一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，包括如下步骤：S1、标准溶液配制；S2、样品前处理；S3、实验结果与分析；方法样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱‑三重四极杆串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量。结果氟苯尼考和氟苯尼考胺在实验浓度范围内线性关系良好，检出限在0.05μg/kg～0.2μg/kg之间，加标回收率在96.5％～105％范围内，相对标准偏差(RSD)为3.8％～5.3％。结论该方法检测操作简便快捷，能够对蜂蜜中痕量的氟苯尼考和氟苯尼考胺进行准确的定性和定量分析。

【技术实现步骤摘要】
一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法
本专利技术属于生物检测领域，更具体地说，尤其涉及一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法。
技术介绍
蜂蜜是由花蜜或蜜露等经过蜜蜂酿造产生的，属于天然营养品，倍受人们喜爱。蜜蜂像其他有机生命体一样，容易受到细菌感染、病毒侵入等。某些蜜蜂疾病，例如育雏病，可以用抗生素治疗。但是，滥用抗生素(例如，用过量剂量治疗或用作生长促进剂过量剂量)可能会导致蜂蜜中抗生素的积累。加之其半衰期较长，更加容易造成残留和聚积，增加人对致病菌抗药性，氟苯尼考作为氯霉素类广谱抗菌药的一种新型药物，也是动物专用的抗生素类药物，具有广谱抑菌作用，且毒副作用明显降低。氟苯尼考在动物体内有多种代谢产物，其重要产物是氟苯尼考胺(FFA)。目前已有许多国家将氟苯尼考胺作为氟苯尼考的残留标示物。氟苯尼考的最高残留限量(MRLs)值规定是以氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺之和计算。目前检测氯霉素类药物残留的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、超高效液相色谱法、超高效液相色谱-质谱联用法和酶联免疫法等，但是固相萃取柱导致前处理繁琐，测试周期长等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，样品经过氨化乙酸乙酯提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量，结果氟苯尼考和氟苯尼考胺在实验浓度范围内线性关系良好，检出限在0.05μg/kg～0.2μg/kg之间，加标回收率在96.5％～105％范围内，相对标准偏差(RSD)为3.8％～5.3％。结论该方法检测操作简便快捷，而提出的一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，包括如下步骤：S1、标准溶液配制；S1.1、标准储备液：分别准确称取氟苯尼考、氟苯尼考胺和氯霉素-d5标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备溶液质量浓度均为1.0mg/mL，-20℃以下避光贮存，备用；S1.2、标准中间液：分别准确量取100μL氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL，内标标准中间液：准确量取100μL氯霉素-d5标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL；S1.3、标准使用液：准确吸取标准中间液100μL，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；内标标准使用液：准确吸取氯霉素-d5内标标准中间液100μLmL和20μL氟苯尼考胺-d3标准溶液，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；S1.4、标准系列：取6个1mL的容量瓶，分别加入2、10、20、50、100、200、500μL的标准使用液，再加入50μL内标标准使用液，空白基质定容至1mL，得到浓度分别为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准系列溶液；S2、样品前处理；S2.1、样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量；S2.2、样品处理：于50mL的离心管中称取2g左右蜂蜜样品；加入1mLH2O涡旋混匀，加入氯霉素-d5、氟苯尼考胺-d3应用液50μL，再加入1％氨化乙腈10mL，超声提取5min，于8000rpm下离心2min，上清液待净化；S2.3、样品净化：于15ml离心管中预先加入250mgC18固相萃取材料，加入2g无水Mg2SO4，加入7ml左右上清液，涡旋1min，于8000rpm下离心2min，取5ml上清液至另一离心管中，在40℃温度下用氮气吹干，用0.5ml10％的乙腈-水溶液复溶，过0.22μm滤膜后，用于LC-MS/MS分析；S3、实验结果与分析；S3.1、质谱条件优化，采用500ng/ml的氟苯尼考、氯霉素-d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺-d3的混合标准溶液分别在负离子和正离子的模式下进行一级质谱全扫描，确定母离子分别为336.0、326.0、247.8和251.0，分别对上述母离子进行二级质谱全扫描，通过优化确定氟苯尼考、氯霉素-d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺-d3的子离子及碰撞能和射频电压等参数；S3.2、分离条件优化，在串联质谱上进行正负离子采集模式切换时，采用0.01％氨水水溶液+乙腈组成的二元流动相体系，在此条件下，目标物在质谱上的响应值较高，两个组分的峰形和分离度较好。优选的，氟苯尼考、氟苯尼考胺及氯霉素-d5的纯度>99.0％。优选的，氟苯尼考胺-d3标准溶液，定值浓度5mg/L。优选的，样品前处理中离心时采用ST16R型高速低温离心机。优选的，样品前处理中液相色谱的条件为：WatersBEHC18柱、柱温：30℃、流速：0.35mL/min；进样体积：5μL。优选的，实验结果与分析中，离子源：ESI电喷雾离子源；离子源电压：3500V(ESI+)、2500(ESI-)；鞘气流速：40Arb；辅助气流速：15Arb；离子传输管温度：350℃；辅助气加热温度：300℃。本专利技术的技术效果和优点：本专利技术提供的一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，方法样品经过氨化乙酸乙酯提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量。