核酸序列检测用装置制造方法及图纸

在没有供给靶标(30)的情况下，通过保持经由与检测序列的一部分核酸序列互补的互补序列的从固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列的结合，使得通过接近于荧光分子(11)的消光分子(21)而使荧光分子(11)的荧光被消光。在供给了靶标(30)的情况下，所述靶标与检测序列结合并且使经由所述互补序列的结合被解除，消光分子(21)远离荧光分子(11)从而使荧光分子呈现荧光。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸序列检测用装置
本专利技术涉及一种利用杂交来检测包含在样本中的具有特定核酸序列的靶标的核酸序列检测用装置。
技术介绍
作为利用杂交来检测包含在样本中的具有特定核酸序列的靶标的核酸序列检测方法，报告了使用荧光探针和消光探针并简化了核酸检测步骤的核酸序列检测方法(专利文献1)。在专利文献1的方法中，当不存在靶标时，通过保持荧光探针与消光探针经由存在于荧光探针和消光探针中的结合部的结合，使得接近于荧光分子的消光分子的荧光被消光。另一者面，当存在靶标时，靶标与存在于荧光探针或消光探针中的检测部结合，经由所述结合部的结合被解除，消光分子远离荧光分子因而使荧光分子呈现荧光。通过测定该荧光，可以检测包含在样本中的靶标。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第5928906号公报
技术实现思路
本专利技术要解决的课题然而，在专利文献1的方法中，通过存在于荧光探针和消光探针上的一部分的具有彼此互补的核酸序列的结合部，使得附加有荧光分子的荧光探针与附加有消光分子的消光探针结合。因此，荧光探针与消光探针的结合力较弱，消光分子对荧光的抑制不能说是充分的，因而不存在靶标时的荧光，即偏移光倾向于变高。当偏移光变高时，在靶标为低浓度的情况下，难以辨别荧光的变化，检测灵敏度降低。另外，在专利文献1的方法中，需要适当地确定存在于荧光探针和消光探针上的一部分的具有彼此互补的核酸序列的所述结合部的核酸序列的长度。因此，当所述结合部的核酸序列过短时，荧光探针与消光探针无法经由所述结合部结合，从而荧光探针无法被消光探针消光。反之，当所述结合部的核酸序列过长时，荧光探针与消光探针经由所述结合部的结合过强，即使供给了靶标，荧光探针与消光探针也会保持结合而不会分离，从而无法检测样本中的靶标。因此，本专利技术的目的在于提供一种通过降低不存在靶标时的偏移光来使检测灵敏度优异，并且可以在不依赖于荧光探针与消光探针之间的结合部的长度的情况下检测靶标的核酸序列检测用装置。用于解决课题的手段为了实现上述目的，本专利技术采用了以下构成。[1]一种核酸序列检测用装置，其利用杂交来检测包含在样本中的具有特定核酸序列的靶标核酸序列检测用装置，具备：在预定位置处附带有荧光分子的荧光探针、在预定位置处附带有消光分子的消光探针、以及基板，其具有固定所述荧光探针和所述消光探针的各自基端的固相面，特征在于：所述荧光探针或所述消光探针中的一者具有包含与所述靶标的核酸序列互补的核酸序列的检测序列，所述荧光探针或所述消光探针中的另一者具有与所述检测序列的一部分核酸序列互补的核酸序列(以下也称为互补序列)，从所述互补序列的固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列与所述检测序列的一部分互补，具有所述检测序列的所述荧光探针或消光探针比具有所述互补序列的荧光探针或消光探针的核酸序列长，将所述荧光探针的基端和所述消光探针的基端固定在所述固相面上，使得位置关系成为通过接近于所述荧光分子的所述消光分子而使所述荧光分子呈现的荧光被消光。[2]根据[1]所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：在所述靶标与所述检测序列没有发生杂交的情况下，通过保持所述荧光探针与消光探针的结合，使得通过接近于所述荧光分子的所述消光分子而使所述荧光分子呈现的荧光被消光；在所述靶标与所述检测序列发生杂交的情况下，通过解除所述荧光探针与消光探针的结合，使得远离所述消光分子的所述荧光分子呈现荧光。[3]根据[1]或[2]所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：所述消光探针具有所述检测序列。[4]根据[1]～[3]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：所述基板为平板，所述固相面为所述平板的一个平面。[5]根据[1]～[3]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其中，所述基板为微珠，所述固相面为所述微珠的表面。[6]根据[1]～[5]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：所述消光探针的数量多于所述荧光探针的数量。[7]根据[1]～[5]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：所述荧光探针的数量多于所述消光探针的数量。[8]根据[1]～[7]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：所述消光分子的数量多于所述荧光分子的数量。[9]根据[8]所述的核酸序列检测用装置，其中，所述荧光分子的数量与所述消光分子的数量之比为2:3。[10]根据[1]～[9]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：附带有所述荧光分子的所述预定位置为所述荧光探针的中间。[11]根据[1]～[9]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：附带有所述消光分子的所述预定位置为所述消光探针的中间。