一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体及其制备方法与应用，属于生物技术领域。溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体的制备方法，包括：(1)将LeuO基因插入pET‑32a表达载体中，构建重组质粒；LeuO基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；(2)制备单克隆菌株；(3)制备LeuO蛋白；(4)以LeuO蛋白为抗原进行动物免疫，收集抗血清并纯化，得到LeuO多克隆抗体。本发明专利技术首次表达获得了溶藻弧菌转录因子LeuO抗原并制备得到相应的LeuO多克隆抗体，效价高、亲和力强、特异性好，可以为溶藻弧菌LeuO相关的致病机理研究提供检测与验证的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，特别涉及一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)广泛分布于世界各地海水及河口处，其数量居海水类弧菌之首。溶藻弧菌存在于多种海洋动物体表及体内，是鱼、虾、贝等海水养殖动物的条件致病菌，在我国南方沿海，溶藻弧菌是海水养殖业最常见的致病菌之一。同时，溶藻弧菌也是人的致病菌，由溶藻弧菌引起的食物中毒、伤口感染、菌血症、感染性休克和多器官衰竭等病例在我国和世界各地都屡有报道。鉴于溶藻弧菌对海水养殖业的巨大危害，其致病机理受到广泛关注。溶藻弧菌对宿主致病性主要取决于宿主、宿主所在的环境、致病菌三者之间的关系，致病过程包括粘附、侵袭、免疫逃逸、体内增殖及产生毒素等一系列过程，致病作用主要是通过在其侵袭和增殖过程中对机体造成的细胞和组织损伤以及其代谢产物(毒素)干扰和破坏机体的局部或全身的正常新陈代谢或机能而造成的。其中，肝、肾、脾是溶藻弧菌引发鱼类病害的主要病灶。r>专利技术人所在课本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)将LeuO基因插入pET-32a表达载体中，构建重组质粒；其中：LeuO基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；/n(2)将步骤(1)构建好的重组质粒转化感受态细胞，然后经诱导培养，得到单克隆菌株；/n(3)将步骤(2)得到的单克隆菌株进行诱导培养、离心、裂解、洗脱，得到LeuO蛋白；/n(4)以步骤(3)制备得到的LeuO蛋白为抗原进行动物免疫，收集抗血清并纯化，得到LeuO多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种溶藻弧菌转录因子LeuO多克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将LeuO基因插入pET-32a表达载体中，构建重组质粒；其中：LeuO基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；
(2)将步骤(1)构建好的重组质粒转化感受态细胞，然后经诱导培养，得到单克隆菌株；
(3)将步骤(2)得到的单克隆菌株进行诱导培养、离心、裂解、洗脱，得到LeuO蛋白；
(4)以步骤(3)制备得到的LeuO蛋白为抗原进行动物免疫，收集抗血清并纯化，得到LeuO多克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的动物免疫包括如下步骤：
S1.初次免疫
将LeuO蛋白与弗氏完全佐剂混合，充分乳化后对试验动物进行背部多点免疫注射，其中，LeuO蛋白与弗氏完全佐剂混合后，LeuO蛋白的浓度为0.8-1.2μg/μL；LeuO蛋白的注射量为45-55μg/kg试验动物；
S2.第一次加强免疫
初次免疫28天后进行第一次加强免疫，将LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合，充分乳化后对试验动物进行背部多点免疫注射，其中，LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合后，LeuO蛋白的浓度为0.8-1.2μg/μL，LeuO蛋白的注射量为60-70μg/kg试验动物；
S3.第二次加强免疫
第一次加强免疫14天后进行第二次加强免疫，将LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合，充分乳化后对试验动物进行背部多点免疫注射，其中，LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合后，LeuO蛋白的浓度为0.8-1.2μg/μL，LeuO蛋白的注射量为60-70μg/kg试验动物；
S4.第三次加强免疫
第二次加强免疫5天后进行第三次加强免疫，将LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合，充分乳化后对试验动物进行背部多点免疫注射，其中，LeuO蛋白与弗氏不完全佐剂混合后，LeuO蛋白的浓度为0.8-1.2μg/μL，LeuO蛋白的注射量为60-70μg/kg试验动...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄力行，左妍斐，鄢庆枇，徐晓津，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35