一种携带修饰的小RNA的建库方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种携带修饰的小RNA的建库方法，至少包括如下步骤：1）利用氨基酸去除试剂去除携带修饰的小RNA末端的氨基酸残基；2）利用第一转化剂使携带修饰的小RNA的5

【技术实现步骤摘要】
一种携带修饰的小RNA的建库方法及其应用


[0001]本专利技术涉及基因测序领域，特别是涉及一种携带修饰的小RNA的建库方法及其应用。

技术介绍

[0002]非编码RNA中包含多种小RNA如siRNA、miRNA、piRNA等，它们组成了细胞中高度复杂的小RNA调控网络，在调节个体发育、细胞增殖分化、肿瘤的发生发展及抗病毒等整个细胞水平几乎所有事件中起着重要的调控作用。
[0003]近年来随着高通量RNA测序(RNA
‑
seq)技术的发展，我们认识了细胞中丰富的RNA世界。同时大量的新类型的小RNA在不同的物种中被发现和报道，其中有tsRNA(tRNA来源的小RNA)，rsRNA(rRNA来源的小RNA)，rasiRNA(重复相关的siRNA)，hcRNA(异染色质RNA)和PASR/TASR(启动子终止子相关的小RNA)等。传统的RNA
‑
seq是在RNA的末端加上接头，再利用与3
’
端接头互补的引物进行逆转录。这种方法适用于结构特征为5
’‑
磷酸基团，3
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种携带修饰的小RNA的建库方法，至少包括如下步骤：1)利用氨基酸去除试剂去除携带修饰的小RNA末端的氨基酸残基；2)利用第一转化剂使携带修饰的小RNA的5
’
端的5
‑
cap转化为5
’
P；3)利用第二转化剂使携带修饰的小RNA的5
’
端的5
’‑
OH转化为5
’
P，3
’
P和2
’
，3
’‑
cP端转化为3
’‑
OH；4)利用去甲基化试剂去除携带修饰的小RNA的甲基化修饰；5)将携带修饰的小RNA连接测序接头；6)利用包括逆转录酶在内的逆转录试剂将携带修饰的小RNA反转录成cDNA；7)将cDNA纯化后进行PCR扩增，获得携带修饰的小RNA的测序文库。2.如权利要求1所述的携带修饰的小RNA的建库方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：a.所述携带修饰的小RNA为末端及内部携带修饰的小RNA；b.所述携带修饰的小RNA的核苷酸长度为15
‑
40nt；c.步骤1)中，所述氨基酸去除试剂选自Tris
‑
HCl缓冲液；d.步骤2)中，所述第一转化剂选自RNA5
’
酸性焦磷酸水解酶。3.如权利要求1所述的携带修饰的小RNA的建库方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄鹏羽，王鹤鸣，黄荣，李玲，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：