一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母制造技术

本发明专利技术涉及利用微生物进行发酵食品生产的领域，具体涉及一株从四川传统家庭自制腊肉中分离筛选出的能够高产3‑甲基丁醇的汉逊德巴利酵母菌。能够高产3‑甲基丁醇的汉逊德巴利酵母(

【技术实现步骤摘要】
一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母
本专利技术涉及利用微生物进行发酵食品生产的领域，具体涉及一株从四川传统家庭自制腊肉中分离筛选出的能够高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母菌。
技术介绍
以香肠和腊肉为代表的中式传统肉制品因其特殊的风味极受消费市场的欢迎，目前国内相关的中小型生产企业众多且产量巨大。然而，与农家自制产品相比，工厂化产品生产时间缩短，生产工艺也有微调，如替代盐和亚硝酸盐的使用、成熟温度升高，从而导致产品特征香味和风格被弱化，消费者接受度降低。采用人工发酵剂应用于工业化生产是改善产品风味、质构、色泽、安全最有效的策略，乳酸菌和凝固酶阴性葡萄球菌是最常用的人工发酵剂。乳酸菌能快速降低肉基质pH值，确保后续一系列生化反应正常进行和产品的微生物安全；凝固酶阴性葡萄球菌则在蛋白质水解、脂肪分解和颜色形成等重要生化反应中发挥作用。除了以上两类微生物，酵母菌在肉制品成熟过程中也扮演着重要的角色。研究发现肉制品中酵母菌展现了广泛的胞外脂肪酶和蛋白酶活性，可促进肉中脂肪和蛋白质降解，其初级和次生代谢产物有助于产品特征香气和味道的形成。酵母菌可以减少肉制品中脂肪氧化相关醛类的积累，代谢支链氨基酸促进香气成分如支链醛/醇和乙基酯的形成。近年来，国外研究者对酵母菌在西式传统肉制品中的多样性，对风味、质构及产品可接受度影响等方面进行了广泛的研究，目前意大利、西班牙、土耳其等欧洲国家已普遍将汉逊德巴利酵母作为肉品发酵剂用于改良工厂化肉制品品质。然而中国传统肉制品相关研究却很少，还没有适用于本地肉制品生产的优良酵母菌株。因此，有必要从本地传统肉制品中筛选获得优良的产香酵母菌用于中式传统肉制品的工业化生产。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术目的在于提供一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)LY090。本专利技术所提供的菌株为汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)，菌株号LY090，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏号为CGMCCNO.21374，保藏日期为2020年12月14日。本专利技术提供高产3-甲基丁醇酵母菌株的分离、筛选、鉴定。准确称取搅碎四川腊肉样品25g，与225mL无菌水混合于无菌均质袋中匀浆，取1mL匀浆用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释，取适宜稀释度样液100mL涂布于含氯霉素的PDA培养基平板，28℃培养3~5d。挑取具有酵母菌典型菌落特征的菌落进行多次平板划线纯化，保存备用。将上述获得的酵母菌进行环境耐受性及胞外脂肪酶和蛋白酶活性的筛选，取斜面菌种一环接入5mL的YPD液体培养基中，于28℃培养3d，将菌液于8000r/min、4℃离心10min，弃去上清液，收集菌体，用无菌水洗涤离心3次并重悬，调整菌体浓度为1.0×108CFU/mL。将上述菌悬液按1%(v/v)接种于YPD液体培养基试管中，随后在15、30和37℃培养3d，以不接种为对照，用目测法测定酵母的生长情况。同理，分别准备pH为1.5、3.0和4.5的YPD液体培养基试管（用3mol/LHCl调节），NaCl浓度为5%、10%和15%的YPD液体培养基试管和NaNO2浓度分别为50、100和150mg/kg的YPD液体培养基试管，将前述菌悬液按1%(v/v)接种于以上各类YPD液体培养基试管中，在28℃培养3d，以不接种为对照，用目测法测定酵母的生长情况。取上述菌悬液10μL以点种法点接在蛋白酶和脂肪酶检测平板上，25℃培养7d，脂肪酶检测平板直接观察菌落周围透明圈的大小和清晰度，蛋白酶检测平板先滴加10%三氯乙酸后再观察，用游标卡尺记录下透明圈和菌落大小。将上述筛选后的酵母菌进行产香模拟发酵试验。模拟肉汤培养基分装于50mL三角瓶，每瓶20mL，将上述菌悬液按1%(v/v)接种于三角瓶，120r/min，25℃摇床培养5d，发酵液用GC-MS检测。所述GC-MS检测方法为：取4mL发酵液置于20mL顶空瓶中，加入1gNaCl，将老化后的萃取头（75um，CAR/PDMS，Supelco）插入样品瓶顶空部分，于50℃吸附30min，吸附后的萃取头取出插入气相色谱进样口，于250℃解吸3min。程序升温条件：柱初温40℃，维持3min，然后以4℃/min的速率升温至80℃，保持1min，以5℃/min升到150℃，保持2min，再以10℃/min的升温速率升至230℃，保持1min。毛细管柱DB-WAX(30m×0.25mm×0.25um)，以氦气做载气，流速为1mL/min。电离方式为El，电子能量70ev，离子源温度230℃，接口温度为280℃，四级杆温度150℃，扫描范围：30~550m/z。各风味组分的表示方法：各组分经谱库检索确定，仅选择匹配度大于80%的组分，相对含量以峰面积占检出气体总峰面积百分比表示。菌株形态鉴定：肉眼观察菌落形态为圆形，凸起，边缘整齐，表面湿润的乳白色菌落。与光学显微镜下观察菌株细胞特征，其细胞呈球状，多边出芽生殖，未观察到假菌丝。对照《酵母菌的特征与鉴定手册》进行生理生化鉴定，能够发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖和棉子糖，可以同化蛋白胨和硝酸钾，不能同化尿素，脲酶试验为阴性。初步判定菌株LY090为汉逊德巴利酵母。菌株LY090分子遗传学鉴定。菌株LY090经26SrDNA序列测定，获得如下序列：GAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCTTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGCACCTTCGGTGTCCGAGTTGTAATTTGAAGAAGGTAACTTTGGAGTTGGCTCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCACAGAGGGTGAGAATCCCGTGCGATGAGATGCCCAATTCTATGTAAAGTGCTTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCTTGAGATCAGACTTGGTATTTTGCGATCCTTTCCTTCTTGGTTGGGTTCCTCGCAGCTTACTGGGCCAGCATCGGTTTGGATGGTAGGATAATGACTAAGGAATGTGGCTCTACTTCGGTGGAGTGTTATAGCCTTGGTTGATACTGCCTGTCTAGACCGAGGACTGCGTCTTTTGACTAGGATGTTGGCATAATGATCTTAAGCCACCCGTCTT该菌株的26SrDNA基因测序结果与GenBank数据库中序列进行Blast同源性对比，该菌株序列与Debaryomyceshansenii菌株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母(

【技术特征摘要】
1.一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)LY090，其特征在于保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地点为北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏号为CGMCCNO.21374，保藏日期为2020年12月14日。


2.根据权利要求1所述汉逊德巴利酵母(D...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘书亮，王松，李建龙，杨勇，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51