抗-L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段及包含其的嵌合抗原受体制造技术

本发明专利技术涉及与L1细胞粘附分子(L1CAM)抗原特异性结合的抗

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Activity against Human Ovarian Cancer in Mice.(2016).PLoS ONE 11(1):e0146885

技术实现思路

[0010]技术问题
[0011]本专利技术人为了研发与L1细胞粘附分子结合的抗体或其抗原结合片段以及包含其的嵌合抗原受体而进行深入研究。结果，所研发的抗
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L1细胞粘附分子抗体与人及小鼠L1细胞粘附分子抗原分子非常特异性结合，究明了包含其的嵌合抗原受体及表达嵌合抗原受体的T细胞对于SKOV3卵巢癌细胞株、SH
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SY5Y神经母细胞瘤细胞株及Hela宫颈癌细胞株示出高抗癌活性，从而完成了本专利技术。
[0012]因此，本专利技术的目的在于，提供与L1细胞粘附分子抗原特异性结合的抗
‑
L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段。
[0013]本专利技术的再一目的在于，提供包含抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体及表达其的效应细胞。
[0014]本专利技术的另一目的在于，提供包含上述抗
‑
L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段或表达上述嵌合抗原受体的效应细胞的药剂学组合物。
[0015]本专利技术的还有一目的在于，提供向对象体给药表达上述嵌合抗原受体的效应细胞的与L1细胞粘附分子的高表达相关的疾病的治疗方法。
[0016]技术方案
[0017]在本说明书中，本专利技术一实施方式的抗体为与L1细胞粘附分子特异性结合的抗体及经过亲和力成熟的它们的修饰抗体。
[0018]与现有的抗
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L1细胞粘附分子抗体相同地，本专利技术的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段具有对于L1细胞粘附分子抗原的特异性结合能力。
[0019]在本说明书中，术语“抗体(antibody)”为对于L1细胞粘附分子抗原的特异性抗体，不仅包含完整的抗体形态，还包含抗体分子的抗原结合片段(antigen binding fragment)。
[0020]完整的抗体为具有两个全长轻链(light chain)及两个全长重链(heavy chain)的结构，各个轻链通过二硫键(disulfided bond)与重链相连接。术语“重链”是指以其天然发生立体形态存在于抗体分子且通常确定抗体所属类别的两种多肽链的较大的链。上述“重链”是指包括抗体的重链可变区(variable region of heavy chain，VH)及3个重链恒定区(constant region of heavy chain)CH1、CH2及CH3在内的全长重链及其片段，上述抗体的重链可变区及3个重链恒定区CH1、CH2及CH3包含具有向抗原赋予特异性的足够的可变区序列的氨基酸序列。重链恒定区具有γ、μ、α、δ及ε类型，具有γ1、γ2、γ3、γ4、α1及α2作为子类。
[0021]术语“轻链”是指一其天然发生立体形态存在于抗体分子的两种多肽链的较小的链。上述“轻链”是指包括抗体的轻链可变区(variable region of light chain，VL)及轻链恒定区(constant region of light chain，CL)在内的全长轻链及其片段，上述抗体的轻链可变区及轻链恒定区包含具有向抗原赋予特异性的足够的可变区序列的氨基酸序列。轻链恒定区具有κ及λ类型(Cellular and Molecular Immunology,Wonsiewicz,M.J.,Ed.,Chapter 45,pp.41
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50,W.B.Saunders Co.Philadelphia,PA(1991)；Nisonoff,A.,
Introduction to Molecular Immunology,2nd Ed.,Chapter 4,pp.45
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65,sinauer Associates,Inc.,Sunderland,MA(1984))。
[0022]术语“抗原(antigen或Ag)”是指诱发免疫反应的分子。上述免疫反应可伴随抗体的产生或特异性免疫活性细胞的活化，或者两者兼而有之。
[0023]在本说明书中，术语“互补决定区(CDR，complementarity determining region)”是指免疫球蛋白重链及轻链的高变区(hypervariable region)的氨基酸序列(Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,4th Ed.,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))。重链(重链的互补决定区1(CDRH1)、重链的互补决定区2(CDRH2)及重链的互补决定区3(CDRH3))及轻链(轻链的互补决定区1(CDRL1)、轻链的互补决定区2(CDRL2)及轻链的互补决定区3(CDRL3))分别包含3个互补决定区(CDRs)。互补决定区提供当抗体与抗原或表位结合时关键的接触残基。
[0024]在本说明书中，术语“抗原结合片段(antigen binding fragment)”是指具有抗原结合功能的片段，包含Fab、F(ab
’
)、F(ab
’
)2及Fv等。在抗体片段中，Fab(fragment antigen binding)为具有轻链可变区及重链可变区和轻链恒定区及重链恒定区1(C
H1
