一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，属于烟气毒性分析技术领域。本发明专利技术的提取方法包括以下步骤：1)抽吸加热卷烟时采用滤片捕集烟气总粒相物，采用DPBS缓冲液吸收穿过滤片的烟气气相物；每个滤片对应的抽吸口数为35

【技术实现步骤摘要】
一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法


[0001]本专利技术涉及一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，属于烟气毒性分析


技术介绍

[0002]加热卷烟(又被称为加热不燃烧卷烟、电加热卷烟或加热烟草制品)是一类为降低烟气健康风险研发的新型烟草制品。该类产品主要通过控制温度使烟叶在非燃烧状态下释放烟气供消费者使用。由于其具有低危害和类似于可燃卷烟的口感、尼古丁输送等特性，日渐受到消费者青睐。研究发现，加热卷烟的“低危害”可能是由于其加热温度(不超过350℃)比传统卷烟燃烧温度低，释放出比燃烧卷烟较低的有害和潜在有害成分引起的。
[0003]卷烟烟气由粒相成分和气相成分组成。卷烟体外毒性测试全烟气提取方法：滤片收集的烟气总粒相物(TPM)用一定体积的二甲基亚砜(DMSO)萃取并定容至10mg/mL浓度的TPM的DMSO溶液，用等DMSO体积的缓冲液收集烟气气相物(GVP)，然后将TPM和GVP溶液等体积混合用于后续细胞毒性测试。在确定毒性测试剂量范围时，由于DMSO超过一定体积分数后对细胞有毒性损伤，因此，允许的最大染毒剂量通常控制在DMSO体积分数为2％以下，例如：根据这一方式，参比卷烟3R4F最大允许的染毒剂量约为388.2μg/mL，实际上，在染毒剂量约为80μg/mL下，Beas
‑
2b细胞存活率即可达到30％左右，因此，在这种提取方法下，很容易观察到最大的Beas
‑
2b细胞毒性响应范围，并且做到50％细胞存活率的响应浓度。
[0004]当前用于加热卷烟体外毒性测试的全烟气提取方法主要延用传统卷烟的全烟气提取方法，但是由于加热卷烟烟气有害成分较少，毒性小，在传统卷烟的全烟气提取方案下，容易造成提取母液中全烟气提取物浓度低而DMSO浓度较高，从而，无法观察到较低细胞存活率的细胞毒性响应范围，从而无法客观地评估加热卷烟的体外毒性情况。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，可以获得较大的细胞毒性响应范围。
[0006]为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，包括以下步骤：
[0008]1)在抽吸加热卷烟的过程中，采用滤片捕集烟气总粒相物，采用DPBS缓冲液吸收穿过滤片的烟气气相物；每1个滤片对应的抽吸口数为35
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45口，且每使用1个滤片对应采用的DPBS缓冲液的体积为V1，V1为2
‑
3.75mL；所述滤片为购自Borgwaldt KC GmbH的规格为直径44mm的剑桥滤片；
[0009]2)捕集结束后，采用二甲基亚砜对滤片上捕集的烟气总粒相物进行萃取，萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜与步骤1)中吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合；进行所述萃取时，每1个滤片对应采用的二甲基亚砜的体积为V2，V2为2
‑
3.0mL且V2≤V1。
[0010]本专利技术的用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，能够充分获取加热卷
烟烟气提取物，并有助于获得较高浓度的全烟气提取物母液(即全烟气提取物在母液中的浓度尽量高、DMSO的体积分数尽量低)，用于体外毒性测试时，可以获得较大细胞毒性响应范围，从而较好的评估加热卷烟的体外毒性情况。
[0011]优选的，步骤1)中，每1个滤片对应的抽吸口数为40口，且每使用1个滤片对应采用的DPBS缓冲溶液的体积为3.75mL；步骤2)中，每1个滤片对应采用的二甲基亚砜的体积为2mL。
[0012]进一步的，DPBS缓冲溶液为无钙镁PBS缓冲溶液，具体为氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的混合水溶液，pH值为7.2
‑
7.4。DPBS缓冲溶液中，氯化钠的浓度为8.0g/L，氯化钾的浓度为0.2g/L，磷酸氢二钠的浓度为1.15g/L，磷酸二氢钾的浓度为0.2g/L。
[0013]所述抽吸采用的设备为吸烟机。优选的，步骤1)中，所述抽吸采用ISO抽吸模式或Health Canada Intense(简称HCI)抽吸模式，ISO和HCI抽吸模式的具体抽吸方法见表1。
[0014]表1 ISO和HCI两种抽吸模式
[0015][0016]优选的，步骤1)中，采用的滤片的数量为4个。采用多个滤片时，当每个滤片抽吸口数达到设定口数时需要更换滤片。每支加热卷烟的抽吸口数可以根据具体的抽吸模式进行调整。每支加热卷烟的抽吸口数优选为4口。每支加热卷烟抽吸4口普适于多种加热烟具类型的ISO和HCI的抽吸模式。
