一种汉麻内生菌的分离方法技术

一种汉麻内生菌的分离方法，它涉及一种汉麻内生菌的分离方法。本发明专利技术的目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一汉麻内生菌的分离方法。为植物病害的生物防治提供了理论基础，为开发潜在有利的新型药用化合物提供科学依据。方法：一、样品的采集；二、样品预处理；三、表面消毒；四、汉麻内生菌分离纯化。本发明专利技术用于汉麻内生菌的分离。

【技术实现步骤摘要】
一种汉麻内生菌的分离方法
本专利技术涉及一种汉麻内生菌的分离方法。
技术介绍
植物内生菌的种类和数量受宿主植物种类和外在环境影响很大。不同植物菌种不同，同种植物不同地点、不同温度、不同环境菌种不同，即使同一植物不同时间菌种也会不同。内生菌的这个特点使得菌种更加多种多样。内生菌一词最早来源于19世纪，100多年前Vogl从黑麦草种子中分离内生菌，但其生长环境独特，其存在一直被人们所忽视。直到1993年美国学者从短叶紫衫树皮的内生菌次级代谢物中分离出紫杉醇和紫杉烷类化合物后，药用植物内生菌的研究才开始受到普遍的关注。作为一种微生物新资源，其生长周期短、代谢易于控制、菌种易于选育及可通过大规模发酵实现工业化生产等的优点使人们对其日益关注，从中寻找活性成分逐渐成为研宄的热点。汉麻是桑科属一年生草本植物，英文名Hemp，世界各地均有栽培。麻仁润滑肠道，通便，雌花和叶止咳定喘，解痉止痛。大麻纤维具有抗菌、除臭的作用，根据国内外有关研究报告，大麻纤维制品对金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，绿脓杆菌，白色念珠菌等有明显的杀灭、抑制作用。大麻作物生长无需任何化学本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种汉麻内生菌的分离方法，其特征在于汉麻内生菌的分离方法具体按以下步骤进行：/n一、样品的采集：从植株茂盛、无病虫害的汉麻上采集新鲜的叶，每株采集4～5片；/n二、样品预处理：将采集好的新鲜植物用清水洗净并将其叶切成0.25cm×0.25cm的组织块，对组织块的表面进行处理后，表面干燥，得到预处理后的叶片；/n三、表面消毒：先用自来水将预处理后的叶片冲洗干净，然后采用下述方法进行表面消毒：先采用0.1％升汞溶液漂洗10～30s，再采用无菌水冲洗3～5次，然后采用75％酒精漂洗30～60s，最后再采用无菌水冲洗3～5次，该次无菌水冲洗后的无菌水保留；在无菌操作条件下将清洗后的叶片切成0.2c...

【技术特征摘要】
1.一种汉麻内生菌的分离方法，其特征在于汉麻内生菌的分离方法具体按以下步骤进行：
一、样品的采集：从植株茂盛、无病虫害的汉麻上采集新鲜的叶，每株采集4～5片；
二、样品预处理：将采集好的新鲜植物用清水洗净并将其叶切成0.25cm×0.25cm的组织块，对组织块的表面进行处理后，表面干燥，得到预处理后的叶片；
三、表面消毒：先用自来水将预处理后的叶片冲洗干净，然后采用下述方法进行表面消毒：先采用0.1％升汞溶液漂洗10～30s，再采用无菌水冲洗3～5次，然后采用75％酒精漂洗30～60s，最后再采用无菌水冲洗3～5次，该次无菌水冲洗后的无菌水保留；在无菌操作条件下将清洗后的叶片切成0.2cm×0.2cm长段，种植于PDA培养基中，在温度为27～29℃的条件下置于温箱静止培养5～7d；然后将保留的冲洗后的无菌水涂于PDA培养基中，继续在温度为27～29℃条件下置于温箱培养，直至表面消毒完全，得到消毒好的叶；
四、汉麻内生菌分离纯化：将消毒好的叶切成小块后分成两份，一份接种于真菌分离培养基中进行组织培养，一份接种于细菌分离培养基中进行组织培养；组织培养方式：每个平板接种4～5个组织块，接种5个平板，将其分成两组分别置于28℃和37℃恒温培养箱中培养3～7d；待组织块周围长出菌落后，采用接种环挑取不同的菌落，划线法接种于同种平板培养基中进行分离培养，反复接种2～3次后，挑取单菌落的菌丝体或细胞在显微镜下观察无杂...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琼，王雷，曹涤非，李瑶，孙尧，孙鑫，薛佳莹，黄国庆，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院高技术研究院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23