一种奶制品中喹诺酮类化合物的检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种奶制品中喹诺酮类化合物的检测方法及其应用，包括如下步骤：使用酸化乙腈对待测样品进行处理，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；所述上清液经萃取剂萃取，得到待测试液；利用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。本发明专利技术检测方法简单、成本低廉、重复性好，提高了奶制品中喹诺酮类化合物的检测效率和检测结果的可靠性。

【技术实现步骤摘要】
一种奶制品中喹诺酮类化合物的检测方法及其应用
本专利技术属于兽药残留检测领域，特别涉及到一种奶制品中喹诺酮类化合物的检测方法及其应用。
技术介绍
牛奶是深受广大消费者喜爱的饮料，含有丰富的蛋白质、乳脂肪、维生素和矿物质等营养物质，乳蛋白中含有人体所必须的氨基酸，乳脂肪多为短链和中链脂肪酸，钾、磷、钙等矿物质配比合理，易于人体吸收。喹诺酮类化合物(Quinolones)，为化学合成抗菌药，通过抑制细菌DNA旋转酶的活性，影响细菌的正常代谢和繁衍，由于抗菌谱广，抗菌作用强，被广泛应用于畜牧养殖等产业中。但这类药物及其代谢产物可以蓄积在动物体内，形成不同程度的药物残留。如果长期食用喹诺酮类药物残留超标的奶制品(例如牛奶)，可能会引起皮疹、过敏等应激反应，并可能影响人体肠道中正常菌群生长，低浓度的残留药物也可能诱导致病菌产生耐药性，潜在危害人体健康，已成为临床上需要重点关注的抗菌药物类别之一。中华人民共和国国家标准GB31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中规定，牛/羊奶中的恩诺沙星与环丙沙星之和的限量值为100μg/kg，为其提供了判定依据；中华人民共和国农业部公告第2292号明确，认为洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂可能对养殖业、人体健康造成危害或者存在潜在风险，在食品动物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种兽药。目前测定奶制品中喹诺酮类药物残留的主要方法有：酶联免疫法、蛋白芯片法、液相色谱法、液质联用法、化学发光法、免疫层析法等。但这些方法存在定性、定量方面的不足，可能导致喹诺酮类药物残留测定结果不准确。
技术实现思路
为了改善上述技术问题，本专利技术提供一种奶制品中喹诺酮类化合物的检测方法及其应用。本专利技术提供的喹诺酮类化合物的检测方法，包括如下步骤：使用酸化乙腈对待测样品进行处理，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；所述上清液经萃取剂萃取，得到待测试液；利用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。根据本专利技术的实施方案，所述待测样品为奶制品，例如为牛奶、羊奶或其他奶源。又如，所述待测样品可以为液体奶制品、乳粉奶制品或固体奶制品(如奶片)等。根据本专利技术的实施方案，所述待测样品中含有喹诺酮类化合物。例如，所述喹诺酮类化合物可以选自诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星等中的一种、两种或更多种，优选为恩诺沙星和/或环丙沙星。根据本专利技术的实施方案，所述检测方法包括以下步骤：(1)样品前处理：向待测样品中加入酸化乙腈沉淀待测样品中的蛋白质，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；所述酸化乙腈为含有0.1～1％甲酸的乙腈溶液；(2)制备待测试液：将所述上清液与固相萃取剂混合，经涡旋、离心、氮吹后复溶，过滤，得到所述待测试液体；所述萃取剂为二乙烯苯与N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物、以及乙二胺-N-丙基硅烷的混合物；(3)采用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。根据本专利技术的实施方案，步骤(1)中，将待测样品与酸化乙腈涡旋混合，超声提取，而后离心，收集到含有喹诺酮类化合物的上清液。优选地，所述待测样品与酸化乙腈的体积比为1:(1～20)，例如1:(2～10)，示例性为1:4。优选地，所述涡旋混合的时间为30～120s，例如为60s。优选地，所述超声提取的时间为2～15min，例如5min。优选地，所述离心的条件为：4000～8000r/min离心5～10min，例如6000r/min离心5min。根据本专利技术的实施方案，步骤(2)中，二乙烯苯与N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物的质量和乙二胺-N-丙基硅烷的质量比为(1-3):1，例如为1.5:1。优选地，所述萃取剂与所述上清液的质量体积比为(15-35)mg:1mL，例如为25mg:1mL。根据本专利技术的实施方案，步骤(2)中，向所述上清液中加入萃取剂，涡旋混合，离心，吸取上清液用氮气吹扫至近干，用乙腈水溶液复溶干燥物，过滤，得到待测试液。优选地，所述涡旋混合的时间为30～120s，例如为60s。优选地，所述离心的条件为：4000～8000r/min离心5～10min，例如6000r/min离心5min。优选地，所述乙腈水溶液的浓度为5～20％，例如10％。优选地，所述过滤为过0.22μm的滤膜。根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述超高效液相色谱的测试条件包括：C18色谱柱，优选C18100mm×2.1mm，填料粒径为1.7μm；流动相：A-0.1％甲酸水溶液，B-0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱；优选地，梯度洗脱程序如下：0～0.5min，A保持90％，B保持10％；0.5～1.4min，A从90％下降到5％，B从10％升到95％；1.4～2.2min，A保持5％，B保持95％；2.2～2.3min，A从5％上升到90％，B从95％下降到10％；2.3～3min，A保持90％，B保持10％；流速：0.3～0.5mL/min，优选0.4mL/min；进样量：3～6μL，优选5μL；柱温：30～40℃，优选35℃。根据本专利技术的实施方案，步骤(3)中，所述三重四级杆/线性离子阱质谱的测试条件如下：离子源：电喷雾正(ESI+)；扫描模式：MS/MS/MS；喷雾电压：3800～4200V，优选4000V；温度：400～600℃，优选500℃；碰撞能量：25～35eV，优选30eV；去簇电压：60～100V，优选80V；激发能量：60～80V，优选70V；扫描速度：250～4000Da/s，优选4000Da/s。优选地，当所述喹诺酮类化合物为恩诺沙星或环丙沙星时，恩诺沙星、环丙沙星的离子信息见下表：根据本专利技术的实施方案，在进行所述超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱分析前，还包括喹诺酮类化合物的标准溶液的配制及标准曲线的绘制，优选包括如下步骤：取喹诺酮类化合物的标准品溶液，用空白样品提取液配制成5～7个浓度梯度点的标准溶液工作液；以三重四级杆/线性离子阱质谱得到的喹诺酮类化合物的次级子离子为定量离子，以浓度为横坐标，目标峰面积为纵坐标，拟合喹诺酮类化合物的标准曲线图。例如，喹诺酮类化合物的浓度梯度为2、10、20、50、100ng/mL。根据本专利技术的实施方案，步骤(3)包括：将高效液相色谱测试得到的样品的目标峰面积值与标准曲线进行比照，得出待测试液中喹诺酮类化合物的浓度，进而计算出待测样品中喹诺酮类化合物的含量。本专利技术中的“％”代表体积百分比。本专利技术还提供了上述检测方法的应用，用于检测奶制品中的喹诺酮类化合物。本专利技术的有益效果：1.本专利技术使用酸化乙腈对奶制品(例如牛奶)中的喹诺酮类化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种喹诺酮类化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：使用酸化乙腈对待测样品进行处理，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；所述上清液经萃取剂萃取，得到待测试液；利用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种喹诺酮类化合物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：使用酸化乙腈对待测样品进行处理，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；所述上清液经萃取剂萃取，得到待测试液；利用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品为奶制品，例如为牛奶、羊奶或其他奶源。又如，所述待测样品可以为液体奶制品、乳粉奶制品或固体奶制品。
优选地，所述待测样品中含有喹诺酮类化合物；所述喹诺酮类化合物选自诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星中的一种、两种或更多种，优选为恩诺沙星和/或环丙沙星。