)的结构，具有1个抗原结合部位。Fab
’
与Fab的不同之处在于，Fab
’
具有在重链恒定区1的C
‑
末端包含一个以上的胱胺酸残基的铰链区(hinge region)。F(ab
’
)2抗体通过Fab
’
铰链区的胱胺酸残基形成二硫键来生成。Fv为仅具有重链可变部位及轻链可变部位的最小抗体片段，生成Fv片段的重组技术是本领域的公知技术。在双链Fv(two
‑
chain Fv)中，重链可变部位与轻链可变部位以非共价键相连接，在单链Fv(single
‑
chain variable fragment，scFv)中，通常通过连接肽，重链可变区与单链可变区以共价键相连接或者在C
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末端直接连接，由此，可入双链Fv形成如二聚体的结构。可利用蛋白水解酶获取上述抗体片段(例如，若利用木瓜蛋白酶限制性切割整个抗体，则可获取Fab，若利用胃蛋白酶切割整个抗体，则可获取F(ab
’
)2)，或者可通过基因重组技术制备上述抗体片段。
[0025]并且，本专利技术的抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fvs(scFV)、单链抗体、Fab片段、F(ab
’
)片段、二硫键Fvs(sdFV)及本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含重链可变区以及轻链可变区，上述重链可变区包含下述i)、ii)以及iii)，上述轻链可变区包含下述vi)、v)以及vi)，i)包含下述氨基酸序列的重链的互补决定区1：X1YAMX5，其中，各自独立地，X1为D、S或N，X5为N、H或S，ii)包含序列12、序列13或下述氨基酸序列的重链的互补决定区2：AISSX5GX7X8X9YYADSVKG，其中，各自独立地，X5为S或T，X7为S或G，X8为S或T，X9为I、T或K，iii)包含选自序列15至序列23中的一种氨基酸序列的重链的互补决定区3，iv)包含下述氨基酸序列的轻链的互补决定区1：RASQSIX7X8X9LN，其中，各自独立地，X7为S或G，X8为R、N或S，X9为D或Y，v)包含下述氨基酸序列的轻链的互补决定区2：AX2SX4LQS，其中，各自独立地，X2为A或T，X4为S、N、R或T，vi)包含下述氨基酸序列的轻链的互补决定区3：QQSX4SX6PX8T，其中，各自独立地，X4为Y或E，X6为T、F或Y，X8为Y、W，L或F。2.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链的互补决定区1包含选自序列1至序列7中的一种氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链的互补决定区2包含选自序列8至序列14中的一种氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链的互补决定区1包含选自序列32至序列36中的一种氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链的互补决定区2包含选自序列37至序列42中的一种氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链的互补决定区3包含选自序列43至序列47中的一种氨基酸序列。7.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链可变区包含重链的骨架区1，上述重链的骨架区1包含选自序列24至序列26中的一种氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链可变区包含重链的骨架区2，上述重链的骨架区2包含序列27的氨基酸序列。9.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链可变区包含重链的骨架区3，上述重链的骨架区3包含序列28或序列29的氨基酸序列。10.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述重链可变区包含重链的骨架区4，上述重链的骨架区4包含序列30的氨基酸序列。11.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链可变区包含轻链的骨架区1，上述轻链的骨架区1包含序列48的氨基酸序列。12.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链可变区包含轻链的骨架区2，上述轻链的骨架区2包含序列49的氨基酸序列。13.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链可变区包含轻链的骨架区3，上述轻链的骨架区3包含序列50的氨基酸序列。14.根据权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述轻链可变区包含轻链的骨架区4，上述轻链的骨架区4包含序列51的氨基酸序列。15.一种融合蛋白，其特征在于，包含权利要求1所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段。16.一种嵌合抗原受体多肽，其特征在于，包含：(a)L1细胞粘附分子结合域；(b)跨膜结构域；(c)共刺激结构域；以及(d)细胞内信号转导结构域。17.根据权利要求16所述的嵌合抗原受体多肽，其特征在于，上述L1细胞粘附分子结合域包含权利要求1至14中任一项所述的抗
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L1细胞粘附分子抗体或其抗原结合片段。18.根据权利要求16所述的嵌合抗原受体多肽，其特征在于，上述跨膜结构域包含选自由T
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细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137以及CD154组成的组中的蛋白质的跨膜结构域。19.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：JA，
申请(专利权)人：克替思株式会社，
类型：发明
国别省市：