一种流式荧光检测试剂的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种流式荧光检测试剂的质量检测方法，该方法包括以下步骤：(1)分别采集待检流式荧光检测试剂的至少以下三个质控指标：a)荧光标记度；b)染色指数；c)抗体均一性；(2)将采集到的各质控指标的检测值与相应的预设值进行一一比较，根据比较结果判断待检流式荧光检测试剂是否合格。本发明专利技术采用荧光标记度、染色指数和抗体均一性这三个质控指标对待检流式荧光检测试剂进行质量控制，所有质控指标均合格的待检流式荧光检测试剂为合格品。经过本发明专利技术的质量检测方法判断为合格的流式荧光检测试剂批次间性能稳定、染色稳定性佳，荧光信号好、信噪比高。

【技术实现步骤摘要】
一种流式荧光检测试剂的质量检测方法
本专利技术属于流式荧光
，特别涉及一种流式荧光检测试剂的质量检测方法。
技术介绍
流式荧光技术是基于编码微球和流式技术的一种临床应用型高通量发光检测技术，该技术有机整合了荧光编码微球、激光检测、应用流体学、高速数字信号处理技术等多项技术，具有多指标联合检测、通量高、速度快、标本用量少等诸多优点，且既能检测蛋白也能检测核酸、既适用于临床检验也适用于科研实验，应用领域十分广泛。在流式荧光技术中，用于检测目标抗原的荧光抗体的质量是确保检测结果准确有效的一大决定因素，对荧光抗体进行质量控制有利于技术实施的标准化和规范化。当前，本领域普遍采用中华人民共和国医药行业标准《YY/T1184-2010》对流式细胞仪用单克隆抗体试剂进行质量控制，该标准《YY/T1184-2010》仅仅对流式细胞仪用单克隆抗体试剂的以下三个指标做了要求，即：(1)批内精密度：即试剂对同一样本重复检测(n＝10)，检测结果应符合：a)阳性百分比大于等于30％时，CV值不大于8％；或b)阳性百分比小于30％时，CV值不大于15％；或c)平均荧光强度CV值应不大于10％(以荧光强度报告结果时)；(2)批间精密度：即三个批号的试剂对同一样本的检测结果应符合：a)阳性百分比大于等于30％时，CV值不大于8％；或b)阳性百分比小于30％时，CV值不大于15％；或c)平均荧光强度CV值应不大于10％(以荧光强度报告结果时)；(3)染色稳定性：即使用试剂对样本进行染色后，在生产企业规定的时间内重复检测，前后两次检测结果的差异相对于前一次检测的结果变化应符合：a)阳性百分比大于等于30％时，相对偏差值应不大于10％；b)阳性百分比为10％～30％时，相对偏差值应不大于20％；c)阳性百分比小于10％时，相对偏差值应不大于30％；d)平均荧光强度相对偏差值应不大于10％(以荧光强度报告结果时)。然而，具有不同信噪比的荧光抗体在采用当前行业标准进行质量控制时，虽然能获得相似的批间精密度和批内精密度数据，但显然信噪比较低的荧光抗体在实际应用过程中存在诸多问题，这就使得目前对流式荧光检测试剂的质量控制方法对不合格品的检出率还较低。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是提供一种流式荧光检测试剂的质量检测方法，采用该质量检测方法对待检流式荧光检测试剂(包括抗体或其他蛋白)进行质量评价，评价结果更为精准。为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种流式荧光检测试剂的质量检测方法，包括以下步骤：(1)分别采集待检流式荧光检测试剂的至少以下三个质控指标：其中，Abslabel表示标记用荧光染料在其最大吸收峰处的吸光度(Absorbanceoflabelingdyeattheabsorbancemaximumoflabelingdye)，eTarget表示被标记检测试剂的摩尔消光系数(molarextinctioncoefficientincm-1M-1oflabeledantibodyorprotein)，AbsTarget表示被标记检测试剂在其最大吸收峰处的吸光度(Absorbanceoflabeledantibodyorproteinattheabsorbancemaximumoflabeledantibodyorprotein；forantibodyandprotein，itis280nm)，CorrectionFactorTarget表示标记用荧光染料在被标记检测试剂的最大吸收峰处的吸光度的校正因子(correctionfactorforthefluorophore’scontributiontotheabsorbanceattheabsorbancemaximumoflabeledantibodyorprotein；forantibodyandprotein，itis280nm)；b)染色指数：c)抗体均一性；(2)将采集到的各质控指标的检测值与相应的预设值进行一一比较，根据比较结果判断待检流式荧光检测试剂是否合格。