一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法制造技术

本发明专利技术涉及一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，血浆经甲酸甲醇和乙酸乙酯萃取血浆中游离氨基酸并氮气吹干，吹干样品复溶后经超高效反相色谱将氨基酸分离和串联质谱的多反应模式监测；本发明专利技术建立了一种超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法


[0001]本专利技术属于血清检测领域，主要涉及串联质谱法检测人体血浆中9种游离氨基酸的技术，具有检测时间短、检测灵敏度高的特点。

技术介绍

[0002]游离氨基酸是以游离状态在生物体内存在的一组氨基酸，是既含氨基(－NH2)又含羧基(
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COOH)的有机化合物。所测的九种氨基酸，根据R基的性质分为：1)含非极性、疏水性R基的氨基酸：缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、甘氨酸(Gly)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)；2)含极性、中性R基的氨基酸：谷氨酰胺(Gln)、酪氨酸(Tyr)；3)含酸性R基的氨基酸：谷氨酸(Glu)。
[0003]目前，有关游离氨酸的检测方法有很多，如氨基酸分析仪测定法、液相色谱
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串联质谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等方法。氨基酸分析仪测定法适用于测定蛋白质、多肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量，而液相色谱
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串联质谱法(LC
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MS/MS)能够区分氨基酸及其代谢产物，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，其特征在于，步骤如下：(1)氨基酸标准品溶液配制：(2)内标标准品溶液配制：称取内标标准品10mg，加入甲醇溶液溶解配制成浓度为10mg/mL内标标准品母液，再加入甲醇溶液稀释成浓度为10μg/mL的内标标准品工作液；(3)样品前处理方法为：取血浆样本，并用生理盐水稀释15倍，再从稀释的样本中吸取10μL；加入10μL内标标准品工作液，再加入甲酸甲醇/乙酸乙酯混合溶液，振荡后静置、离心；取60μL上清液氮吹，再用200μL流动相A溶液复溶，振荡后超声、离心，取80μL上清液进行超高效液相色谱
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串联质谱检测。2.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，其特征在于：步骤(2)中内标为2
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氯
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苯丙氨酸。3.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，其特征在于：步骤(3)中，甲酸甲醇/乙酸乙酯混合溶液为含0.1％(V/V)的甲酸的甲醇溶液20μL和乙酸乙酯溶液40μL。4.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，其特征在于：步骤(3)中，振荡后静置、离心的步骤如下：混匀振荡60～120s，于
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20℃静置10～15min后，以16000rpm离心10～15min。5.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法，其特征在于：步骤(3)中，振荡后超声、离心的步骤如下：混匀振荡60～120s，超声10～20s后，以16000rpm离心10～15min。6.根据权利要求1所述的一种快速检测血浆九种游离氨基酸的串联质谱法...

【专利技术属性】
技术研发人员：金维荣，董辉，周蓉，秦红友，李雯，
申请(专利权)人：申友基因组研究院南京有限公司，
类型：发明
国别省市：