[12]根据[1]～[11]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：具有多个附带有所述荧光分子的所述预定位置。[13]根据[1]～[11]中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：具有多个附带有所述消光分子的所述预定位置。[14]根据[12]所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：在多个所述预定位置处附带有种类不同的多个所述荧光分子。[15]根据[13]所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：在多个所述预定位置处附带有种类不同的多个所述消光分子。本专利技术的其他特征和实施方式可以通过参照附图并从以下所述的实施方式的详细说明中清楚地得知。本专利技术的效果根据本专利技术的核酸序列检测用装置，与通过存在于荧光探针和消光探针上的一部分的、彼此互补的结合部，来使附带有荧光分子的探针与附带有消光分子的消光探针结合的现有核酸序列检测用装置相比，由于通过从所述互补序列的固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列部分来使荧光探针与消光探针结合，因此消光效果优异，可以减少偏移光。由此，可以减小可检测的最小光量，并且能够提高检测灵敏度。另外，由于具有所述检测序列的所述荧光探针或消光探针比具有所述互补序列的所述荧光探针或消光探针的核酸序列长，因此与通过所述互补序列结合的荧光探针与消光探针之间的结合力相比，具有所述检测序列的荧光探针或消光探针与靶标之间的结合力更强。由此，具有检测序列的荧光探针或消光探针可与具有所述互补序列的荧光探针或消光探针解离并与靶标结合。另外，根据本专利技术的核酸序列检测用装置，与能否检测靶标是依赖于所述荧光探针与消光探针之间的结合部的核酸序列长度的现有核酸序列检测用装置相比，由于通过从所述互补序列的固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列部分来使荧光探针与消光探针结合，因此可以容易地设计出能够检测靶标的荧光探针与消光探针。另外，根据该核酸序列检测用装置，由于将作为相互独立的分子的荧光探针和消光探针的各自基端固定在基板上，因此可以适当地发挥消光效果，检测灵敏度变得良好，并且不需要标记步骤，也可以省略清洗步骤。由于不需要标记步骤、并且省略清洗步骤，可以进一步缩短杂交实验所需要的时间和精力，作业时间和成本都会降低本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸序列检测用装置，其是利用杂交来检测包含在样本中的具有特定核酸序列的靶标的核酸序列检测用装置，特征在于，具备：/n在预定位置处附带有荧光分子的荧光探针、/n在预定位置处附带有消光分子的消光探针、以及/n基板，其具有固定所述荧光探针和所述消光探针的各自基端的固相面，/n所述荧光探针或所述消光探针中的一者具有包含与所述靶标的核酸序列互补的核酸序列的检测序列，/n所述荧光探针或所述消光探针中的另一者具有与所述检测序列的一部分核酸序列互补的核酸序列(以下也称为互补序列)，从所述互补序列的固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列与所述检测序列的一部分互补，/n具有所述检测序列的所述荧光探针或消光探针比具有所述互补序列的所述荧光探针或消光探针的核酸序列长，/n将所述荧光探针的基端和所述消光探针的基端固定在所述固相面上，使得位置关系成为通过接近于所述荧光分子的所述消光分子而使所述荧光分子呈现的荧光被消光。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181109 JP 2018-2111881.一种核酸序列检测用装置，其是利用杂交来检测包含在样本中的具有特定核酸序列的靶标的核酸序列检测用装置，特征在于，具备：
在预定位置处附带有荧光分子的荧光探针、
在预定位置处附带有消光分子的消光探针、以及
基板，其具有固定所述荧光探针和所述消光探针的各自基端的固相面，
所述荧光探针或所述消光探针中的一者具有包含与所述靶标的核酸序列互补的核酸序列的检测序列，
所述荧光探针或所述消光探针中的另一者具有与所述检测序列的一部分核酸序列互补的核酸序列(以下也称为互补序列)，从所述互补序列的固相面一侧的基端到另一基端的核酸序列与所述检测序列的一部分互补，
具有所述检测序列的所述荧光探针或消光探针比具有所述互补序列的所述荧光探针或消光探针的核酸序列长，
将所述荧光探针的基端和所述消光探针的基端固定在所述固相面上，使得位置关系成为通过接近于所述荧光分子的所述消光分子而使所述荧光分子呈现的荧光被消光。


2.根据权利要求1所述的核酸序列检测用装置，其特征在于：
在所述靶标与所述检测序列没有发生杂交的情况下，通过保持所述荧光探针与消光探针的结合，使得通过接近于所述荧光分子的所述消光分子而使所述荧光分子呈现的荧光被消光；
在所述靶标与所述检测序列发生了杂交的情况下，通过解除所述荧光探针与消光探针的结合，使得远离所述消光分子的所述荧光分子呈现荧光。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的核酸序列检测用装置，其特征在于，所述消光探针具有所述检测序列。


4.根据权利要求1至权利要求3中任意1项所述的核酸序列检测用装置，其特征在于，所述基板为平板，所述固相面为所述平板的一个平面。

【专利技术属性】
技术研发人员：蓼沼崇，宫内祐树，田口朋之，
申请(专利权)人：横河电机株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP