一种高纯度莨菪亭的分离制备方法技术

本发明专利技术提供一种高纯度莨菪亭的分离制备方法，是通过亚临界提取除去枸杞中的小极性化合物，再将提取残渣用乙醇提取得到含莨菪亭的乙醇提取物，以醇、盐和水组成的双水相溶剂为溶剂系统，利用高速逆流色谱(HSCCC)对高纯度的莨菪亭进行分离制备，然后利用含聚苯乙烯基的MCI树脂对逆流色谱分离得到的含莨菪亭的流份进行除盐和纯化。本发明专利技术利用亚临界提取除去枸杞中的小极性成分，利用乙醇提取莨菪亭成分，利用HSCCC色谱分离纯化莨菪亭，利用MCI脱除无机盐，然后用无水乙醇进行重结晶得到高纯度的莨菪亭单体化合物。整个工艺过程均使用的绿色溶剂，克服了传统色谱分离过程中有机溶剂毒性危害和环境污染的风险。毒性危害和环境污染的风险。毒性危害和环境污染的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度莨菪亭的分离制备方法


[0001]本专利技术属于天然产物制备
，具体涉及一种高纯度莨菪亭的分离制备方法。

技术介绍

[0002]枸杞(Lycium barbarum)属于茄科枸杞属落叶灌木的浆果，始载于《神农本草经》被列为上品，谓之：“久服坚筋骨，轻身不老，耐寒暑”，枸杞子味甘、性平、归肝、肾经，具有滋补肝肾、益精明目、润肺止咳、延缓衰老等功效。
[0003]目前对枸杞的化学成分研究报道主要集中在枸杞多糖、黄酮类化合物和生物碱类，对于枸杞中的香豆素成分报道比较少。研究发现，枸杞中的香豆素成分莨菪亭具有很高的药用价值，包括抑制人前列腺细胞增殖与诱导凋亡、抑制血管内皮细胞再生、抗炎、抗抑郁等。越来越多的研究者将莨菪亭作为枸杞色素发挥生理活性的主要指标，用以衡量枸杞提取物的品质。因此，提取分离高纯度的莨菪亭(HPLC≥98％)用于枸杞相关产品品质检测的对照品成为该领域研究的热点。
[0004]目前，关于枸杞中分离制备高纯度莨菪亭的相关研究较少，申请号为201710400526.2的中国专利技术专利“一种从顶花板凳果中提取东莨菪亭的方法”中利用硅胶柱色谱，以石油醚
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乙酸乙酯等为洗脱系统，经过三次以上柱层析分离得到99％的东莨菪亭单体化合物。但该方法操作繁琐，且操作过程中石油醚、乙酸乙酯等溶剂系统容易挥发，制备过程污染环境，为非绿色过程。
[0005]李小多等发表了高速逆流色谱法快速分离制备枸杞中莨菪亭的方法，将枸杞的乙醇提取物经D
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101大孔树脂初步纯化后直接进行高速逆流色谱分离，利用为氯仿
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甲醇
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水(10：7：3，v/v/v)分离制备得到纯度达到98.3％的莨菪亭。该方法比硅胶柱色谱有所改进，但同样存在毒性有机溶剂氯仿和甲醇的大量使用的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种高纯度莨菪亭的分离制备方法，从而高效的从枸杞中分离高纯度莨菪亭，并克服了传统色谱分离过程中有机溶剂毒性危害和环境污染的风险。
[0007]本专利技术所提供的高纯度莨菪亭的分离制备方法，是通过亚临界提取除去枸杞中的小极性化合物，再将提取残渣用乙醇提取得到含莨菪亭的乙醇提取物，利用含聚苯乙烯基的MCI树脂对含莨菪亭的乙醇提取物进行分离富集得到莨菪亭分离部位，然后利用高速逆流(HSCCC)溶剂系统溶解后注入HSCCC中，利用含醇溶液和盐溶液组成双水相溶剂系统实现高纯度莨菪亭的分离制备。
[0008]作为实施例的一种具体记载，本专利技术的方法包括如下的步骤：
[0009]1)将枸杞粉碎后，用正丁烷作为萃取剂进行亚临界萃取；萃取后的残渣使用95％乙醇回流提取，得到含莨菪亭的乙醇提取物；
[0010]萃取条件是温度为40
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50℃，萃取压力为0.2
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0.3Mpa；乙醇回流提取的料液比为1:
6～1:10；
[0011]2)将醇溶剂、无机盐和水制成双水相溶剂系统作为高速逆流色谱(HSCCC)的溶剂系统，当高速逆流色谱的螺旋管柱中的两相之间达到流体动力学平衡后，将含莨菪亭的乙醇提取物利用等比例的双水相溶剂系统的上、下两相溶剂溶解，通过样品阀注射到HSCCC螺旋管柱中，在25
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50℃下进行莨菪亭的分离，利用紫外可见波长检测器，在365nm波长下，根据色谱图收集莨菪亭的洗脱液，得莨菪亭流份；
[0012]所述的醇溶剂，为小分子亲水性有机溶剂，例如乙醇、丙醇或丁醇。
[0013]所述无机盐为Na2CO3,Na2HPO4,NaH2PO4,Na2SO4,(NH4)2SO4,K2HPO4,KH2PO4中的至少一种；
[0014]所述的双水相溶剂系统中醇溶剂的体积百分比浓度为15
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30％(V/V)，盐的浓度为15
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35％(W/V)。
[0015]所述HSCCC的分离模式为反相模式或正相模式，优选反相模式；
[0016]3)将分离的莨菪亭流份注入MCI柱，用去离子水洗脱除去莨菪亭流份的无机盐，然后用80％乙醇洗脱得到莨菪亭，减压回收溶剂，利用无水乙醇重结晶即可析纯度≥99.5％的莨菪亭。
[0017]本专利技术利用亚临界提取除去枸杞中的小极性成分，利用乙醇提取莨菪亭成分，利用MCI和HSCCC分离纯化莨菪亭，利用MCI脱除HSCCC莨菪亭流份的无机盐，然后用无水乙醇进行重结晶得到高纯度的莨菪亭单体化合物。整个工艺过程均使用的绿色溶剂，克服了传统色谱分离过程中有机溶剂毒性危害和环境污染的风险，为高纯度莨菪亭的快速、连续、高效制备提供了一种绿色、可行的方案。
附图说明
[0018]图1为莨菪亭乙醇提取物的HPLC色谱图；
[0019]图2为专利技术方法的HSCCC分离色谱图；
[0020]图3为分离得到的莨菪亭单体的HPLC色谱图。
具体实施方式
[0021]本专利技术所提供的一种高纯度莨菪亭的分离制备方法，是首先以枸杞为原料，通过亚临界提取除去枸杞中的小极性化合物，将提取残渣用乙醇提取，得到含莨菪亭的乙醇提取物，利用含聚苯乙烯基的MCI树脂对莨菪亭进行分离富集得到莨菪亭分离部位，然后利用高速逆流(HSCCC)溶剂系统溶解后注入HSCCC中，利用含醇溶液和盐溶液组成双水相绿色溶剂系统实现高纯度莨菪亭的分离制备。该方法简单、快速。整个分离过程均为使用的绿色溶剂，为纯绿色工艺，克服了传统色谱分离过程中有机溶剂毒性危害和环境污染的风险。
[0022]下面结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述。
[0023]实施例1：
[0024]1)称取粉碎后的枸杞1kg，投入亚临界萃取釜内，然后加入正丁烷使其没过原料，进行亚临界萃取，萃取温度为45℃，萃取压力为0.25MPa。萃取结束后，取萃取后的残渣使用95％乙醇回流提取，料液比为1:8，提取时间为2h，提取2次。回收提取溶剂得莨菪亭提取物50g，其中莨菪亭的提取率为95％(图1)。
[0025]2)将一定比例的乙醇、(NH4)2SO4和水制成双水相溶剂系统，其中乙醇的浓度为28％(V/V)，(NH4)2SO4的浓度为16％(W/V)。以溶剂系统的上相泵入HSCCC螺旋管柱。当溶剂完全充满螺旋管柱后，HSCCC以一定速度旋转，将下相按照“头
→
尾”的洗脱模式以2ml/min泵入螺旋管柱中。当螺旋管柱中的两相之间达到流体动力学平衡后，将500mg莨菪亭乙醇提取物利用10ml等比例的上相和下相的混合溶剂溶解，通过样品阀注射到HSCCC螺旋管柱中。利用紫外可见波长检测器，在365nm波长下，根据色谱图(图2)收集莨菪亭的洗脱液，收集出峰的流份。通过HPLC检测，确定300
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350min的色谱峰为莨菪亭。根据HPLC检测，表明莨菪亭得率为枸杞原料中的90％，纯度为97.53％。
[0026]3)将莨菪亭流份注入MCI柱，用去离子水洗脱，除去莨菪亭流份的无机盐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高纯度莨菪亭的分离制备方法，其特征在于，所述的方法是通过亚临界提取除去枸杞中的小极性化合物，再将提取残渣用乙醇提取得到含莨菪亭的乙醇提取物，以醇、盐和水组成的双水相溶剂为溶剂系统，利用高速逆流色谱对高纯度的莨菪亭进行分离制备，然后利用含聚苯乙烯基的MCI树脂对逆流色谱分离得到的含莨菪亭的流份进行除盐和纯化。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)将枸杞粉碎后，用正丁烷作为萃取剂进行亚临界萃取；萃取后的残渣使用95％乙醇回流提取，得含莨菪亭的乙醇提取物；2)将醇、无机盐和水制成双水相溶剂系统作为高速逆流色谱的溶剂系统，当高速逆流色谱的螺旋管柱中的两相之间达到流体动力学平衡后，将含莨菪亭的乙醇提取物利用等比例的双水相溶剂系统的上、下两相溶剂溶解，通过样品阀注射到高速逆流色谱的螺旋管柱中，在25
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50℃下进行莨菪亭的分离，利用紫外可见波长检测器，在365nm波长下，根据色谱图收集莨菪亭的洗脱液，得莨菪亭流份；3)将分离的莨菪亭流份注入MCI柱，用去离子水洗脱除去莨菪亭流份的无机盐，然后用80％乙醇洗脱得到莨菪亭，减压回收溶剂，利用无水乙醇重结晶即制得莨菪亭。3.如权利要求2所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：邸多隆，裴栋，王宁丽，刘建飞，
申请(专利权)人：中国科学院兰州化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：