一种胶体金标记溶液组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胶体金标记溶液组合物及其应用，以pH＝8.0

【技术实现步骤摘要】
一种胶体金标记溶液组合物及其应用


[0001]本专利技术属于病原生物检测试剂
，具体涉及一种胶体金标记溶液组合物及其应用。

技术介绍

[0002]免疫检测基于抗原抗体特异性结合的免疫学原理，常用的方法主要有免疫层析检测、ELISA检测或化学发光法检测。胶体金试纸条就属于免疫层析检测，这种检测方法具有方便快捷、价格低廉、运用范围广、产量高等优点，但是同时也有灵敏度偏低的不足之处。有时会出现漏检误检，以检测冠状病毒为例，目前市售的胶体金检测产品普遍具有灵敏度较低，有漏检的风险。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种胶体金标记溶液组合物。
[0004]本专利技术的另一目的在于提供上述胶体金标记溶液组合物的应用。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种胶体金标记溶液组合物，以pH＝8.0
‑
9.5的缓冲液为溶剂，其中含有标记有可与待测蛋白发生免疫反应的抗体的胶体金颗粒、羟丙基甲基纤维素和非离子型表面活性剂，其中，羟丙基甲基纤维素在所述胶体金标记溶液组合物中的质量体积百分浓度为0.03
‑
0.05％。
[0007]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述非离子型表面活性剂为吐温20、吐温40、Pluronic F
‑
127、Triton X
‑
405或Triton X
‑
100。
[0008]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述非离子型表面活性剂在所述胶体金标记溶液组合物中的质量体积百分浓度为0.8
‑
1.2％。
[0009]在本专利技术的一个优选实施方案中，还含有惰性蛋白。
[0010]进一步优选的，所述惰性蛋白为BSA。
[0011]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述缓冲液为Tris
‑
HCl缓冲液、磷酸缓冲液或硼酸缓冲液。
[0012]进一步优选的，所述缓冲液的浓度为10
‑
50mM。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述胶体金颗粒的粒径为30
‑
80nm。
[0014]本专利技术的另一技术方案如下：
[0015]一种胶体金标记物结合垫，通过将上述胶体金标记溶液组合物滴加至基膜上，经干燥而制成。
[0016]在本专利技术的一个优选实施方案中，所述基膜为玻璃纤维膜或硝酸纤维素膜。
[0017]本专利技术的有益效果是：本专利技术的胶体金标记溶液组合物能够显著增强胶体金试纸条的灵敏度，如标记的冠状病毒N蛋白抗体与样本中的N蛋白质控品发生反应，实现检测冠状病毒的更高灵敏度。
具体实施方式
[0018]以下通过具体实施方式对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。
[0019]实施例1
[0020]本实施例中的标记过程分成四组：
[0021]第一组为传统标准标记胶体金流程：将可与冠状病毒N蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1wt％BSA，9000r/min离心5min，弃上清后用150mM NaCl，25mM Tris
‑
HCl，pH 9.0缓冲液溶解胶体金沉淀，将再溶解得到的胶体金溶液滴加至玻璃纤维素膜并干燥，得到标记物结合垫；
[0022]第二组为加入粘稠剂的标记胶体金流程：将可与冠状病毒N蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1wt％BSA，9000r/min离心5min，弃上清后用150mM NaCl，25mM Tris
‑
HCl，pH 9.0缓冲液溶解胶体金沉淀，再加入0.04(w/v)％HPMC溶解混匀，将得到的胶体金溶液滴加至玻璃纤维素膜并干燥，得到标记物结合垫；
[0023]第三组为加入非离子表面活性剂的标记胶体金流程：将可与冠状病毒N蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1wt％BSA，9000r/min离心5min，弃上清后用150mM NaCl，25mM Tris
‑
HCl，pH 9.0缓冲液溶解胶体金沉淀，再加入1％tween 20溶解混匀，将得到的胶体金溶液滴加至玻璃纤维素膜并干燥，得到标记物结合垫；
[0024]第四组为本专利技术的标记胶体金流程：将可与冠状病毒N蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1wt％BSA，9000r/min离心5min，弃上清后用150mM NaCl，25mM Tris
‑
HCl，pH 9.0缓冲液溶解胶体金沉淀，再加入0.04(w/v)％HPMC、1(w/v)％tween 20溶解混匀，获得本专利技术的胶体金标记溶液组合物，将该胶体金标记溶液组合物滴加至玻璃纤维素膜并干燥，得到标记物结合垫。
[0025]为探究本专利技术的胶体金标记溶液组合物中添加HPMC和tween 20对灵敏度的影响，对添加与否进行了比较。待干燥后组装形成免疫层析装置，检测时将经梯度稀释的冠状病毒N蛋白质控品滴加至第一组至第四组制得的标记物结合垫上，记录胶体金色卡读值，数值越大，即显色越强，说明灵敏度越高。具体结果如表1所示，本专利技术的胶体金标记溶液组合物显著提高了检测灵敏度。
[0026]表1、实施例1的检测结果
[0027]质控品1μg/mL100ng/mL10ng/mL1ng/mL0.1ng/mL0.01ng/mL第一组L9L8L7L5
‑
L6L2L0第二组L9L8L7
‑
L8L6
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L7L3
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L4L0第三组L9L8L7
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L8L6L3L0第四组L9L8
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L9L8L7L4L0
‑
L1
[0028]实施例2
[0029]本实施例中的标记过程分成四组：
[0030]第一组为传统标准标记胶体金流程：将可与冠状病毒S蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1％BSA9000r/min离心5min，弃上清后用150mM NaCl，25mM Tris
‑
HCl，pH 9.0缓冲液溶解胶体
金沉淀，将再溶解得到的胶体金溶液滴加至玻璃纤维素膜并干燥，得到标记物结合垫；
[0031]第二组为加入粘稠剂的标记胶体金流程：将可与冠状病毒S蛋白发生抗原抗体反应的抗体蛋白稀释成10μg/mL后标记于粒径为30
‑
80nm的胶体金颗粒上，标记后加入1％BSA 9000r/min本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶体金标记溶液组合物，其特征在于：以pH＝8.0
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9.5的缓冲液为溶剂，其中含有标记有可与待测蛋白发生免疫反应的抗体的胶体金颗粒、羟丙基甲基纤维素和非离子型表面活性剂，其中，羟丙基甲基纤维素在所述胶体金标记溶液组合物中的质量体积百分浓度为0.03
‑
0.05％。2.如权利要求1所述的一种胶体金标记溶液组合物，其特征在于：所述非离子型表面活性剂为吐温20、吐温40、Pluronic F
‑
127、Triton X
‑
405或Triton X
‑
100。3.如权利要求1所述的一种胶体金标记溶液组合物，其特征在于：所述非离子型表面活性剂在所述胶体金标记溶液组合物中的质量体积百分浓度为0.8
‑
1.2％。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘一楠，李智彪，
申请(专利权)人：英科新创厦门科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：