[0017]二甲基亚砜呈中性且极性较高，采用二甲基亚砜对滤片进行萃取时，二甲基亚砜不会和烟气粒相物的化学成分发生反应，并且对烟气中的化学成分具有较好的萃取效果。
[0018]优选的，步骤1)中，所述DPBS缓冲溶液的温度为0
‑
4℃。通过使通过滤片的烟气冷却降温，可以尽可能的充分捕集烟气气相物。DPBS缓冲溶液的温度可以通过冰浴控制。
[0019]优选的，V2＜V1时，所述混合是将萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜、补加液与吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合；所述萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜和补加液的总体积与吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液体积相等；所述补加液为DPBS缓冲溶液或细胞培养基。萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜、补加液与吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合所得的混合液即为加热卷烟全烟气提取物母液。
[0020]V2＝V1时，所述混合是将萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜与吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合。
[0021]实验测试证明，采用购自Borgwaldt KC GmbH的规格为直径44mm的剑桥滤片捕集不超过45口烟气时，滤片背面未看到黄色，提示主流烟气经滤片捕集并未透过滤片；每个滤片捕集加热卷烟烟气不超过45口时，2mL二甲基亚砜可以将单个滤片完全浸没并将单个滤片捕集的总粒相物萃取出来，3
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3.75mL体积的DPBS缓冲液可以吸收通过以上单个滤片对应
口数的烟气气相物。而44mm的Whatman滤片则需要更多的体积二甲基亚砜才能完全浸没。
附图说明
[0022]图1为本专利技术的实施例1的提取方法采用的提取装置的示意图，其中，1
‑
烟气捕集器，2
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第一吸收瓶，3
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第二吸收瓶，4
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抽气泵；
[0023]图2为本专利技术的实验例中不同DMSO体积分数(％)下Beas
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2b细胞的存活率图。
具体实施方式
[0024]以下结合具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步的说明。
[0025]实施例以及对比例中采用的DPBS缓冲溶液为氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的混合水溶液，pH值为7.2
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7.4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：1)在抽吸加热卷烟的过程中，采用滤片捕集烟气总粒相物，采用DPBS缓冲液吸收穿过滤片的烟气气相物；每1个滤片对应的抽吸口数为35
‑
45口，且每使用1个滤片对应采用的DPBS缓冲液的体积为V1，V1为2
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3.75mL；所述滤片为购自Borgwaldt KC GmbH的规格为直径44mm的剑桥滤片；2)捕集结束后，采用二甲基亚砜对滤片上捕集的烟气总粒相物进行萃取，萃取有烟气总粒相物的二甲基亚砜与步骤1)中吸收烟气气相物后的DPBS缓冲溶液进行混合；进行所述萃取时，每1个滤片对应采用的二甲基亚砜的体积为V2，V2为2
‑
3.0mL且V2≤V1。2.根据权利要求1所述的用于体外毒性测试的加热卷烟全烟气的提取方法，其特征在于：步骤1)中，每1个滤片对应的抽吸口数为40口，且每使用1个滤片对应采用的DPBS缓冲溶液的体积为3.75mL；步骤2)中，每1个滤片对应采...

【专利技术属性】
技术研发人员：华辰凤，李翔，赵俊伟，尚平平，谢复炜，孙学辉，秦亚琼，刘惠民，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：