3.根据权利要求1-2任一项所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品前处理：向待测样品中加入酸化乙腈沉淀待测样品中的蛋白质，收集含有喹诺酮类化合物的上清液；
所述酸化乙腈为含有0.1～1％甲酸的乙腈溶液；
(2)制备待测试液：将所述上清液与萃取剂混合，经涡旋、离心、氮吹后复溶，过滤，得到所述待测试液体；
所述固相萃取剂为二乙烯苯与N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物和乙二胺-N-丙基硅烷的混合物；
(3)采用超高效液相色谱串联三重四级杆/线性离子阱质谱对所述待测试液进行分析，实现对喹诺酮类化合物的定性和定量检测。


4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，将待测样品与酸化乙腈涡旋混合，超声提取，而后离心，收集到含有喹诺酮类化合物的上清液。
优选地，所述待测样品与酸化乙腈的体积比为1:(1～20)，例如1:(2～10)，示例性为1:4。
优选地，所述涡旋混合的时间为30～120s，例如为60s。
优选地，所述超声提取的时间为2～15min，例如5min。
优选地，所述离心的条件为：4000～8000r/min离心5～10min，例如6000r/min离心5min。


5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述二乙烯苯与N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物的质量之和和乙二胺-N-丙基硅烷的质量比为(1-3):1，例如为1.5:1。
优选地，所述萃取剂与所述上清液的质量体积比为(15-35)mg:1mL，例如为25mg:1mL。
优选地，步骤(2)中，向所述上清液中加入固相萃取剂，涡旋混合，离心，吸取上清液用氮气吹扫至近干，用乙腈水溶液复溶干燥物，过滤，得到待测试液。
优选地，所述涡旋混合的时间为30～120s，例如为60s。
优选地，所述离心的条件为：4000～80...

【专利技术属性】
技术研发人员：周鑫，项爱丽，张立田，段晓然，齐彪，康俊杰，闫艳华，李爱军，汤思凝，张谊，张晓利，葛凯，张宁，张贺凤，李艺，霍璐曼，侯蔷，李梁，张建雄，阴明杰，张丽芳，王溪，郭宇航，周丽娜，崔亚楠，雷舒涵，林田，庞学良，
申请(专利权)人：唐山市食品药品综合检验检测中心唐山市畜牧水产品质量监测中心，
类型：发明
国别省市：河北;13