本专利技术中，采用荧光标记度、染色指数和抗体均一性这三个质控指标对待检流式荧光检测试剂进行质量控制，其中，荧光标记度的预设值在2～10之间，若荧光标记度的检测值落入该预设值范围内，则该质控指标合格；染色指数的预设值为20，若染色指数的检测值大于等于20，则该质控指标合格；抗体均一性的预设值为90％，若抗体均一性的检测值大于等于90％，则该质控指标合格；作为优选，所有质控指标均合格的待检流式荧光检测试剂为合格品。经过本专利技术的质量检测方法判断为合格的流式荧光检测试剂批次间性能稳定、染色稳定性佳，荧光信号好、信噪比高。作为优选，在上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法中，步骤(1)中，采用采用全波长酶标仪(如)MultiskanSky赛默飞全波长酶标仪，或与其具有相同功能的其他酶标仪)对待检流式荧光检测试剂的荧光标记度进行检测。作为优选，在上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法中，步骤(1)中，采用流式荧光技术对待检流式荧光检测试剂的染色指数进行检测。在上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法中，若待检流式荧光检测试剂的染色指数不合格，则分别对待检流式荧光检测试剂以及未经荧光标记的同克隆抗体进行效价测试，并将二者的测试结果进行比较，根据比较结果判断待检流式荧光检测试剂是否合格。即，若待检流式荧光检测试剂的染色指数的检测值小于20，则分别对待检流式荧光检测试剂以及未经荧光标记的同克隆抗体进行效价测试，分别检测待检流式荧光检测试剂与抗原的结合活性、未经荧光标记的同克隆抗体与抗原的结合活性，若二者与抗原的结合活性差异小于10％，则该质控指标仍为合格。作为优选，在上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法中，通过ELISA或流式细胞术(流式封闭实验)进行效价测试。作为优选，在上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法中，步骤(1)中，采用快速蛋白液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳或质谱对待检流式荧光检测试剂的抗体均一性进行检测。对待检流式荧光检测试剂的抗体均一性进行检测时，需要确保液相中未形成大的聚合物且成分较为均一，均一性大于等于90％。本专利技术中，上述的流式荧光检测试剂的质量检测方法还包括以下步骤：(3)采用荧光信号系数对已判断为合格品的流式荧光检测试剂进行评分；荧光信号系数越高，则该流式荧光检测试剂合格品的质量越优。与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：本专利技术中，采用荧光标记度、染色指数和抗体均一性这三个质控指标对待检流式荧光检测试剂进行质量控制，其中，荧光标记度的预设值在2～10之间，若荧光标记度的检测值落入该预设值范围内，则该质控指标合格；染色指数的预设值为20，若染色指数的检测值大于等于20，则该质控指标合格；抗体均一性的预设值为90％，若抗体均一性的检测值大于等于90％，则该质控指标合格；作为优选，所有质控指标均合格的待检流式荧光检测试剂为合格品，经过本专利技术的质量检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种流式荧光检测试剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)分别采集待检流式荧光检测试剂的至少以下三个质控指标：/na)荧光标记度：/n

【技术特征摘要】
1.一种流式荧光检测试剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别采集待检流式荧光检测试剂的至少以下三个质控指标：
a)荧光标记度：



其中，Abslabel表示标记用荧光染料在其最大吸收峰处的吸光度，eTarget表示被标记检测试剂的摩尔消光系数，AbsTarget表示被标记检测试剂在其最大吸收峰处的吸光度，CorrectionFactorTarget表示标记用荧光染料在被标记检测试剂的最大吸收峰处的吸光度的校正因子；
b)染色指数：



c)抗体均一性；
(2)将采集到的各质控指标的检测值与相应的预设值进行一一比较，根据比较结果判断待检流式荧光检测试剂是否合格。


2.如权利要求1所述的流式荧光检测试剂的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，采用全波长酶标仪对待检流式荧光检测试剂的荧光标记度进行检测。


3.如权利要求1所述的流式荧光检测试剂的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，采用流式荧光技术对待检流式荧光检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，盖聪，
申请(专利权)人：浙江正熙生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33