中该分泌的目的多肽是酶；优选地，该酶是水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶，例如氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、α
‑
半乳糖苷酶、β
‑
半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α
‑
葡糖苷酶、β
‑
葡糖苷酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、...

【专利技术属性】
技术研发人员：宇田川裕晃，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：