斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种对虾E3泛素连接酶TRIM50‑like蛋白及其编码的基因。本发明专利技术还公开了含有上述基因的表达载体、重组蛋白以及与对虾E3泛素连接酶TRIM50‑like蛋白特异性结合的抗体。本发明专利技术还进一步公开了上述蛋白或重组蛋白在制备对虾抗病毒药物或增强虾类免疫力药物方面的应用，以及作为体外泛素化检测的标准E3泛素连接酶、构建体外泛素化检测体系或者试剂盒以及用于鉴定和筛选斑节对虾体内参与抗病毒过程的E1泛素酶或E2泛素酶方面的用途。

【技术实现步骤摘要】
斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白以及该蛋白在对虾抗病毒感染和体外泛素化检测中的应用。
技术介绍
蛋白质翻译后修饰，如磷酸化、乙酰化和泛素化，是一个重要的生物过程，调控许多细胞内信号。泛素化是一种能调节DNA修复、分化和免疫应答等细胞过程的翻译后修饰方式之一。泛素化是将一种高度保守的76个氨基酸分子，泛素分子，以共价方式连接到到底物蛋白上。泛素化的过程需要三种酶，E1泛素激活酶、E2泛素结合酶和E3泛素连接酶来分别完成活化、结合和连接。TRIM蛋白家族(tripartitemotiffamilyproteins)是一类E3泛素连接酶，它们在调节先天免疫信号通路中发挥重要的作用。在人体中，超过一半的TRIM蛋白具有抗病毒作用。TRIM蛋白主要通过以下三种方式来发挥抗病毒作用：(1)直接和病毒组分，例如病毒囊膜蛋白或病毒基因组DNA结合；(2)调节细胞炎症因子、干扰素等的表达来发挥抗病毒作用；(3)调节其他重要的细胞内在防御途径，如细胞自噬，来发挥抗病毒作用。斑节对虾是世界三大养殖虾类之一，具有重要的经济价值。然而，随着集约化养殖的快速发展和海洋生态环境的严重污染，疾病的爆发对对虾养殖业构成了严重威胁，这严重地限制了对虾养殖的健康发展。对虾白斑综合征病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV)是虾类中毒性最强的病原体之一，给对虾养殖产业造成了巨大的经济损失。至今，白斑综合征病毒仍是对虾养殖业的头号威胁。对虾自身先天免疫系统对于抵御病菌感染发挥重要的作用，在受到病毒侵染时，对虾会启动自身的某些抗病毒机制，产生抗病毒因子，对抗病毒的入侵。因此，了解对虾抵御病毒入侵的分子免疫机制对于如何防治病毒感染具有重要意义。虽然过去对对虾感染WSSV的免疫应答和抵抗WSSV感染的分子机制的研究已经取得了很大进展。但是目前对于WSSV病害的爆发尚无有效的防治措施和治疗方法。寻找对虾自身的抗病毒效应因子并且加以利用使抗病毒药物研发的重要手段之一。从对虾自身免疫系统出发，找到对虾体内具有高效抗病毒作用的关键因子，并了解其调节抗病毒的分子免疫机制对于控制WSSV的爆发具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白及其编码的基因。本专利技术的目的还在于提供上述含有上述斑节对虾TRIM50-like基因的表达载体、重组蛋白以及与斑节对虾TRIM50-like蛋白特异性结合的抗体。本专利技术的最后一个目的在于提供上述斑节对虾TRIM50-like蛋白或重组TRIM50-like蛋白在制备对虾抗病毒药物或增强虾类免疫力药物方面的应用，以及作为体外泛素化检测的标准E3泛素连接酶、构建体外泛素化检测体系或者试剂盒以及用于鉴定和筛选斑节对虾体内参与抗病毒过程的E1泛素酶或E2泛素酶方面的用途。本专利技术的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了编码所述蛋白的基因，所述基因的开放阅读框的核苷酸序列如SEQIDNO.2。申请人通过对斑节对虾的研究发现，其体内存在一种活性蛋白(TRIM50-like蛋白)，能直接和WSSV病毒组分结合，并能将病毒组分泛素化，显著抑制对虾体内WSSV的复制，提高对虾感染WSSV后的存活率。且经过比对，其基因序列及编码的蛋白在虾蟹等动物抗病毒感染或治疗中的应用未见报道。本专利技术所述斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白还可以通过提取斑节对虾的总RNA，逆转录成cDNA，根据本专利技术提供SEQIDNO.2(TRIM50-like开放阅读框序列)设计PCR引物，利用基因克隆的常规方法获得核酸序列，然后利用基因工程手段进行原核或者真核重组表达系统获得蛋白，见实施例1。