Crbn基因在构建GSPT1敏感模型中的用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及

【技术实现步骤摘要】
Crbn基因在构建GSPT1敏感模型中的用途
本专利技术涉及生物
，特别是涉及Crbn基因在构建GSPT1敏感模型中的用途。
技术介绍
免疫调节药物(IMiDs)，包括沙利度胺(Thalidomide)，来那度胺(Lenalidomide)，和泊马度胺(Pomalidomide)等。Thalidomide最初于1957年上市，当时被人们称为“反应停”，用于治疗女性怀孕早期的呕吐。但由于它严重的致畸性，导致大量缺陷儿的出生，自1961年起，反应停被禁止作为孕妇止吐药物使用，但有关Thalidomide的研究工作并未停止，特别是它的抗肿瘤作用日益引起广泛关注。2006起，美国FDA陆续批准了IMiDs用于多发性骨髓瘤等疾病的临床治疗。2014年后，IMiDs的作用机制被解开，这类化合物能够增强泛素连接酶CRL4(CRBN)对血细胞生存依赖蛋白的泛素化降解，因此被形象地称之为分子胶水。随后一系列劫持CRBN的分子胶水被陆续开发，比较有代表性的是2016年，Celgene公司的研发团队在Nature上报导的一个新的IMiDs类化合物CC-885，能够促进CRL4(CRBN)对新的底物翻译终止因子GSPT1的泛素化降解而杀死多种血液瘤和实体瘤细胞。GSPT1，又名eRF3，当翻译遇到终止密码子时，eRF1-eRF3-GTP复合物会占据核糖体的Asite。GTP水解之后，eRF3和GDP从复合物上解离，而留在核糖体上的eRF1构象上发生了巨大的变化，最终核糖体两个亚基60s和40s发生解离，蛋白翻译终止。GSPT1是细胞生存必须的蛋白，当其缺失时，处于增殖状态的细胞会因为细胞内产生大量错误的蛋白而引发细胞内压力最终走向凋亡。目前已有GSPT1的降解剂进入临床实验。CC-885乃至其它GSPT1降解剂能否通过降解GSPT1而抑制肿瘤细胞的生长，进而成为抗肿瘤药物，值得深入研究。但目前尚缺乏研究CC-885等GSPT1降解剂的小鼠模型。IMiDs促进底物降解过程中，首先形成CRBN-IMiDs-CC-885三元复合物。小鼠与人的CRBN有97％以上的同源率，但在IMiDs结合区域有3个碱基不同，致使IMiDs不能促进小鼠野生型CRBN对底物的降解。这也是最初反应停在小鼠体内没有反应，而对人有强烈致畸作用的原因。研究IMiDs的毒副作用需要合适的人源化小鼠模型。CC-885在促进GSPT1的泛素化降解的过程中，形成了CRBN-CC885-GSPT1三元复合物，其中CRBN的E(谷氨酸)377位点是关键位点。实验表明将CRBN的E377位点突变成V(缬氨酸)，则CC-885不能引起GSPT1的泛素化降解。小鼠的Crbn对应于人的CRBNE377位点的氨基酸是V380，致使小鼠的Crbn不能对CC-885起反应，野生型小鼠是不能用来研究CC-885的毒副作用的。亟需一种小鼠模型来研究CC-885的毒性作用，进而探究GSPT1是否可以作为一个抗肿瘤药物的靶点。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供Crbn基因在构建GSPT1敏感模型中的用途，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术一方面提供Crbn基因在构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型中的用途。本专利技术另一方面提供一种GSPT1敏感细胞模型，所述GSPT1敏感细胞模型的Crbn基因包括V380E突变，所述GSPT1敏感细胞模型来源于小鼠。本专利技术另一方面提供上述GSPT1敏感细胞模型的构建方法，包括：在细胞中引入CrbnV380E突变以提供上述GSPT1敏感细胞模型，所述细胞来源于小鼠。本专利技术另一方面提供上述GSPT1敏感动物模型的构建方法，包括：在小鼠中引入CrbnV380E突变以提供上述GSPT1敏感动物模型。本专利技术另一方面提供一种筛选GSPT1降解剂的候选药物的方法，包括：将候选药物施用于上述的GSPT1敏感细胞模型、或由上述的GSPT1敏感动物模型的构建方法构建获得的GSPT1敏感动物模型。附图说明图1显示为本专利技术实施例1中CrbnV380E小鼠基因组测序结果示意图。图2显示为本专利技术实施例2、实施例3中的GSPT1表达和细胞杀伤结果示意图。