结果氟苯尼考和氟苯尼考胺在实验浓度范围内线性关系良好，检出限在0.05μg/kg～0.2μg/kg之间，加标回收率在96.5％～105％范围内，相对标准偏差(RSD)为3.8％～5.3％。结论该方法检测操作简便快捷，能够对蜂蜜中痕量的氟苯尼考和氟苯尼考胺进行准确的定性和定量分析。附图说明图1标准离子流图；图2提前溶剂对回收率的影响示意图；图3超声提取时间对回收率的影响示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，包括如下步骤：S1、标准溶液配制；S1.1、标准储备液：分别准确称取氟苯尼考、氟苯尼考胺和氯霉素-d5标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备溶液质量浓度均为1.0mg/mL，-20℃以下避光贮存，备用，氟苯尼考、氟苯尼考胺及氯霉素-d5的纯度>99.0％；S1.2、标准中间液：分别准确量取100μL氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS1、标准溶液配制；/nS1.1、标准储备液：分别准确称取氟苯尼考、氟苯尼考胺和氯霉素-d5标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备溶液质量浓度均为1.0mg/mL，-20℃以下避光贮存，备用；/nS1.2、标准中间液：分别准确量取100μL氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL，内标标准中间液：准确量取100μL氯霉素-d5标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL；/nS1.3、标准使用液：准确吸取标准中间液100μL，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；内标标准使用液：准确吸取氯霉素-d5内标标准中间液100μLmL和20μL氟苯尼考胺-d3标准溶液，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；/nS1.4、标准系列：取6个1mL的容量瓶，分别加入2、10、20、50、100、200、500μL的标准使用液，再加入50μL内标标准使用液，空白基质定容至1mL，得到浓度分别为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准系列溶液；/nS2、样品前处理；/nS2.1、样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱-三重四极杆串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量；/nS2.2、样品处理：于50mL的离心管中称取2g左右蜂蜜样品；加入1mLH2O涡旋混匀，加入氯霉素-d5、氟苯尼考胺-d3应用液50μL，再加入1％氨化乙腈10mL，超声提取5min，于8000rpm下离心2min，上清液待净化；/nS2.3、样品净化：于15ml离心管中预先加入250mgC18固相萃取材料，加入2g无水Mg2SO4，加入7ml左右上清液，涡旋1min，于8000rpm下离心2min，取5ml上清液至另一离心管中，在40℃温度下用氮气吹干，用0.5ml10％的乙腈-水溶液复溶，过0.22μm滤膜后，用于LC-MS/MS分析；/nS3、实验结果与分析；/nS3.1、质谱条件优化，采用500ng/ml的氟苯尼考、氯霉素-d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺-d3的混合标准溶液分别在负离子和正离子的模式下进行一级质谱全扫描，确定母离子分别为336.0、326.0、247.8和251.0，分别对上述母离子进行二级质谱全扫描，通过优化确定氟苯尼考、氯霉素-d5、氟苯尼考胺和氟苯尼考胺-d3的子离子及碰撞能和射频电压等参数；/nS3.2、分离条件优化，在串联质谱上进行正负离子采集模式切换时，采用0.01％氨水水溶液+乙腈组成的二元流动相体系，在此条件下，目标物在质谱上的响应值较高，两个组分的峰形和分离度较好。/n...

【技术特征摘要】
20201120 CN 20201131256931.一种蜂蜜中氟苯尼考和氟苯尼考胺的快速检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、标准溶液配制；
S1.1、标准储备液：分别准确称取氟苯尼考、氟苯尼考胺和氯霉素-d5标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，标准储备溶液质量浓度均为1.0mg/mL，-20℃以下避光贮存，备用；
S1.2、标准中间液：分别准确量取100μL氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL，内标标准中间液：准确量取100μL氯霉素-d5标准储备液，用甲醇定容至10mL，标准中间液质量浓度为10μg/mL；
S1.3、标准使用液：准确吸取标准中间液100μL，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；内标标准使用液：准确吸取氯霉素-d5内标标准中间液100μLmL和20μL氟苯尼考胺-d3标准溶液，用10％乙腈-水溶液定容至10mL，标准使用液质量浓度为100ng/mL；
S1.4、标准系列：取6个1mL的容量瓶，分别加入2、10、20、50、100、200、500μL的标准使用液，再加入50μL内标标准使用液，空白基质定容至1mL，得到浓度分别为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准系列溶液；
S2、样品前处理；
S2.1、样品经过氨化乙腈提取，采用QuEChERs法进行样品净化，液相色谱-三重四极杆串联质谱同时测定蜂蜜中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量，内标法定量；
S2.2、样品处理：于50mL的离心管中称取2g左右蜂蜜样品；加入1mLH2O涡旋混匀，加入氯霉素-d5、氟苯尼考胺-d3应用液50μL，再加入1％氨化乙腈10mL，超声提取5min，于8000rpm下离心2min，上清液待净化；
S2.3、样品净化：于15ml离心管中预先加入250mgC18固相萃取材料，加入2g无水Mg2SO4，加入7ml左右上清...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢燕，王勤，王钟，高慧，李婷婷，于俊丽，王敏，
申请(专利权)人：淄博市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：山东;37