本专利技术的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：一种表达载体，含有上述基因。本专利技术还提供了一种重组蛋白，包括用上述的表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组蛋白的步骤的方法制备。本专利技术还提供了一种与斑节对虾TRIM50-like蛋白特异性结合的抗体，采用上述重组蛋白经动物免疫后制取所得。本专利技术提供的与上述斑节对虾TRIM50-like蛋白特异性结合的抗体为重组TRIM50-like蛋白经动物免疫后制取所得，见实施例2。该抗体可以用来检测斑节对虾体内的内源性TRIM50-like蛋白，或者分离纯化斑节对虾体内TRIM50-like蛋白。本专利技术的上述第三个目的可以通过以下技术方案来实现：上述蛋白或上述重组蛋白在制备具有对虾抗病毒效果的药物或具有增强虾类免疫力效果的药物方面的用途以及作为体外泛素化检测的标准E3泛素连接酶，构建体外泛素化检测体系或者试剂盒以及用于鉴定和筛选斑节对虾体内参与抗病毒过程的E1泛素酶或E2泛素酶方面的用途。优选的，所述病毒为对虾白斑综合症病毒。利用基因工程的手段将本专利技术所述的斑节对虾TRIM50-like蛋白在原核系统中表达，并进一步亲和纯化后制备的具有生物活性的纯化蛋白产物进行体外蛋白互作和泛素化检测表明：本专利技术所述的具有抗病毒功能的斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白能靶向识别、结合WSSV病毒囊膜蛋白VP24、VP26和VP28，并对上述蛋白进行泛素化标记，见实施例3。说明本专利技术提供的具有抗病毒功能的斑节对虾TRIM50-like蛋白有望开发成为新型抗病毒药物，同时根据其具有的E3泛素连接酶活性，可以用来作为标准E3泛素连接酶来鉴定和筛选斑节对虾体内参与抗病毒过程的E1，E2等泛素酶，或者以E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白为基准构建体外泛素化检测试剂盒。优选的，本专利技术所述药物通过体内注射法、口服或外用的方式给药，药物剂型为体内注射剂型、体内过表达剂型、微囊化控释剂型、饲料添加剂或利用药用载体制成体内或体外制剂。进一步的，本专利技术所述具有抗病毒功能的斑节对虾TRIM50-like蛋白应用的方法途径优选是：(1)将该蛋白体内注射、外用、口服、与添加剂共同投喂或者利用药物载体制备成体内或者体外给药的制剂；(2)以该蛋白作为体外泛素化检测的标准E3泛素连接酶，构建体外泛素化检测体系或者试剂盒，用于筛选斑节对虾体内的E1或者E2等泛素相关酶类。作为本专利技术的一种优选的实施方式，本专利技术提供的具有抗病毒功能的斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白cDNA的用途，提供一种含有上述具有抗病毒功能的对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白cDNA的表达载体。该载体能作为模板体外逆转录合成TRIM50-like蛋白的过表达mRNA，上述过表达mRNA在对虾体内能显著抑制WSSV的复制，提高对虾感染WSSV后的存活率，可以开发成新型抗病毒药物。作为本专利技术的另外一种优选的实施方式，基于编码斑节对虾本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.编码权利要求1所述蛋白的基因，其特征是：所述基因的开放阅读框的核苷酸序列如SEQIDNO.2。


3.一种表达载体，其特征是：含有权利要求2中所述基因。


4.一种重组蛋白，其特征是：包括用权利要求3所述的表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组蛋白的步骤的方法制备。


5.一种与斑节对虾E3泛素连接酶TRIM50-like蛋白特异性结合的抗体，其特征是：采用权利要求4所述重组蛋白经动物免疫后制取所得。


...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵超，邱丽华，王鹏飞，闫路路，范嗣刚，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院南海水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44