图3显示为本专利技术实施例4中MiaPaCa2细胞和Panc1细胞的细胞活力示意图。图4显示为本专利技术实施例5中GSPT1降解示意图。图5显示为本专利技术实施例6中血压测量结果示意图。图6显示为本专利技术实施例7中注射CC-885后的生存曲线示意图。图7显示为本专利技术实施例8中剪切Caspase3表达结果示意图。具体实施方式为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容容易地了解本申请专利技术的其他优点及功效。本专利技术专利技术人经过大量实践研究，意外发现Crbn基因的突变可以用于构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型。构建获得的GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型对于GSPT1降解剂具有敏感性，从而可以被用于GSPT1降解剂的候选药物的筛选，在此基础上完成了本专利技术。本专利技术第一方面提供Crbn基因在构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型中的用途。GSPT1敏感通常指细胞或动物对于GSPT1降解剂具有敏感性。例如，在被施用GSPT1降解剂的情况下，细胞中或动物体内的GSPT1会被明显降解(例如，GSPT1的表达量被明显降低等)。再例如，在被施用GSPT1降解剂的情况下，细胞或动物体会出现明显的毒性作用(例如，细胞活力降低、动物血压降低、生存率降低、剪切caspase3表达量升高等)。上述用途中，GSPT1降解剂通常指可以降低GSPT1的表达和/或功能的物质。例如，GSPT1降解剂可以是降低GSPT1的表达和/或功能，也可为完全消除GSPT1的表达和/或其功能。对于本领域技术人员来说，应该可以知晓哪些物质能够作为GSPT1降解剂、或者有潜力能够作为GSPT1降解剂。例如，GSPT1降解剂通常可以与CRBN和GSPT1进行结合，形成CRBN-降解剂-GSPT1三元复合物，从而达到降低GSPT1的表达和/或功能的效果。再例如，GSPT1降解剂可以是免疫调节剂(IMiDs)等。在本专利技术一具体实施例中，GSPT1降解剂可以是CC-885(CAS1010100-07-8)等。本专利技术所提供的用途中，Crbn基因所编码的多肽片段通常可以是：a)编码氨基酸序列包括SEQIDNO.1所示序列的蛋白；或，b)编码氨基酸序列与SEQIDNO.1所示的序列具有80％以上序列一致性、且具有a)所限定的蛋白的功能的蛋白。具体的，上述b)中的蛋白具体指：氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Crbn基因在构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.Crbn基因在构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型中的用途。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，Crbn基因V380E突变在构建GSPT1敏感细胞模型或GSPT1敏感动物模型中的用途。


3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述细胞模型和/或动物模型来源于小鼠。


4.一种GSPT1敏感细胞模型，所述GSPT1敏感细胞模型的Crbn基因包括V380E突变，所述GSPT1敏感细胞模型来源于小鼠。


5.如权利要求1所述的GSPT1敏感细胞模型，其特征在于，所述GSPT1敏感细胞模型来源于小鼠内脏细胞、小鼠脾脏细胞、小鼠肝脏细胞、小鼠胚胎成纤维细胞中的一种或多种的组合；
和/或，所述GSPT1敏感细胞模型来源于人源化小鼠。


6.如权利要求4～5任一权利要求所述的GSPT1敏感细胞模型的构建方法，包括：
在细胞中引入CrbnV380E突变以提供上述GSPT1敏感细胞模型，所述细胞来源于小鼠。


7.如权利要求6所述的GSPT1敏感细胞模型的构建方法，其特征在于，在细胞中引入CrbnV...

【专利技术属性】
技术研发人员：仓勇，彭博，浦逸晟，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：上海;31